Helicobacter Pylorin etsintä paikallisessa Vulvodyniassa

Seuraavat leikkeet parafiinilohkoista valmistettiin ja värjättiin modifioidulla Giemsalla. Immunovärjäys H. pylorille suoritettiin kuvatulla tavalla. Lyhyesti sanottuna kudosleikkeistä parafiini poistettiin ksyleenissä, hydratoitiin uudelleen alentuvilla alkoholipitoisuuksilla ja päätyi fosfaattipuskuroituun suolaliuokseen (PBS) ja esikäsiteltiin Proteinaasi K:llä (8 minuuttia). Leikkeet sammutettiin 3-prosenttisella vetyperoksidaasilla, inkuboitiin proteiinilohkon kanssa 15 minuuttia huoneenlämpötilassa ja pestiin PBS:ssä. Sitten kudoksia inkuboitiin polyklonaalisen kanin anti-H pylori -vasta-aineen kanssa (laimennus, 1:10; klooni ch-20 429, DAKO, Carpinteria, CA). Lopuksi leikkeet pestiin 0,05-prosenttisessa polysorbaatti 20:ssä PBS:ssä, pH 7,4, ja sitoutunut vasta-aine havaittiin käyttämällä streptavidiinia ja biotinyloitua sekundaarista vasta-ainetta diaminobentsidiinin kromogeeninä. Leikkeet vastavärjättiin hematoksyliinillä, dehydratoitiin ja kiinnitettiin. Negatiiviset kontrollit olivat leikkeitä, joita käsiteltiin kuten edellä, mutta sen sijaan, että niitä inkuboitiin primaarisen vasta-aineen kanssa, niitä inkuboitiin 1 % naudan seerumialbumiinin kanssa PBS:ssä.

Seitsemän muun naisen vulvobiopsiat, joilla ei ollut paikallista vulvodyniaa, toimivat terveinä verrokkeina.

H. pylori -mikro-organismien immunohistokemiallisen värjäyksen positiiviset ja negatiiviset kontrollivat mahakudokset saatiin patologian laitoksen arkistosta.