Helicobacter Pylori keresése lokalizált vulvodyniában

A paraffin blokkokból következő metszeteket készítettünk és módosított Giemsa-val festettük. A H. pylori elleni immunfestést a leírtak szerint végeztük. Röviden, a szövetmetszeteket xilolban paraffinmentesítettük, csökkentett alkoholkoncentrációval rehidratálták, foszfáttal pufferolt sóoldattal (PBS) végződve, és Proteináz K-vel előkezelésnek vetették alá (8 perc). A metszeteket 3%-os hidrogén-peroxidázzal leállítottuk, 15 percig szobahőmérsékleten fehérjeblokkkal inkubáltuk, majd PBS-ben mostuk. A szöveteket ezután poliklonális nyúl anti-H pylori antitesttel inkubáltuk (1:10 hígítás; ch-20 429 klón, DAKO, Carpinteria, CA). Végül a metszeteket 0,05%-os poliszorbát 20-ban PBS-ben (pH 7,4) mostuk, és a megkötött antitestet sztreptavidin és biotinilált másodlagos antitest alkalmazásával detektáltuk, kromogénként diaminobenzidint használva. A metszeteket hematoxilinnal ellenfestettük, dehidratáltuk és felhelyeztük. A negatív kontrollok a fentiek szerint kezelt metszetek voltak, de a primer antitesttel való inkubálás helyett 1% szarvasmarha szérum albuminnal inkubáltuk PBS-ben.

Hét másik, lokalizált vulvodyniában nem szenvedő nő vulvabiopsziája egészséges kontrollként szolgált.

A H. pylori mikroorganizmusok immunhisztokémiai festésére szolgáló pozitív és negatív kontroll gyomorszöveteket a Patológiai Klinika archívumából szereztük be.