Klinische cohorten in samenwerking op het gebied van coronaire aandoeningen (4C)

Het verkrijgen van toestemming van de deelnemers Patiënten werden uitgenodigd om een ​​studie-informatieblad te lezen en werden aangemoedigd om vragen te stellen over het onderzoek, waarna schriftelijke geïnformeerde toestemming van patiënten werd gevraagd voor: a) het invullen van een basisgezondheidsvragenlijst; b) levering van een bloedmonster voor langdurige opslag en analyse van DNA en biomarkers; c) extractie van patiëntgegevens uit hun medische dossiers; en d) koppeling van patiëntgegevens met nationale gegevensbronnen voor elektronische medische dossiers (bijv. gecodeerde ziekenhuisopnames en procedures, spoedopnames en oorzaakspecifieke sterfte).

Steekproefomvang Voor voldoende power om relatieve risicoverschillen van 1,2 bij een significantieniveau van 5% te detecteren, waren minimaal 3000 patiënten vereist.

Verzameling en maatregelen van basislijngegevens Drie unieke gegevensbronnen droegen bij aan de basislijnbeoordeling van de deelnemers, die plaatsvond tijdens de geplande ziekenhuisafspraken van de patiënt. Onderzoeksmaatregelen (biologische monsters en informatie die niet routinematig wordt verzameld tijdens klinische beoordelingen van patiënten) omvatten 1) bloedmonsters voor DNA- en biomarkeranalyse en 2) korte gezondheidsvragenlijst ingevuld door deelnemers (gebruikelijke invultijd 5-10 minuten). Klinische maatregelen waren 3) gedetailleerde klinische informatie verzameld als onderdeel van de gebruikelijke zorg, gehaald uit het elektronische patiëntendossier van het ziekenhuis tot zes maanden na de basisbeoordeling om tijd te geven voor het uploaden van procedure- en testresultaten naar de elektronische systemen van het ziekenhuis.

A. Verzameling van onderzoeksmaatregelen (i) Bloedbron Veneuze bloedafname en verwerking van monsters Niet-nuchtere bloedmonsters werden verkregen van instemmende deelnemers, inclusief degenen bij wie een diagnose van angina pectoris vervolgens werd uitgesloten, door personeel dat tijdens het ziekenhuis was opgeleid in aderpunctie afspraak. Er werd twintig milliliter bloed afgenomen om een ​​breed scala aan onderzoeksmaatregelen mogelijk te maken. Bloed werd afgenomen in vijf vacutainers in de volgende volgorde: 2x 4,0 ml ethyleendiaminetetra-azijnzuurbuis (EDTA), 1x 4,5 ml gel-separator lithiumheparinebuis (plasmascheidingsbuis (PST)), 1x 5,0 ml gel-separatorbuis (SST), 2x 4,0 ml en 1x 2,5 ml PAXgene ribonucleïnezuur (RNA) bloedbuis (PreAnalytiX, Franklin Lakes, NJ). Vacutainers werden voorzichtig tot vijf keer omgekeerd en teruggedraaid om additieven met het bloed te laten mengen, gelabeld en tijdelijk opgeslagen bij ongeveer 5°C tot verwerking. Datum en tijd van ophalen werden genoteerd. Verschillende bloedfracties werden gescheiden door centrifugatie bij 2500 g gedurende 10 minuten. EDTA- en PST-monsters werden binnen vier uur na monsterneming gecentrifugeerd en men liet het SST-monster 25-30 minuten stollen bij kamertemperatuur voordat het werd gecentrifugeerd.

EDTA-plasma, gehepariniseerd plasma, serum en witte bloedcellen (buffy coat) werden verdeeld in in totaal negentien 0,5 ml 2D QR-gecodeerde cryoviaalbuisjes die geschikt zijn voor langdurige cryopreservatie. Elke cryovial werd afzonderlijk gelogd in twee niet-gekoppelde databases met behulp van een QR-codelezer voor één buisje, in een rek met 96 posities geplaatst en lokaal opgeslagen bij -20°C. PAXgene RNA-buisjes werden bewaard als volbloed bij -20°C.

Monsterafname van buccale uitstrijkjes Toestemmende patiënten die geen veneus bloedmonster afleverden, werden uitgenodigd om een ​​buccale uitstrijkje te geven voor daaropvolgende DNA-extractie. Monsters werden verzameld door gedurende één minuut een steriel wattenstaafje stevig tegen de binnenkant van de wang van de deelnemer of tussen de lippen en de tandvleesrand te wrijven. Het wattenstaafje werd bewaard in een steriele container met een silicagelcapsule (Isohelix Dri-Capsules, Cell Projects Ltd) om het monster gedurende maximaal twee jaar bij kamertemperatuur te stabiliseren.

Monsters werden vervoerd in verzenddozen met temperatuurregeling voor langdurige opslag in een biobank bij -80°C.

Extractie van DNA en genotypering van enkelvoudig nucleotide polymorfisme (SNP) DNA werd geëxtraheerd uit 2556 individuele deelnemersmonsters en genotypering van 51 CHD-specifieke SNP's geïdentificeerd in coronaire hartziekte Genome wide replicatie en meta-analyse (CARDIoGRAM PlusC4D) werd voltooid, volgens specificatie , door een bedrijf met gespecialiseerde diensten voor extractie van DNA en genotypering.

Biomarkers en metabolomische profilering van patiënten De onderzoekers stellen voor om routinematig verzamelde en nieuwe markers te meten die het meest veelbelovend lijken voor klinische voorspellende waarde, waaronder N-terminal brain natriuretic peptide (NT-BNP), hooggevoelig C-reactief proteïne (hs-CRP) , apolipoproteïne A1 (apoA1), apolipoproteïne B (apoB), lipoproteïne A (Lp(a)) en cystatine C.

