Eine Suche nach Helicobacter Pylori in lokalisierter Vulvodynie

Nachfolgende Schnitte von den Paraffinblöcken wurden präpariert und mit modifiziertem Giemsa gefärbt. Die Immunfärbung für H. pylori wurde wie beschrieben durchgeführt. Kurz gesagt, Gewebeschnitte wurden in Xylol entparaffiniert, durch abnehmende Alkoholkonzentrationen, die in Phosphat-gepufferter Kochsalzlösung (PBS) endeten, rehydriert und einer Vorbehandlung mit Proteinase K (8 Minuten) unterzogen. Die Schnitte wurden mit 3 % Wasserstoffperoxidase gequencht, mit Proteinblock für 15 Minuten bei Raumtemperatur inkubiert und in PBS gewaschen. Die Gewebe wurden dann mit polyklonalem Kaninchen-Anti-Hpylori-Antikörper (Verdünnung 1:10; Klon ch-20 429, DAKO, Carpinteria, CA) inkubiert. Schließlich wurden die Schnitte in 0,05 % Polysorbat 20 in PBS, pH 7,4, gewaschen, und der gebundene Antikörper wurde unter Verwendung von Streptavidin und biotinyliertem Sekundärantikörper mit Diaminobenzidin als Chromogen nachgewiesen. Die Schnitte wurden mit Hämatoxylin gegengefärbt, dehydriert und montiert. Negative Kontrollen waren Schnitte, die wie oben behandelt wurden, aber anstatt mit dem primären Antikörper zu inkubieren, wurden sie mit 1 % Rinderserumalbumin in PBS inkubiert.

Vulvabiopsien von sieben weiteren Frauen ohne lokalisierte Vulvodynie dienten als gesunde Kontrollen.

Die positiven und negativen Kontrollmagengewebe für die immunhistochemische Färbung der H. pylori-Mikroorganismen wurden aus den Archiven der Abteilung für Pathologie erhalten.