Validierung der RealAmp-Methode zur Diagnose von Malaria in Endemiegebieten Brasiliens

Weltweit leben etwa 2 Milliarden Menschen in Malaria-Risikogebieten mit einer Morbidität von über 250 Millionen Fällen und etwa 800.000 Todesfällen pro Jahr. Von den vier Arten von Malariaparasiten, die beim Menschen Infektionen verursachen, ist P. falciparum für die Mehrzahl der schweren Malariafälle verantwortlich, gefolgt von P. vivax. Eine frühzeitige und genaue Diagnose ist für eine schnelle und korrekte Behandlung unerlässlich, wodurch die Sterblichkeitsrate gesenkt und die Übertragung unterbrochen werden kann. Zu den herkömmlichen Methoden zur Diagnose von Malaria gehören derzeit die mikroskopische Untersuchung dünner und dicker Blutausstriche sowie Schnelldiagnosetests (RDTs). In der Praxis erkennt die Lichtmikroskopie typischerweise eine Parasitämie bereits ab 100 Parasiten/µl und kann Arten differenzieren. Zu den Vorteilen der Mikroskopie gehören die Fähigkeit, Parasitämie abzuschätzen, die Möglichkeit, Parasitenstadien, einschließlich Gametozyten, zu identifizieren und ihre geringen Kosten. Diese Methode ist jedoch arbeitsintensiv, schwer zu standardisieren und erfordert gut ausgebildete Mikroskopiker. Die meisten RDTs basieren auf dem Nachweis des Histidin-reichen Protein-2-Antigens (HRP-2) von P. falciparum und erkennen nicht alle Malariaarten. RDTs, die Laktosedehydrogenase (LDH) und Aldolase nachweisen, reagieren im Allgemeinen breit mit allen vier Arten von Malariaparasiten und können daher nicht zwischen den Arten unterscheiden, obwohl Anstrengungen unternommen werden, ihre Leistung beim Artennachweis zu verbessern. In Umgebungen, in denen mehrere Malariaarten gleichzeitig zirkulieren, können molekulare Methoden bei der genauen Diagnose der Malariaparasitenarten mit geringer Parasitämie zuverlässiger sein als Mikroskopie und RDTs. Herkömmliche molekulare Methoden wie die eingebettete Polymerasekettenreaktion (nested PCR) oder die Echtzeit-PCR sind jedoch technisch anspruchsvoll und ressourcenintensiv und aufgrund des Bedarfs an gut ausgestatteten Laboren im Allgemeinen auf Referenzlabore beschränkt. Kürzlich wurden neue molekulare Methoden entwickelt, die im Feldeinsatz eingesetzt werden können, und dies eröffnet neue Möglichkeiten für die Erforschung molekularer Werkzeuge für die Malariadiagnose in endemischen Ländern. Mit dem Ziel, den Einsatz molekularer Werkzeuge für Malariakontrollprogramme zu erleichtern, entwickelte das Malarialabor der Centers for Disease Control and Prevention (CDC) in Atlanta, USA, eine einfache isotherme molekulare Methode namens Real-Time Fluoreszenz Loop-Mediated Isothermal Amplification (RealAmp). ) zur Diagnose von Malaria. Derzeit gibt es RealAmp-Primer zum Nachweis der Gattung Plasmodium und zum Nachweis der Arten P. falciparum und P. vivax. Die RealAmp-Methode hat großes Potenzial als molekulares Werkzeug für die Diagnose von Malaria vor Ort (und anderen Infektionen mit erheblichen Auswirkungen auf die öffentliche Gesundheit, wie HIV und Tuberkulose). Es kann eine Alternative zu herkömmlichen PCR-basierten Diagnosemethoden für den Feldeinsatz in klinischen und operativen Programmen darstellen. Ziel dieses Vorschlags ist die Validierung der Empfindlichkeit von RealAmp zum Nachweis von Malariaparasiten in Blutflecken von Patienten mit klinischer Malariadiagnose in zwei endemischen Bundesstaaten Brasiliens mit gleichzeitiger Zirkulation von P. falciparum und P. vivax. In dieser Auswertung werden RealAmp und die mikroskopische Untersuchung mit einer Echtzeit-PCR-Methode als Referenztest verglichen.