Sikkerhed ved autolog MSC-infusion til behandling af epilepsi (AMSCDRSE)

Hovedmålet med dette fase 1 kliniske forsøg var at evaluere sikkerheden af ​​en autolog mesenkymal stamcelle (MSC) applikation som terapi for lægemiddelresistent symptomatisk epilepsi i et ét-center studie. Det er velkendt, at lægemiddelresistent symptomatisk epilepsi er en dramatisk invaliderende lidelse, for hvilken anvendt stationær og ambulant behandling ikke har nogen reel klinisk effekt. Derfor er nye tilgange nødvendige for at nå remission, for at stoppe sygdomsprogression og for at øge patientens livskvalitet. Til denne undersøgelse blev voksne (18-60 år gamle) patienter (pts) af begge køn, der led af lægemiddelresistent symptomatisk epilepsi med hyppige (>5 hændelser pr. måned) anfald inkluderet i undersøgelsen. Lægemiddelresistens blev defineret ved mangel på tydeligt klinisk respons (dvs. intet fald i anfaldshyppighed eller reduktion i sygdomsprogression) af pts med symptomatisk epilepsi over for carbamazepin, valproinsyre, topiramat, lamotrigin eller phenobarbital (dvs. epileptiske lægemidler[AED'er]) som monoterapier og i forskellige kombinationer i løbet af det foregående kalenderår. Kriterierne for udelukkelse var patientvægring af at deltage, ugunstige reaktioner på terapi, CNS-inflammatoriske tilstande, kroniske psykoser, CNS-tumorer, tilbagefald af kroniske somatiske eller neurologiske sygdomme og blodpositivitet for hepatitis B eller C eller HIV. Planen omfattede inklusion af 30 punkter i undersøgelsesgruppen og 30 punkter i kontrolgruppen over en periode på 5 år. Pt'erne blev randomiseret til standardbehandling med AED'er (kontrolgruppe) eller AED'er plus autologe mesenkymale stamceller (MSC'er, undersøgelsesgruppe). MSC'erne blev opnået fra knoglemarvsprøver fra den samme patient og blev oprenset og udvidet ex vivo i et specialiseret cellulært bioteknologisk laboratorium. MSC'erne blev karakteriseret ved immunfænotypning som CD90+CD105+CD45-CD34-celler. Efter 3 ugers dyrkning in vitro blev en del af MSC'en yderligere dyrket i 7 dage i Neurocult-XF-proliferationsmedium for at opnå neuroinducerede MSC'er. Neuroinduktion blev bevist ved tilstedeværelsen af ​​de genetiske markører nestin og neuronspecifik enolase. Til sidst blev 40-101 x 106 autologe dyrkede MSC'er og 2,7 - 8,0 x 106 autologe neuroinducerede MSC'er høstet, resuspenderet i saltvandsopløsning indeholdende 5% autologt blodserum til injektion, og efter en måling af levedygtigheden (98% celler), overført til det kliniske center.

Pt'erne i undersøgelsesgruppen modtog en langsomt afgivet (over 5-10 minutter) intravenøs injektion af ex vivo udvidede autologe MSC'er i et volumen på 20 ml, og 5-7 dage senere modtog hver patient i undersøgelsesgruppen yderligere en langsomt afgivet endolumbal injektion af de neuroinducerede MSC'er i et volumen på 5 ml. Både ugunstige reaktioner på MSC-injektionerne (over en dag efter udførelse af procedurerne) og de tidlige (op til en måned) og sene (op til 6 måneder) kliniske effekter, inklusive komplikationer, blev evalueret. Ugunstige reaktioner på MSC-injektionerne omfattede lokal smerte eller blødning på injektionsstedet og systemiske reaktioner i centralnervesystemet (CNS, dvs. hypertermi, træthed og myalgi). Senere blev potentielle ugunstige systemiske reaktioner af CNS og det vaskulære system, herunder infektiøse og ikke-infektiøse komplikationer af progressionen af ​​sygdommen, der skulle kontrolleres, undersøgt. Alle hændelser blev dokumenteret i lægekort. I tilfælde, hvor disse hændelser udviste farlige karakteristika, blev de erklæret for medlemmer af overvågningsudvalget (centrets etiske komité) med henblik på evaluering af udelukkelsen af ​​patienterne fra undersøgelsen eller afslutningen af ​​den kliniske undersøgelse.

