Una búsqueda de Helicobacter Pylori en vulvodinia localizada

Se prepararon secciones posteriores de los bloques de parafina y se tiñeron con Giemsa modificada. La inmunotinción para H. pylori se realizó como se describe. En resumen, las secciones de tejido se desparafinizaron en xileno, se rehidrataron mediante concentraciones decrecientes de alcohol que terminaron en solución salina tamponada con fosfato (PBS) y se sometieron a un pretratamiento con proteinasa K (8 minutos). Las secciones se apagaron con peroxidasa de hidrógeno al 3%, se incubaron con bloque de proteínas durante 15 minutos a temperatura ambiente y se lavaron en PBS. A continuación, los tejidos se incubaron con anticuerpo policlonal de conejo anti-H pylori (dilución, 1:10; clon ch-20 429, DAKO, Carpinteria, CA). Finalmente, las secciones se lavaron en polisorbato 20 al 0,05% en PBS, pH 7,4, y el anticuerpo unido se detectó utilizando estreptavidina y anticuerpo secundario biotinilado con diaminobencidina como cromógeno. Las secciones se contrastaron con hematoxilina, se deshidrataron y se montaron. Los controles negativos eran secciones tratadas como antes, pero en lugar de incubar con el anticuerpo primario, se incubaron con albúmina de suero bovino al 1% en PBS.

Las biopsias vulvares de otras siete mujeres sin vulvodinia localizada sirvieron como controles sanos.

Los tejidos gástricos control positivo y negativo para la tinción inmunohistoquímica de los microorganismos H. pylori se obtuvieron de los archivos del Departamento de Patología.