Klinické kohorty ve spolupráci s koronárním onemocněním (4C)

Získání souhlasu účastníka Pacienti byli vyzváni, aby si přečetli informační list studie a byli vyzváni, aby kladli otázky týkající se výzkumu, načež byl od pacientů požadován písemný informovaný souhlas s: a) vyplněním základního zdravotního dotazníku; b) poskytnutí vzorku krve pro dlouhodobé uchování a analýzu DNA a biomarkerů; c) vytěžování údajů o pacientech z jejich zdravotní dokumentace; a d) propojení údajů o pacientech s národními datovými zdroji elektronických zdravotních záznamů (např. kódované hospitalizace a postupy, urgentní příjem a úmrtnost specifická pro příčinu).

Velikost vzorku Pro dostatečnou sílu k detekci rozdílů relativního rizika 1,2 na 5% hladině významnosti bylo zapotřebí minimálně 3000 pacientů.

Sběr a měření výchozích dat K základnímu hodnocení účastníků, které probíhalo během plánovaných schůzek pacientů v nemocnici, přispěly tři jedinečné zdroje dat. Výzkumná opatření (biologické vzorky a informace, které se běžně nesbírají během klinických hodnocení pacientů) zahrnovala 1) krevní vzorky pro analýzu DNA a biomarkerů a 2) krátký zdravotní dotazník vyplněný účastníky (obvyklá doba vyplnění 5–10 minut). Klinická měření byly 3) podrobné klinické informace shromážděné jako součást obvyklé péče, extrahované z nemocničního elektronického zdravotního záznamu až šest měsíců po základním hodnocení, aby byl čas na nahrání výsledků procedur a testů do elektronických systémů nemocnice.

A. Sběr výzkumných opatření (i) Krevní zdroje Odběry žilní krve a zpracování vzorků Vzorky krve bez nalačno byly získány od souhlasných účastníků, včetně těch, u kterých byla následně vyloučena diagnóza anginy pectoris, personálem vyškoleným v oblasti venepunkce během nemocnice jmenování. Bylo odebráno dvacet mililitrů krve, aby bylo možné získat širokou škálu výzkumných opatření. Krev byla odebrána do pěti vakuových nádob v následujícím pořadí: 2x 4,0 ml zkumavka s kyselinou ethylendiamintetraoctovou (EDTA), 1x 4,5 ml gelová separátorová zkumavka s lithium-heparinem (zkumavka pro separaci plazmy (PST)), 1x 5,0 ml zkumavka pro separaci gelového séra (SST), 2x 4,0 ml a 1x 2,5 ml krevní zkumavka PAXgene s ribonukleovou kyselinou (RNA) (PreAnalytiX, Franklin Lakes, NJ). Vakutainery byly jemně převráceny a převráceny až pětkrát, aby se přísady mohly smísit s krví, označeny a dočasně skladovány při přibližně 5 °C až do zpracování. Datum a čas sběru byl zaznamenán. Různé krevní frakce byly odděleny centrifugací při 2500 g po dobu 10 minut. Vzorky EDTA a PST byly centrifugovány během čtyř hodin po vzorkování a vzorek SST byl před centrifugací ponechán srážet se při teplotě místnosti po dobu 25-30 minut.

Plazma EDTA, heparinizovaná plazma, sérum a bílé krvinky (buffy coat) byly rozděleny alikvotně do celkem devatenácti 0,5 ml 2D QR kódovaných kryozkumavek vhodných pro dlouhodobou kryokonzervaci. Každá kryozkumavka byla jednotlivě přihlášena do dvou nepropojených databází pomocí čtečky QR kódů s jednou zkumavkou, umístěna do stojanu s 96 pozicemi a uložena lokálně při -20 °C. Zkumavky PAXgene RNA byly skladovány jako plná krev při -20 °C.

Odběr vzorku bukálního výtěru Pacienti se souhlasem, kteří neposkytli vzorek žilní krve, byli vyzváni, aby poskytli bukální výtěr pro následnou extrakci DNA. Vzorky byly odebírány třením sterilního tamponu pevně o vnitřní stranu tváře účastníka nebo mezi jeho rty a linii dásní po dobu jedné minuty. Tampon byl uchováván ve sterilní nádobě se silikagelovou kapslí (Isohelix Dri-Capsules, Cell Projects Ltd), aby se vzorek stabilizoval při pokojové teplotě po dobu až dvou let.

Vzorky byly přepravovány v přepravních boxech s řízenou teplotou pro dlouhodobé skladování v biobance při -80 °C.

Extrakce DNA a genotypizace jednonukleotidového polymorfismu (SNP) DNA byla extrahována z 2556 jednotlivých účastnických vzorků a byla dokončena genotypizace 51 CHD-specifických SNP identifikovaných v rámci replikace a metaanalýzy celého genomu koronární arterie (CARDIOGRAM PlusC4D) podle specifikace , společností se specializovanými službami pro extrakci DNA a genotypizaci.

