Hledání Helicobacter Pylori v lokalizované vulvodynii

Následující řezy z parafinových bloků byly připraveny a obarveny modifikovanou Giemsou. Imunobarvení na H. pylori bylo provedeno tak, jak je popsáno. Stručně řečeno, tkáňové řezy byly zbaveny parafinu v xylenu, rehydratovány prostřednictvím klesajících koncentrací alkoholu končících ve fosfátem pufrovaném fyziologickém roztoku (PBS) a podrobeny předběžnému ošetření proteinázou K (8 minut). Řezy byly zhášeny 3% peroxidázou vodíku, inkubovány s proteinovým blokem po dobu 15 minut při teplotě místnosti a promyty v PBS. Tkáně pak byly inkubovány s polyklonální králičí anti-H pylori protilátkou (ředění, 1:10; klon ch-20 429, DAKO, Carpinteria, CA). Nakonec byly řezy promyty v 0,05% polysorbátu 20 v PBS, pH 7,4, a navázaná protilátka byla detekována pomocí streptavidinu a biotinylované sekundární protilátky s diaminobenzidinem jako chromogenem. Řezy byly kontrastně obarveny hematoxylinem, dehydratovány a upevněny. Negativní kontroly byly řezy ošetřeny výše uvedeným způsobem, ale místo inkubace s primární protilátkou byly inkubovány s 1% hovězím sérovým albuminem v PBS.

Vulvální biopsie sedmi dalších žen bez lokalizované vulvodynie sloužily jako zdravé kontroly.

Pozitivní a negativní kontrolní žaludeční tkáně pro imunohistochemické barvení mikroorganismů H. pylori byly získány z archivu Ústavu patologie.