Sicurezza dell'infusione autologa di MSC per il trattamento dell'epilessia (AMSCDRSE)

L'obiettivo principale di questo studio clinico di fase 1 era valutare la sicurezza di un'applicazione di cellule staminali mesenchimali autologhe (MSC) come terapia per l'epilessia sintomatica resistente ai farmaci in uno studio monocentrico. È ben noto che l'epilessia sintomatica resistente ai farmaci è un disturbo drammaticamente invalidante per il quale le terapie stazionarie e ambulatoriali applicate non hanno un reale effetto clinico. Pertanto sono necessari nuovi approcci per raggiungere la remissione, arrestare la progressione della malattia e migliorare la qualità della vita del paziente. Per questo studio, sono stati inclusi nello studio pazienti adulti (18-60 anni) (pts) di entrambi i sessi affetti da epilessia sintomatica resistente ai farmaci con frequenti (> 5 eventi al mese). La farmacoresistenza è stata definita dalla mancanza di qualsiasi risposta clinica evidente (cioè nessuna diminuzione della frequenza delle crisi o riduzione della progressione della malattia) dei pazienti con epilessia sintomatica a carbamazepina, acido valproico, topiramato, lamotrigina o fenobarbital (cioè anti- antiepilettici [DAE]) in monoterapia e in diverse combinazioni nell'anno solare precedente. I criteri di esclusione erano il rifiuto del paziente a partecipare, reazioni sfavorevoli alla terapia, condizioni infiammatorie del SNC, psicosi croniche, tumori del SNC, recidive di malattie croniche somatiche o neurologiche e positività ematica per epatite B o C o HIV. Il piano prevedeva l'inclusione di 30 pz nel gruppo di studio e 30 pz nel gruppo di controllo per un periodo di 5 anni. I pazienti sono stati randomizzati al trattamento standard con AED (gruppo di controllo) o AED più cellule staminali mesenchimali autologhe (MSC, gruppo di studio). Le MSC sono state ottenute da campioni di midollo osseo dello stesso paziente e sono state purificate ed espanse ex vivo in un laboratorio specializzato di biotecnologia cellulare. Le MSC sono state caratterizzate mediante immunofenotipizzazione come cellule CD90+CD105+CD45-CD34. Dopo 3 settimane di coltivazione in vitro, una parte delle MSC è stata ulteriormente coltivata per 7 giorni nel mezzo di proliferazione Neurocult-XF per ottenere MSC neuroindotte. La neuroinduzione è stata dimostrata dalla presenza dei marcatori genetici nestina e dell'enolasi neurone-specifica. Infine, sono state raccolte 40-101 x 106 MSC autologhe in coltura e 2,7 - 8,0 x 106 MSC neuroindotte autologhe, risospese in soluzione fisiologica contenente il 5% di siero di sangue autologo per iniezione e, dopo una misurazione della vitalità (98% cellule), trasferite al centro clinico.

I pazienti nel gruppo di studio hanno ricevuto un'iniezione endovenosa somministrata lentamente (in 5-10 minuti) di MSC autologhe espanse ex vivo in un volume di 20 ml e 5-7 giorni dopo, ogni paziente nel gruppo di studio ha ricevuto un'ulteriore somministrazione lenta iniezione endolombare delle MSC neuroindotte in un volume di 5 ml. Sono state valutate sia le reazioni sfavorevoli alle iniezioni di MSC (oltre un giorno dopo l'esecuzione delle procedure) sia gli effetti clinici precoci (fino a un mese) e tardivi (fino a 6 mesi), comprese le complicanze. Le reazioni sfavorevoli alle iniezioni di MSC includevano dolore locale o emorragia nel sito di iniezione e reazioni sistemiche del sistema nervoso centrale (SNC, cioè ipertermia, affaticamento e mialgia). Successivamente sono state esaminate le potenziali reazioni sistemiche sfavorevoli del SNC e del sistema vascolare, comprese le complicanze infettive e non infettive della progressione della malattia da controllare. Tutti gli eventi sono stati documentati nelle schede mediche. Nei casi in cui tali eventi presentavano caratteristiche di pericolosità, venivano dichiarati ai membri del consiglio di sorveglianza (comitato etico del centro) per la valutazione dell'esclusione dei pazienti dallo studio o della cessazione dello studio clinico.

