Bezpečnost autologní infuze MSC k léčbě epilepsie (AMSCDRSE)

Hlavním cílem této fáze 1 klinické studie bylo vyhodnotit bezpečnost aplikace autologních mezenchymálních kmenových buněk (MSC) jako terapie lékově rezistentní symptomatické epilepsie v jednocentrické studii. Je dobře známo, že lékově rezistentní symptomatická epilepsie je dramaticky invalidizující porucha, u které aplikovaná stacionární a ambulantní terapie nemá žádný skutečný klinický účinek. Proto jsou zapotřebí nové přístupy k dosažení remise, k zastavení progrese onemocnění a ke zvýšení kvality života pacientů. Pro tuto studii byli do studie zařazeni dospělí (18-60 let) pacienti (pts) obou pohlaví trpící symptomatickou epilepsií rezistentní na léky s častými (>5 příhod za měsíc) záchvaty. Léková rezistence byla definována nedostatkem jakékoli zjevné klinické odpovědi (tj. žádné snížení frekvence záchvatů nebo snížení progrese onemocnění) pacientů se symptomatickou epilepsií na karbamazepin, kyselinu valproovou, topiramát, lamotrigin nebo fenobarbital (tj. epileptika [AED]) jako monoterapie a v různých kombinacích během předchozího kalendářního roku. Kritériem pro vyloučení bylo odmítnutí účasti pacienta, nepříznivé reakce na terapii, zánětlivé stavy CNS, chronické psychózy, nádory CNS, relapsy chronických somatických nebo neurologických onemocnění a pozitivita krve na hepatitidu B nebo C nebo HIV. Plán zahrnoval zahrnutí 30 pacientů do studijní skupiny a 30 pacientů do kontrolní skupiny po dobu 5 let. Pacienti byli randomizováni ke standardní léčbě AED (kontrolní skupina) nebo AED plus autologní mezenchymální kmenové buňky (MSC, studijní skupina). MSC byly získány ze vzorků kostní dřeně stejného pacienta a byly purifikovány a expandovány ex vivo ve specializované laboratoři buněčné biotechnologie. MSC byly charakterizovány imunofenotypizací jako buňky CD90+CD105+CD45-CD34. Po 3 týdnech kultivace in vitro byla část MSC navíc kultivována po dobu 7 dnů v proliferačním médiu Neurocult-XF, aby se získaly neuroindukované MSC. Neuroindukce byla prokázána přítomností genetických markerů nestinu a neuron-specifické enolázy. Nakonec bylo sklizeno 40 až 101 x 106 autologních kultivovaných MSC a 2,7 až 8,0 x 106 autologních neuroindukovaných MSC, resuspendováno ve fyziologickém roztoku obsahujícím 5 % autologního krevního séra pro injekci a po změření životaschopnosti (98 % buněk) přeneseno do klinického centra.

Pacienti ve studijní skupině dostali jednu pomalu podávanou (během 5–10 minut) intravenózní injekci ex vivo expandovaných autologních MSC v objemu 20 ml a o 5–7 dní později každý pacient ve studijní skupině dostal další pomalu podávanou endolumbální injekce neuroindukovaných MSC v objemu 5 ml. Hodnoceny byly jak nepříznivé reakce na injekce MSC (více než jeden den po provedení zákroku), tak časné (do jednoho měsíce) a pozdní (do 6 měsíců) klinické účinky včetně komplikací. Nepříznivé reakce na injekce MSC zahrnovaly lokální bolest nebo krvácení v místě injekce a systémové reakce centrálního nervového systému (CNS, tj. hypertermie, únava a myalgie). Byly zkoumány pozdější případné nepříznivé systémové reakce CNS a cévního systému, včetně infekčních a neinfekčních komplikací progrese kontrolovaného onemocnění. Všechny události byly zdokumentovány ve zdravotních kartách. V případech, kdy tyto události vykazovaly nebezpečné vlastnosti, byly oznámeny členům monitorovací rady (etické komise centra) k posouzení vyloučení pacientů ze studie nebo ukončení klinické studie.

