Validace metody RealAmp pro diagnostiku malárie v endemických oblastech Brazílie

Na celém světě žijí přibližně 2 miliardy lidí v oblastech ohrožených malárií s nemocností přesahující 250 milionů případů s přibližně 800 000 úmrtími ročně. Ze čtyř druhů parazitů malárie, kteří způsobují infekci člověka, je P. falciparum odpovědný za většinu závažných případů malárie následovaných P. vivax. Včasná a přesná diagnóza je nezbytná pro rychlou a správnou léčbu, která může snížit úmrtnost a přerušit přenos. V současné době mezi konvenční metody diagnostiky malárie patří mikroskopické vyšetření tenkých a tlustých krevních nátěrů a rychlé diagnostické testy (RDT). Světelná mikroskopie v praxi typicky detekuje parazitémii již od 100 parazitů/µl a dokáže rozlišit druhy. Výhodou mikroskopie je schopnost odhadnout parazitémii, možnost identifikace stádií parazitů včetně gametocytů a její nízká cena. Tato metoda je však náročná na práci, obtížně se standardizuje a vyžaduje dobře vyškolené mikroskopy. Většina RDT je ​​založena na detekci antigenu proteinu 2 bohatého na histidin (HRP-2) P. falciparum a nedetekuje všechny druhy malárie. RDT, které detekují laktózadehydrogenázu (LDH) a aldolázu obecně široce reagují se všemi čtyřmi druhy parazitů malárie, a proto se nemohou mezi druhy rozlišovat, ačkoli se usilují o zlepšení jejich výkonnosti pro detekci druhů. V prostředí, kde kocirkuluje více druhů malárie, mohou být molekulární metody spolehlivější než mikroskopie a RDT při přesné diagnostice druhů parazitů malárie s nízkými parazitémiemi. Konvenční molekulární metody, jako je nested polymerázová řetězová reakce (nested PCR) nebo real-time PCR, jsou však technicky náročné a náročné na zdroje a jsou obecně omezeny na referenční laboratoře kvůli potřebě dobře vybavených laboratoří. Nedávno byly vyvinuty nové molekulární metody, které lze použít v terénu, a to otevírá nové možnosti pro zkoumání molekulárních nástrojů pro diagnostiku malárie v endemických zemích. S cílem usnadnit použití molekulárních nástrojů pro programy kontroly malárie vyvinula laboratoř malárie v Centres for Disease Control and Prevention (CDC) v Atlantě v USA jednoduchou izotermickou molekulární metodu nazvanou Real-Time Fluorescence Loop-Mediated Isothermal Amplification (RealAmp). ) pro diagnostiku malárie. V současné době existují primery RealAmp pro detekci rodu Plasmodium a detekci druhů P. falciparum a P. vivax. Metoda RealAmp má velký potenciál jako molekulární nástroj pro diagnostiku malárie v terénu (a dalších infekcí s velkým dopadem na veřejné zdraví, jako je HIV a tuberkulóza). Může poskytnout alternativu ke konvenčním diagnostickým metodám založeným na PCR pro terénní použití v klinických a operačních programech. Cílem tohoto návrhu je ověřit citlivost RealAmp pro detekci parazitů malárie v krevních skvrnách od pacientů s klinickou diagnózou malárie ve dvou endemických státech Brazílie s kocirkulací P. falciparum a P. vivax. V tomto hodnocení bude RealAmp a mikroskopické vyšetření porovnáno s metodou PCR v reálném čase jako referenčním testem.