Biomarkery a metabolomické profilování pacientů Výzkumníci navrhují měřit rutinně shromážděné a nové markery, které se zdají nejslibnější pro klinickou prediktivní hodnotu, včetně N-terminálního mozkového natriuretického peptidu (NT-BNP), vysoce citlivého C-reaktivního proteinu (hs-CRP). , apolipoprotein A1 (apoA1), apolipoprotein B (apoB), lipoprotein A (Lp(a)) a cystatin C.

(ii) Základní zdravotní dotazník Všichni účastníci byli vyzváni, aby vyplnili dotazník, aby zjistili nebo potvrdili pohlaví účastníků, úroveň vzdělání, etnický původ a zdraví. Všeobecné zdravotní fungování bylo hodnoceno pomocí EQ-5D, (http://www.euroqol.org/) 5-položková standardizovaná míra zdravotního výsledku. Funkční bolest na hrudi byla stanovena pomocí dotazníku Rose angina a závažnost anginy pomocí klasifikace Canadian Cardiovascular Society (CCS). Příznaky deprese byly hodnoceny pomocí Patient Health Questionnaire-9 (PHQ-9), který hodnotí každé z devíti kritérií Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders (DSM-IV 4th Edition, American Psychiatric Association) pro depresi v PRIME-MD. (Primary Care Evaluation of Mental Disorders screeningový dotazník pro symptomy deprese) diagnostický nástroj pro běžné duševní poruchy. Úzkost byla hodnocena pomocí 7-položkové škály Generalized Anxiety Disorder (GAD-7), což je měřítko pro screening a kvantifikaci závažnosti generalizované úzkostné poruchy.

(iii) Rozšířené fyzikální vyšetření a měření získaná v dílčí studii Další měření získaná od podskupiny účastníků zahrnovala šedesátiminutové fyzikální vyšetření (antropometrická měření, funkce plic, krevní tlak v aortě, index pulzní vlny [augmentace], rychlost pulzní vlny a kotníkový index), 31hodinové ambulantní EKG, triaxiální akcelerometrie a měření spánku. Účastníci dílčí studie také vyplnili rozšířený zdravotní dotazník, který zahrnoval otázky týkající se stravy a spánku.

B. Extrakce klinických informací z elektronického zdravotního záznamu Vyškolení extraktoři kontrolovali nemocniční databáze a zaznamenávali podrobné klinické informace do standardizovaných formulářů kazuistik. V závislosti na klinice nebo nemocnici byly prohledávány různé klinické systémy, aby se ručně extrahovala data, která nebylo možné stáhnout nebo exportovat jako datový soubor. Informace zahrnovaly důvod(y) doporučení, anamnézu bolesti na hrudi, lékařem zaznamenané rizikové faktory pro onemocnění koronárních tepen, dříve diagnostikovanou anamnézu, aktuální léky a výsledky testů.

Všichni účastníci podstoupili klidový 12svodový elektrokardiogram (EKG) jako součást jejich rutinního klinického hodnocení. Test tolerance zátěže (ETT) byl proveden zkušeným srdečním elektrofyziologem v nemocnicích, které prováděly ETT pro rutinní hodnocení bolesti na hrudi. ETT se řídila modifikovaným protokolem Bruce (Bruce, RA, 1963) a byla provedena souběžnou 12svodovou elektrokardiografií.

Data byla ručně vložena do výzkumné databáze v koordinačním centru studie, vyčištěna a kódována připravená k analýze.

Následný poštovní dotazník Účastníkům studie byl po náboru (střední doba sledování 469 dní) zaslán následný poštovní dotazník za účelem posouzení celkového zdravotního stavu (EQ-5D), funkčního stavu (dotazník pro růžovou anginu pectoris, dotazník pro Seattle anginu) příznaky deprese (PHQ-2) a úzkosti (GAD-7) a užívání nitrátové medikace.

Propojení elektronických zdravotních záznamů S jejich souhlasem propojili vyšetřovatelé účastníky s daty Hospital Episode Statistics, národního datového skladu administrativních dat obsahujících nemocniční diagnózy kódované ICD-10 a procedury kódované OPCS4. Vyšetřovatelé dále spojili účastníky s údaji o úmrtnosti zakódované podle ICD-10 z Úřadu pro národní statistiku. Spojení byla provedena prostřednictvím Informačního centra zdravotní a sociální péče NHS (dříve známého jako Informační centrum NHS) a pacienti byli identifikováni pomocí jejich čísla NHS (jedinečný desetimístný číselný identifikátor pro NHS), pohlaví, data narození a PSČ.

Sběr a správa dat Návrh, provádění, analýza a podávání zpráv o studii se řídí metodickými standardy stanovenými v doporučeních pro podávání zpráv pro prognostické studie tumor MARKer (REMARK). Pro zachování důvěrnosti byly identifikátory odstraněny ze všech zdrojů dat a nahrazeny jedinečným číslem účastnické studie přiděleným v okamžiku zápisu. Výzkumníci byli vyškoleni, aby dodržovali standardizované operační postupy, aby zajistili vysokou kvalitu a konzistentní sběr dat. Data byla zkontrolována a ověřena a nekonzistence v klinických datech byly vyřešeny revizí nemocničních dat u zdroje.