Validering af RealAmp-metoden til diagnosticering af malaria i endemiske områder i Brasilien

På verdensplan lever cirka 2 milliarder mennesker i områder med risiko for malaria med en sygelighed, der overstiger 250 millioner tilfælde, med cirka 800.000 dødsfald om året. Af de fire arter af malariaparasitter, der forårsager infektion hos mennesker, er P. falciparum ansvarlig for størstedelen af ​​alvorlige malariatilfælde efterfulgt af P. vivax. Tidlig og præcis diagnose er afgørende for hurtig og korrekt behandling, som kan reducere dødsraten og afbryde transmissionen. I øjeblikket omfatter konventionelle metoder til diagnosticering af malaria mikroskopisk undersøgelse af tynde og tykke blodudstrygninger og hurtige diagnostiske tests (RDT'er). Lysmikroskopi i praksis påviser typisk parasitæmi så lavt som 100 parasitter/µl, og det kan differentiere arter. Fordelen ved mikroskopi inkluderer evnen til at estimere parasitæmi, muligheden for at identificere parasitstadier, herunder gametocytter, og dens lave omkostninger. Denne metode er dog arbejdskrævende, svær at standardisere og kræver veluddannede mikroskopister. Størstedelen af ​​RDT'er er baseret på påvisning af P. falciparum histidin-rigt protein 2 (HRP-2) antigen og påviser ikke alle malariaarter. RDT'er, der detekterer lactosedehydrogenase (LDH) og aldolase, reagerer generelt bredt med alle fire arter af malariaparasitter og kan derfor ikke skelne mellem arterne, selvom der er bestræbelser på at forbedre deres ydeevne til artspåvisning. I omgivelser, hvor flere malariaarter cirkulerer sammen, kan molekylære metoder være mere pålidelige end mikroskopi og RDT'er til nøjagtigt at diagnosticere arter af malariaparasitter med lave parasitemier. Konventionelle molekylære metoder, såsom indlejret polymerasekædereaktion (nested PCR) eller real-time PCR, er imidlertid teknisk udfordrende og ressourcekrævende og er generelt begrænset til referencelaboratorier på grund af behovet for veludstyrede laboratorier. For nylig er der udviklet nye molekylære metoder, der kan bruges i feltmiljøer, og dette åbner nye muligheder for at udforske molekylære værktøjer til malariadiagnose i endemiske lande. Med det formål at lette brugen af ​​molekylære værktøjer til malariakontrolprogrammer udviklede malarialaboratoriet ved Centers for Disease Control and Prevention (CDC) i Atlanta, USA en simpel isotermisk molekylær metode kaldet Real-Time Fluorescence Loop-Mediated Isothermal Amplification (RealAmp) ) til diagnosticering af malaria. I øjeblikket eksisterer RealAmp-primere til påvisning af Plasmodium-slægten og påvisning af P. falciparum- og P. vivax-arter. RealAmp-metoden har et stort potentiale som et molekylært værktøj til diagnosticering af malaria i felten (og andre infektioner med stor indvirkning på folkesundheden, såsom HIV og tuberkulose). Det kan give et alternativ til konventionelle PCR-baserede diagnostiske metoder til feltbrug i kliniske og operationelle programmer. Formålet med dette forslag er at validere RealAmps følsomhed til påvisning af malariaparasitter i blodpletter fra patienter med klinisk diagnose malaria i to endemiske delstater i Brasilien med co-cirkulation af P. falciparum og P. vivax. I denne evaluering vil RealAmp og mikroskopisk undersøgelse blive sammenlignet med en real-time PCR-metode som referencetest.