Een zoektocht naar Helicobacter pylori in gelokaliseerde Vulvodynia

Daaropvolgende coupes van de paraffineblokken werden geprepareerd en gekleurd door gemodificeerd Giemsa. Immunokleuring voor H. pylori werd uitgevoerd zoals beschreven. Kortom, weefselcoupes werden van paraffine ontdaan in xyleen, gerehydrateerd door afnemende alcoholconcentraties eindigend in fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS), en onderworpen aan voorbehandeling met Proteinase K (8 minuten). De coupes werden geblust met 3% waterstofperoxidase, gedurende 15 minuten bij kamertemperatuur geïncubeerd met eiwitblok en gewassen in PBS. Weefsels werden vervolgens geïncubeerd met polyklonaal konijnen-anti-H pylori-antilichaam (verdunning, 1:10; kloon ch-20 429, DAKO, Carpinteria, CA). Tenslotte werden secties gewassen in 0,05% polysorbaat 20 in PBS, pH 7,4, en het gebonden antilichaam werd gedetecteerd met behulp van streptavidine en gebiotinyleerd secundair antilichaam met diaminobenzidine als het chromogeen. Secties werden tegengekleurd met hematoxyline, gedehydrateerd en gemonteerd. Negatieve controles waren coupes die werden behandeld zoals hierboven, maar in plaats van incubatie met het primaire antilichaam werden ze geïncubeerd met 1% runderserumalbumine in PBS.

Vulvaire biopsieën van zeven andere vrouwen zonder gelokaliseerde vulvodynie dienden als gezonde controles.

De positieve en negatieve controle maagweefsels voor de immunohistochemische kleuring van de H. pylori-micro-organismen werden verkregen uit de archieven van de afdeling Pathologie.