Alogenní virově specifické T buněčné linie (VST)

Vyšetřovatelé hodnotili klinickou užitečnost multivirových VST u příjemců shodných příbuzných, shodných nepříbuzných nebo haploidentických transplantací dárců. K dnešnímu dni bylo z dárcovských PBMC vytvořeno 10 multivirových řízených VST klinického stupně. Tyto linie byly polyklonální, obsahovaly jak buňky CD4+ (57±5 %), tak buňky CD8+ (35±5 %) a zachovaly si expresi paměťových markerů CD45RO+CD62L+ (58±8 %). Jejich specificita byla závislá na předchozí virové expozici dárce buněk; 7/8 testovaných linií mělo aktivitu proti Adv, 8/8 proti CMV, 6/8 proti EBV. Žádná z linií nereagovala proti blastům PHA příjemce - což ukazuje na nedostatek aloreaktivního potenciálu v těchto rychle generovaných liniích.

Výzkumníci podávali tyto multivirové specifické VST od dárce 3 alogenním HSCT příjemcům ve studii s eskalací dávky, vše na DL1 (5x106/m2). Nebyly zjištěny žádné okamžité infuzní toxicity a žádná de novo akutní GvHD, což prokazuje in vivo bezpečnost těchto mVST. Dále byla pozorována antivirová účinnost u 1 pacienta s refrakterní CMV. Kromě toho v nedávno publikované práci z Baylor College of Medicien (Anapoulous et al, STM 2014) léčili VST vyrobené podobnou metodologií, ale zacílené na 5 virů namísto 3 se specificitou pro BK virus a HHV6. V této studii bylo 10 pacientů léčeno 4 na DL1 (5x10e6/m2), 4 na DL2 (1x10e7/m2) a 2 na DL3 (2x10e7/m2) a znovu nezaznamenali žádnou okamžitou toxicitu infuze a žádnou de novo akutní GvHD, což prokazuje bezpečnost těchto mVST in vivo. Tři pacienti dostali buňky jako virovou profylaxi (dny 38-43 po HSCT) a u žádného se nevyvinula virová infekce až 3 měsíce po léčbě. Dalších 7 pacientů dostalo buňky jako léčbu jedné nebo více aktivních infekcí mezi dny 59-139 po HSCT. Na základě měření virové zátěže 42. den po infuzi byly VST úspěšné při kontrole aktivních infekcí CMV (1 kompletní (CR) a 1 částečná odpověď (PR)), EBV (2 CR, včetně případu upřímné PTLD); Adv (1 CR); HHV6 (1 CR); a BK (3 CR, 1 PR, 1 NR). Je třeba poznamenat, že 3 pacienti, kteří reagovali na virus BK, měli tkáňové onemocnění se závažnou hemoragickou cystitidou a všichni měli výrazné zlepšení nebo vymizení hematurie po infuzi. U jednoho pacienta se následně objevila epizoda přechodné, ale silné bolesti močového měchýře ve spojení se zánětem pozorovaným při cytoskopii, která se shodovala s poklesem virové zátěže BK v moči o 6 log. Jediným pacientem, který nereagoval, byl pacient s infekcí BK, jehož linie postrádala aktivitu pro tento virus, což pravděpodobně odráželo sérový stav dárce. Kromě toho 3 pacienti následně reaktivovali jiné viry, než na které byli původně léčeni, ale všichni se zbavili těchto infekcí do 12. týdne bez nutnosti dalších infuzí buněk (CMV: 1CR; EBV: 1CR; BK: 1CR; HHV6: 1CR ). Konečně 1 pacient dostal multivirové specifické VST podle protokolu pro jednoho pacienta jako nouzovou léčbu rozšířené a objemné EBV-PTLD rezistentní na rituximab. Po léčbě VST došlo k okamžitému poklesu pacientovy virové zátěže EBV s úplným a trvalým vymizením PTLD, což se shoduje se zvýšením cirkulujících EBV-specifických T buněk. Avšak hluboká protinádorová aktivita zprostředkovaná rychle se rozšiřujícími EBV-řízenými T buňkami také produkovala syndrom přechodné systémové zánětlivé odpovědi, který byl kontrolován steroidy a anti-TNFR protilátkou, bez dlouhodobých nežádoucích účinků.

Infuze multivirových specifických VST od dárce vytvořených pomocí pepmixů klinického stupně a podávaných buď profylakticky, nebo jako léčba jedné nebo více virových infekcí je tedy bezpečná a je spojena s výskytem virově reaktivních T buněk v periferní krvi, které byly schopný kontrolovat infekci výše uvedenými viry.