Byly také hodnoceny možné příznivé účinky terapie založené na MSC u pacientů ve studijní skupině. Tyto účinky byly detekovány prostřednictvím klinických pozorování ve vybraných časových bodech terapie (tj. 3 a 12 měsíců po aplikaci terapie založené na MSC) a měřením elektroencefalografie před a jeden rok po terapii. Pro stanovení možných změn v progresi onemocnění byly hodnoceny známky kognitivního postižení, poruchy chování a změny charakteristik a frekvence záchvatů. Pro hodnocení kognitivní poruchy jsme použili Mini-Mental State Examination. Handicapující vliv nemoci na každodenní život byl bodován pomocí Subjective Handicap of Epilepsy Scale. Stav úzkosti a deprese byl hodnocen pomocí nemocniční škály úzkosti a deprese. Změny charakteristik a frekvence záchvatů byly hodnoceny pomocí stupnice závažnosti záchvatů National Hospital Scale of Seizure. Procesy dobrovolné pozornosti a výkonu byly studovány pomocí Schulteových tabulek podle metod Kraepelina. Ke studiu senzomotorických reakčních časů a distribuce a stability pozornosti byly použity Schulte tabulky. Ke studiu zdraví, únavy a stability pozornosti byla použita metoda „Account of Kraepelin“. Hodnocení krátkodobé paměti bylo provedeno metodou zapamatování 10 slov; tato metoda má za cíl určit objem a rychlost orálně-aurální paměti.

Hlavní klinické charakteristiky, které se používají pro monitorování onemocnění, byly odpovědi „ano“ nebo „ne“ (pokud jde o terapii), frekvence záchvatů (za měsíc) a remise onemocnění v časném (3 měsíce) a pozdním (12 měsíců a více) čase bodů po terapii. K vyhodnocení částečných odpovědí na terapii byly hodnoceny počty pacientů, kteří vykazovali 50% snížení frekvence záchvatů. Byl také hodnocen typ záchvatu (tj. generalizované tonicko-klonické, parciální komplexní, jednoduché parciální a více typů záchvatů) spolu se změnami typu záchvatu v průběhu léčby.

Elektroencefalografické záznamy byly prováděny při příjmu a v průběhu monitorovacího období pomocí encefalografického systému Mizar EEG 201 s registrací biopotenciálu ze 16 tělesných bodů podle schématu „10-20“. Pozorované elektrické vlny alfa, beta, theta a delta byly analyzovány v 3minutových segmentech (s dalším přepočtem pro každý 1minutový segment) před (při přijetí) a 1 rok po aplikaci MSC. Byla také vypočtena maximální frekvence alfa vln. U každého pacienta byl hodnocen spontánní stav i stav po zátěžové sondě (hyperventilace a fotostimulace). Charakteristiky elektroencefalografií (EEG) byly připisovány lokálním a difuzním kortikálním změnám. Hodnotili jsme index paroxysmality, množství lokálních a generalizovaných špiček epileptiformních vln za minutu, maximální frekvenci EEG aktivity, index pomalé aktivity a shrnuli body příznaků EEG patologie. EEG s epileptiformní aktivitou zahrnovaly hroty, pomalé vlny s hroty a hroty s vysokou amplitudou. EEG záznamy byly provedeny na základě standardních a dodatečně navržených kritérií. Všechna hodnocení byla provedena u pacientů v kontrolní a studijní skupině a získaná data byla porovnána za účelem stanovení potenciálních rozdílů v důsledku dodatečně provedené terapie na bázi MSC. Terapie pacienta byla ukončena kdykoli, pokud byly pozorovány okamžité nepříznivé reakce na injekce MSC. Závěrečná pozorování pacientů zahrnovala klinické a EEG hodnocení 12 měsíců (nebo déle) po aplikaci terapie založené na MSC. Souhrnná data pro pacienty v kontrolní a studijní skupině byla shromážděna v elektronické databázi pro další analýzu a interpretaci.