Поиск Helicobacter Pylori при локализованной вульводинии

Последующие срезы парафиновых блоков готовили и окрашивали модифицированным красителем Гимза. Иммуноокрашивание на H. pylori проводили, как описано. Вкратце, срезы тканей депарафинизировали в ксилоле, регидратировали путем снижения концентрации спирта, заканчивая фосфатно-солевым буфером (PBS), и подвергали предварительной обработке протеиназой К (8 минут). Срезы гасили 3% пероксидазой водорода, инкубировали с белковым блоком в течение 15 минут при комнатной температуре и промывали в PBS. Затем ткани инкубировали с поликлональным кроличьим антителом против H. pylori (разведение 1:10; клон ch-20 429, DAKO, Carpinteria, CA). Наконец, срезы промывали 0,05% полисорбатом 20 в PBS, pH 7,4, и определяли связанное антитело с использованием стрептавидина и биотинилированного вторичного антитела с диаминобензидином в качестве хромогена. Срезы контрастировали гематоксилином, обезвоживали и монтировали. Отрицательные контроли представляли собой срезы, обработанные, как указано выше, но вместо инкубации с первичным антителом их инкубировали с 1% бычьим сывороточным альбумином в PBS.

Биопсия вульвы семи других женщин без локализованной вульводинии служила контрольной группой.

Положительный и отрицательный контроль тканей желудка для иммуногистохимической окраски микроорганизмов H.pylori был получен из архива патологоанатомического отделения.