Sono stati valutati anche i possibili effetti benefici della terapia a base di MSC nei pazienti del gruppo di studio. Questi effetti sono stati rilevati tramite osservazioni cliniche in punti temporali della terapia selezionati (vale a dire, 3 e 12 mesi dopo l'applicazione della terapia basata su MSC) e misurazioni elettroencefalografiche prima e un anno dopo la terapia. Per determinare i possibili cambiamenti nella progressione della malattia, sono stati valutati i segni di deterioramento cognitivo, disturbi comportamentali e cambiamenti nelle caratteristiche e nella frequenza delle crisi. Per la valutazione del deterioramento cognitivo è stato utilizzato il Mini-Mental State Examination. L'effetto handicap della malattia sulla vita quotidiana è stato valutato utilizzando la scala dell'handicap soggettivo dell'epilessia. L'ansia di stato e la depressione sono state valutate utilizzando la scala dell'ansia e della depressione dell'ospedale. I cambiamenti nelle caratteristiche e nella frequenza delle crisi sono stati valutati utilizzando la National Hospital Scale of Seizure Severity. I processi di attenzione volontaria e performance sono stati studiati con le tavole di Schulte secondo i metodi di Kraepelin. Le tabelle di Schulte sono state utilizzate per studiare i tempi di reazione sensomotoria e la distribuzione e la stabilità dell'attenzione. Il metodo "Conto di Kraepelin" è stato utilizzato per studiare la salute, la fatica e la stabilità dell'attenzione. La valutazione della memoria a breve termine è stata effettuata tramite il metodo della memorizzazione di 10 parole; questo metodo mira a determinare il volume e la velocità della memoria orale-uditiva.

Le principali caratteristiche cliniche utilizzate per il monitoraggio della malattia erano le risposte "sì" o "no" (riguardo alla terapia), la frequenza delle crisi (al mese) e la remissione della malattia precoce (3 mesi) e tardiva (12 mesi e più) punti dopo la terapia. Per valutare le risposte parziali alla terapia, è stato valutato il numero di pazienti che hanno mostrato una riduzione del 50% nella frequenza delle crisi. Anche il tipo di crisi (cioè tonico-clonico generalizzato, parziale complesso, semplice parziale e più tipi di crisi) è stato valutato insieme ai cambiamenti nel tipo di crisi durante il corso del trattamento.

Le registrazioni elettroencefalografiche sono state eseguite al momento del ricovero e durante il periodo di monitoraggio utilizzando un sistema encefalografico Mizar EEG 201 con registrazione del biopotenziale da 16 punti corporei secondo lo schema "10-20". Le onde elettriche alfa, beta, theta e delta osservate sono state analizzate in segmenti di 3 minuti (con ulteriore ricalcolo per ciascun segmento di 1 minuto) prima (al momento del ricovero) e 1 anno dopo l'applicazione MSC. È stata calcolata anche la frequenza di picco delle onde alfa. Per ogni paziente sono stati valutati sia lo stato spontaneo che lo stato dopo il caricamento della sonda (iperventilazione e fotostimolazione). Le caratteristiche delle elettroencefalografie (EEG) sono state attribuite ad alterazioni corticali locali e diffuse. Abbiamo valutato l'indice di parossismo, le quantità di picchi locali e generalizzati di onde epilettiformi al minuto, la frequenza di picco dell'attività EEG, l'indice di attività lenta e i punti riassunti dei segni patologici EEG. Gli EEG con attività epilettiforme includevano picchi, onde lente e picchi ad alta ampiezza. Le registrazioni EEG sono state eseguite sulla base di criteri standard e proposti in aggiunta. Tutte le valutazioni sono state eseguite per i pazienti nei gruppi di controllo e di studio e i dati ottenuti sono stati confrontati per determinare le potenziali differenze dovute alla terapia basata su MSC eseguita in aggiunta. La terapia di un paziente è stata interrotta in qualsiasi momento se sono state osservate reazioni sfavorevoli immediate alle iniezioni di MSC. Le osservazioni finali dei pazienti includevano valutazioni cliniche ed EEG a 12 mesi (o più) dopo l'applicazione della terapia a base di MSC. I dati riassuntivi per i pazienti nei gruppi di controllo e di studio sono stati raccolti in un database elettronico per ulteriori analisi e interpretazioni.