(ii) Basisgezondheidsvragenlijst Alle deelnemers werden uitgenodigd om een ​​vragenlijst in te vullen om het geslacht, opleidingsniveau, etniciteit en gezondheid van de deelnemers vast te stellen of te valideren. Het algemeen gezondheidsfunctioneren werd beoordeeld met behulp van de EQ-5D, (http://www.euroqol.org/) een 5-item gestandaardiseerde meting van de gezondheidsuitkomst. Functionele pijn op de borst werd bepaald met behulp van de Rose angina-vragenlijst en de ernst van angina pectoris met behulp van de Canadian Cardiovascular Society (CCS)-classificatie. Symptomen van depressie werden beoordeeld met behulp van de Patient Health Questionnaire-9 (PHQ-9), die elk van de negen Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders (DSM-IV 4th Edition, American Psychiatric Association) criteria voor depressie scoort in de PRIME-MD (Primary Care Evaluation of Mental Disorders screening vragenlijst voor depressieve symptomen) diagnostisch instrument voor veelvoorkomende psychische stoornissen. Angst werd beoordeeld met behulp van de 7-item Generalized Anxiety Disorder (GAD-7)-schaal, een zelfgerapporteerde maatstaf voor het screenen en kwantificeren van de ernst van gegeneraliseerde angststoornis.

(iii) Uitgebreid lichamelijk onderzoek en metingen verkregen in substudie Aanvullende metingen verkregen van een subgroep van deelnemers omvatten een lichamelijk onderzoek van zestig minuten (antropometrische metingen, longfunctie, aortabloeddruk, pulsgolf [augmentatie] index, pulsgolfsnelheid en enkel-brachiale index), 31-uurs ambulante ECG, tri-axiale accelerometrie en slaapmetingen. Deelnemers aan de substudie vulden ook een uitgebreide gezondheidsvragenlijst in met vragen over voeding en slaap.

B. Extractie van klinische informatie uit het elektronische medische dossier Getrainde extractors beoordeelden ziekenhuisdatabases en registreerden gedetailleerde klinische informatie op gestandaardiseerde casusrapportformulieren. Afhankelijk van de kliniek of het ziekenhuis werden verschillende klinische systemen doorzocht om handmatig gegevens te extraheren die niet konden worden gedownload of geëxporteerd als een gegevensbestand. De informatie omvatte reden(en) voor verwijzing, voorgeschiedenis van pijn op de borst, door artsen geregistreerde risicofactoren voor coronaire hartziekte, eerder gediagnosticeerde medische voorgeschiedenis, huidige medicatie en testresultaten.

Alle deelnemers ondergingen een 12-afleidingen elektrocardiogram (ECG) in rust als onderdeel van hun routinematige klinische beoordeling. Een inspanningstolerantietest (ETT) werd uitgevoerd door een ervaren cardiale elektrofysioloog in ziekenhuizen die ETT's uitvoerden voor routinematige beoordeling van pijn op de borst. De ETT volgde het gewijzigde Bruce-protocol (Bruce, RA, 1963) en werd uitgevoerd met gelijktijdige 12-afleidingen elektrocardiografie.

Gegevens werden handmatig ingevoerd in een onderzoeksdatabase in het onderzoekscoördinatiecentrum, opgeschoond en gecodeerd, klaar voor analyse.

Follow-up Vragenlijst per post Er werd een follow-upvragenlijst per post naar de deelnemers aan de studie gestuurd na werving (gemiddelde tijd tot follow-up 469 dagen) om de algemene gezondheidsstatus (EQ-5D), functionele status (Rose angina-vragenlijst, Seattle angina-vragenlijst) te beoordelen. , symptomen van depressie (PHQ-2) en angst (GAD-7) en gebruik van nitraatmedicatie.

Koppelingen van elektronische medische dossiers Met hun toestemming koppelden de onderzoekers deelnemers aan gegevens van Hospital Episode Statistics, een nationaal datawarehouse van administratieve gegevens met ICD-10-gecodeerde ziekenhuisdiagnoses en OPCS4-gecodeerde procedures. De onderzoekers koppelden de deelnemers bovendien aan ICD-10-gecodeerde oorzaakspecifieke mortaliteitsgegevens van het Office for National Statistics. De koppelingen werden uitgevoerd via het NHS Health and Social Care Information Center (voorheen bekend als het NHS Information Centre) en patiënten werden geïdentificeerd aan de hand van hun NHS-nummer (een uniek tiencijferig numeriek identificatienummer voor de NHS), geslacht, geboortedatum en postcode.

Gegevensverzameling en -beheer Het ontwerp, de uitvoering, de analyse en de rapportage van het onderzoek volgen de methodologische standaarden die zijn uiteengezet in de richtlijnen voor REporting-aanbevelingen voor tumor MARKer prognostische studies (REMARK). Om de vertrouwelijkheid te behouden, werden identifiers uit alle gegevensbronnen verwijderd en vervangen door een uniek deelnemersonderzoeksnummer dat werd toegekend op het moment van inschrijving. Onderzoekers werden opgeleid om gestandaardiseerde werkprocedures te volgen om een ​​consistente verzameling van gegevens van hoge kwaliteit te garanderen. Gegevens werden gecontroleerd en gevalideerd, en inconsistenties in klinische gegevens werden opgelost door ziekenhuisgegevens opnieuw te bekijken bij de bron.