Bezpieczeństwo autologicznej infuzji MSC w leczeniu padaczki (AMSCDRSE)

Głównym celem tego badania klinicznego fazy 1 była ocena bezpieczeństwa stosowania autologicznych mezenchymalnych komórek macierzystych (MSC) jako terapii lekoopornej objawowej padaczki w badaniu jednoośrodkowym. Powszechnie wiadomo, że lekooporna padaczka objawowa jest schorzeniem dramatycznie inwalidującym, w przypadku którego stosowane terapie stacjonarne i ambulatoryjne nie mają rzeczywistego efektu klinicznego. Dlatego potrzebne są nowe podejścia, aby osiągnąć remisję, zatrzymać postęp choroby i poprawić jakość życia pacjentów. Do badania włączono dorosłych pacjentów (w wieku 18-60 lat) obu płci cierpiących na lekooporną objawową padaczkę z częstymi (> 5 napadami na miesiąc) napadami padaczkowymi. Lekooporność została zdefiniowana jako brak jakiejkolwiek widocznej odpowiedzi klinicznej (tj. braku zmniejszenia częstości napadów lub zmniejszenia progresji choroby) u pacjentów z objawową padaczką na karbamazepinę, kwas walproinowy, topiramat, lamotryginę lub fenobarbital (tj. leki przeciwpadaczkowe [LPP]) w monoterapii iw różnych kombinacjach w ciągu poprzedniego roku kalendarzowego. Kryteriami wykluczenia były: odmowa udziału pacjenta, niekorzystne reakcje na terapię, stany zapalne OUN, przewlekłe psychozy, guzy OUN, nawroty przewlekłych chorób somatycznych lub neurologicznych oraz dodatni wynik krwi w kierunku wirusowego zapalenia wątroby typu B lub C lub HIV. Plan zakładał włączenie 30 osób z grupy badanej i 30 osób z grupy kontrolnej na okres 5 lat. Pacjenci zostali losowo przydzieleni do standardowego leczenia LPP (grupa kontrolna) lub LPP plus autologiczne mezenchymalne komórki macierzyste (MSC, grupa badana). MSC uzyskano z próbek szpiku kostnego tego samego pacjenta, oczyszczono i namnażano ex vivo w specjalistycznym laboratorium biotechnologii komórkowej. MSC scharakteryzowano przez immunofenotypowanie jako komórki CD90+CD105+CD45-CD34. Po 3 tygodniach hodowli in vitro część MSC hodowano dodatkowo przez 7 dni w pożywce do namnażania Neurocult-XF w celu uzyskania neuroindukowanych MSC. Neuroindukcję potwierdzono obecnością markerów genetycznych nestyny ​​i specyficznej dla neuronów enolazy. Na koniec zebrano 40-101 x 106 autologicznych hodowanych MSC i 2,7 - 8,0 x 106 autologicznych MSC indukowanych nerwowo, ponownie zawieszono w roztworze soli zawierającym 5% autologicznej surowicy krwi do wstrzykiwań i po pomiarze żywotności (98% komórek) przeniesiono do centrum klinicznego.

Pacjenci z grupy badanej otrzymali jedną powoli podawaną (w ciągu 5-10 minut) dożylną iniekcję autologicznych komórek MSC ekspandowanych ex vivo w objętości 20 ml, a 5-7 dni później każdy pacjent z grupy badanej otrzymał dodatkowo wolno dostarczaną wstrzyknięcie śródlędźwiowe neuroindukowanych MSC w objętości 5 ml. Oceniano zarówno niekorzystne reakcje na iniekcje MSC (w ciągu jednej doby po wykonaniu zabiegów), jak i wczesne (do miesiąca) i późne (do 6 miesięcy) efekty kliniczne, w tym powikłania. Niekorzystnymi reakcjami na wstrzyknięcia MSC były miejscowy ból lub krwotok w miejscu wstrzyknięcia oraz reakcje ogólnoustrojowe ośrodkowego układu nerwowego (OUN, tj. hipertermia, zmęczenie i bóle mięśni). Zbadano późniejsze potencjalne niekorzystne reakcje ogólnoustrojowe OUN i układu naczyniowego, w tym infekcyjne i niezakaźne powikłania progresji kontrolowanej choroby. Wszystkie zdarzenia zostały udokumentowane w kartach medycznych. W przypadkach, w których zdarzenia te wykazywały cechy niebezpieczne, zgłaszano je członkom rady monitorującej (komitetu etycznego ośrodka) w celu oceny wykluczenia pacjentów z badania lub zakończenia badania klinicznego.