De mulige gavnlige virkninger af MSC-baseret terapi blev også evalueret i undersøgelsesgruppens pt. Disse virkninger blev detekteret via kliniske observationer på udvalgte behandlingstidspunkter (dvs. 3 og 12 måneder efter anvendelsen af ​​den MSC-baserede terapi) og elektroencefalografimålinger før og et år efter behandlingen. For at bestemme de mulige ændringer i sygdomsprogression blev tegn på kognitiv svækkelse, adfærdsforstyrrelser og ændringer i anfaldskarakteristika og -frekvens evalueret. Til evaluering af kognitiv svækkelse brugte vi Mini-Mental State Examination. Sygdommens handicappede effekt på det daglige liv var scoring ved hjælp af Subjective Handicap of Epilepsy Scale. Tilstandsangst og depression blev evalueret ved hjælp af hospitalsangst- og depressionsskalaen. Ændringer i anfaldskarakteristika og hyppighed blev evalueret ved hjælp af National Hospital Scale of Seizure Severity. Processerne med frivillig opmærksomhed og ydeevne blev undersøgt med Schulte-tabeller ifølge Kraepelins metoder. Schulte-tabeller blev brugt til at studere sansemotoriske reaktionstider og fordelingen og stabiliteten af ​​opmærksomhed. "Account of Kraepelin" metoden blev brugt til at studere sundhed, træthed og stabiliteten af ​​opmærksomhed. Vurderingen af ​​korttidshukommelsen blev udført via metoden med at huske 10 ord; denne metode har til formål at bestemme volumen og hastigheden af ​​oral-aural hukommelse.

De vigtigste kliniske karakteristika, der bruges til sygdomsmonitorering, var "ja" eller "nej"-svar (med hensyn til terapi), anfaldshyppighed (pr. måned) og remission af sygdom på det tidlige (3 måneder) og sent (12 måneder og mere) tidspunkt point efter behandlingen. For at evaluere delvise responser på terapi blev antallet af pts, der udviste 50 % reduktion i anfaldshyppighed, vurderet. Anfaldstype (dvs. generaliseret tonisk-klonisk, partielt kompleks, simple partielle og flere typer anfald) blev også evalueret sammen med ændringer i anfaldstype under behandlingsforløbet.

Elektroencefalografi-optagelser blev udført ved indlæggelsen og på tværs af monitoreringsperioden ved hjælp af et Mizar EEG 201-encefalografisystem med biopotentialregistrering fra 16 kropspunkter i henhold til "10-20"-skemaet. De observerede elektriske alfa-, beta-, theta- og delta-bølger blev analyseret i 3-minutters segmenter (med yderligere genberegning for hvert 1-minuts segment) før (ved indlæggelse) og 1 år efter MSC-applikation. Topfrekvensen af ​​alfabølgerne blev også beregnet. Både den spontane tilstand og tilstanden efter belastningssonden (hyperventilation og fotostimulering) blev evalueret for hver patient. Karakteristikaene ved elektroencefalografierne (EEG) blev tilskrevet lokale og diffuse kortikale ændringer. Vi evaluerede paroxysmalitetsindekset, mængder af lokale og generaliserede spidser af epileptiforme bølger pr. minut, spidsfrekvens for EEG-aktivitet, indeks for langsom aktivitet og opsummerede punkter for EEG-patologiske tegn. EEG'er med epileptiform aktivitet inkluderede spidser, spidslangsomme bølger og spidser med høj amplitude. EEG-optagelserne blev udført baseret på standard og yderligere foreslåede kriterier. Alle vurderingerne blev udført for pt'erne i kontrol- og undersøgelsesgrupperne, og de opnåede data blev sammenlignet for at bestemme de potentielle forskelle på grund af den yderligere udførte MSC-baserede terapi. En patients terapi blev afsluttet på et hvilket som helst tidspunkt, hvis der blev observeret umiddelbare ugunstige reaktioner på MSC-injektionerne. De sidste observationer af patienterne inkluderede kliniske og EEG-vurderinger 12 måneder (eller mere) efter anvendelsen af ​​den MSC-baserede terapi. De opsummerede data for pt'erne i kontrol- og undersøgelsesgrupperne blev samlet i en elektronisk database til yderligere analyse og fortolkninger.