Oceniono również możliwe korzystne efekty terapii opartej na MSC u chorych z grupy badanej. Efekty te zostały wykryte poprzez obserwacje kliniczne w wybranych punktach czasowych terapii (tj. 3 i 12 miesięcy po zastosowaniu terapii opartej na MSC) oraz pomiary elektroencefalograficzne przed i rok po terapii. Aby określić możliwe zmiany w postępie choroby, oceniono oznaki upośledzenia funkcji poznawczych, zaburzenia zachowania oraz zmiany w charakterystyce i częstości napadów padaczkowych. Do oceny zaburzeń funkcji poznawczych wykorzystaliśmy Mini-Mental State Examination. Upośledzający wpływ choroby na życie codzienne oceniono za pomocą Skali Subiektywnego Upośledzenia Padaczki. Stan lęku i depresji oceniano za pomocą szpitalnej skali lęku i depresji. Zmiany w charakterystyce i częstości napadów oceniano za pomocą National Hospital Scale of Seizure Severity. Procesy dobrowolnej uwagi i wydajności badano za pomocą tablic Schulte zgodnie z metodami Kraepelina. Do badania czasów reakcji czuciowo-ruchowych oraz rozkładu i stabilności uwagi wykorzystano tablice Schulte'a. Metodę „Konta Kraepelina” wykorzystano do badania stanu zdrowia, zmęczenia i stabilności uwagi. Ocenę pamięci krótkotrwałej przeprowadzono metodą zapamiętywania 10 słów; metoda ta ma na celu określenie objętości i szybkości pamięci ustno-słuchowej.

Główne cechy kliniczne wykorzystywane do monitorowania choroby to odpowiedzi „tak” lub „nie” (w odniesieniu do terapii), częstość napadów (miesięczna) oraz remisja choroby we wczesnym (3 miesiące) i późnym (12 miesięcy i więcej) czasie punkty po terapii. Aby ocenić częściowe odpowiedzi na terapię, oceniono liczbę pacjentów, u których wystąpiła 50% redukcja częstości napadów. Rodzaj napadu (tj. uogólniony napad toniczno-kloniczny, częściowy złożony, prosty częściowy i wiele rodzajów napadów) był również oceniany wraz ze zmianami typu napadu w trakcie leczenia.

Zapisy elektroencefalograficzne wykonywano przy przyjęciu iw całym okresie monitorowania za pomocą systemu encefalograficznego Mizar EEG 201 z rejestracją biopotencjałów z 16 punktów ciała według schematu „10-20”. Obserwowane fale elektryczne alfa, beta, theta i delta analizowano w segmentach 3-minutowych (z dalszym ponownym obliczeniem dla każdego segmentu 1-minutowego) przed (przy przyjęciu) i 1 rok po zastosowaniu MSC. Obliczono również szczytową częstotliwość fal alfa. Dla każdego pacjenta oceniano zarówno stan spontaniczny, jak i stan po sondzie obciążającej (hiperwentylacja i fotostymulacja). Charakterystykę elektroencefalografii (EEG) przypisano miejscowym i rozproszonym zmianom korowym. Oceniliśmy wskaźnik napadowości, ilość lokalnych i uogólnionych skoków fal padaczkopodobnych na minutę, szczytową częstotliwość aktywności EEG, wskaźnik wolnej aktywności i podsumowaliśmy punkty patologii EEG. EEG z aktywnością padaczkopodobną obejmowały skoki, powolne fale i skoki o wysokiej amplitudzie. Zapisy EEG wykonano w oparciu o standardowe i dodatkowo zaproponowane kryteria. Wszystkie oceny przeprowadzono dla pacjentów z grupy kontrolnej i badanej, a uzyskane dane porównano w celu określenia potencjalnych różnic wynikających z dodatkowo przeprowadzonej terapii opartej na MSC. Terapię pacjenta zakończono w dowolnym momencie, jeśli zaobserwowano natychmiastowe niekorzystne reakcje na iniekcje MSC. Końcowe obserwacje pacjentów obejmowały oceny kliniczne i EEG po 12 miesiącach (lub więcej) od zastosowania terapii opartej na MSC. Podsumowane dane dla pacjentów z grupy kontrolnej i badanej zostały zebrane w elektronicznej bazie danych do dalszej analizy i interpretacji.