Lidské spermie Markery odolnosti proti poškození kryopoškozením
Molekulární diagnostika kryorezistence spermatu dárců spermatu a klinické výsledky po umělé inseminaci. Optimalizace spermobanky
Zmrazování spermií se po desetiletí používá pro zachování mužské plodnosti v případech předvídatelné nebo neočekávané ztráty plodnosti, aby bylo zaručeno budoucí otcovství, a také jako doplněk technik asistované reprodukce.
Kvalita spermií po rozmrazení je velmi variabilní, dokonce i mezi po sobě jdoucími vzorky od stejného jedince, s průměrnou mírou přežití kolem 40 %. Molekulární podstata adekvátní rezistence nebo intolerance k protokolům zmrazování/rozmrazování je dosud neznámá a její znalost může vést ke zlepšení výběru vzorků ke zmrazení a také adekvátního doplňování kryokonzervačních médií. Mikročipová analýza poskytuje mocný nástroj pro řešení molekulárního vysvětlení mimo toto chování a přináší výsledky o komparativní expresi messenger ribonukleové kyseliny (mRNA) za dvou různých biologických podmínek: optimální a suboptimální přežití.
Poté je cílem studie vyšetřovatelů určit genomický profil vzorků spermií v závislosti na jejich odolnosti vůči kryokonzervaci, určit geny podílející se na senzitivitě kryopoškození.
Přehled studie
Detailní popis
Design vnořených případů a kontrol se vzorky dárcovských spermií zmraženými podle konvenčních protokolů, kategorizovaných v závislosti na jejich dobré (GSR, n=20) (méně než 20% snížení motility) nebo špatné (BSR, n=20) (více než 20% motilita snížení) míry přežití. mRNA spermie byla extrahována pomocí protokolu Trizol, suspendována ve vodě ošetřené diethylpyrokarbonátem (DEPC) a zmražena při -80 stupních, dokud nebyly provedeny experimenty s mikročipy. RNA byly analyzovány na Agilent Bioanalyzer 2100. Vzorky byly spojeny do 4 (5 vzorků/skupina a 4 skupiny/skupina). Nakonec bylo provedeno 8 mikročipů s celým genomem Agilent One (44K) se spojenými vzorky, 4 mikročipy na skupinu.
Výsledky budou vyhodnoceny k detekci těchto genů odlišně exprimovaných.
Typ studie
Zápis (Aktuální)
Kontakty a umístění
Studijní místa
-
-
-
Alicante, Španělsko, 03015
- IVI Alicante
-
-
Kritéria účasti
Kritéria způsobilosti
Věk způsobilý ke studiu
Přijímá zdravé dobrovolníky
Pohlaví způsobilá ke studiu
Metoda odběru vzorků
Studijní populace
Muži od 18-35 let, zařazeni do dárcovského programu IVI Alicante. Jakákoli přenosná klinická patologie, virová infekce nebo genetické onemocnění by měly být vyloučeny záznamem o rodinné anamnéze.
Kromě toho musí semenné vzorky od dárců splňovat klíčová kritéria zvažovaná naší laboratoří:
- koncentrace spermií > 40 milionů spermií / ml;
- procento progresivní motility > 50 %
- procento normálních forem > 4 %.
Pro četnost těhotenství po IUI budou zahrnuty pouze ženy < 40 let bez tubárních patologií a indikací IUI.
Popis
Kritéria pro zařazení:
Budou zvážena kritéria použitá pro zařazení dárců do spermobanky:
- muži od 18 do 35 let.
- dobrý fyzický a psychický stav a žádné dědičné choroby
- semenné parametry: koncentrace > 40 milionů spermií / ml; procento progresivní motility > 50 % procento normálních forem > 4 %.
- Pro četnost těhotenství po umělé inseminaci budou zahrnuty pouze ženy < 40 let bez tubárních patologií a indikací umělého oplodnění.
Kritéria vyloučení:
Veškerá populace nezařazená do seznamu zařazených bude vyloučena.
Studijní plán
Jak je studie koncipována?
Detaily designu
Kohorty a intervence
Skupina / kohorta |
Intervence / Léčba |
|---|---|
|
Vysoká kryorezistence
Vysoká odolnost proti kryokonzervaci spermií (snížená pohyblivost spermií <20%)
|
Spermie z různých skupin jsou kryokonzervovány, aby se vyhodnotila jejich odolnost vůči konzervaci.
|
|
Nízká kryorezistence
Nízká odolnost vůči kryokonzervaci spermií (snížená pohyblivost spermií > 20 %)
|
Spermie z různých skupin jsou kryokonzervovány, aby se vyhodnotila jejich odolnost vůči konzervaci.
|
Co je měření studie?
Primární výstupní opatření
Měření výsledku |
Popis opatření |
Časové okno |
|---|---|---|
|
Genomický profil vzorků spermií v závislosti na jejich odolnosti vůči kryokonzervaci
Časové okno: Rok a půl
|
Genomický profil vzorků spermií v závislosti na jejich odolnosti vůči kryokonzervaci bude analyzován a vyjádřen jako:
|
Rok a půl
|
Sekundární výstupní opatření
Měření výsledku |
Popis opatření |
Časové okno |
|---|---|---|
|
Míra těhotenství po umělé inseminaci spermatem dárce v různých skupinách.
Časové okno: dva roky
|
Jakmile získáme genomický profil vzorků od dárců zahrnujících různé skupiny, budeme analyzovat jeho vztah k reprodukčním výsledkům, zejména mírám těhotenství po konvenčním umělém oplodnění (procento pozitivních těhotenských testů).
|
dva roky
|
Spolupracovníci a vyšetřovatelé
Spolupracovníci
Publikace a užitečné odkazy
Obecné publikace
- Thurston LM, Siggins K, Mileham AJ, Watson PF, Holt WV. Identification of amplified restriction fragment length polymorphism markers linked to genes controlling boar sperm viability following cryopreservation. Biol Reprod. 2002 Mar;66(3):545-54. doi: 10.1095/biolreprod66.3.545.
- Thurston LM, Watson PF, Holt WV. Semen cryopreservation: a genetic explanation for species and individual variation? Cryo Letters. 2002 Jul-Aug;23(4):255-62.
- Holt WV, Medrano A, Thurston LM, Watson PF. The significance of cooling rates and animal variability for boar sperm cryopreservation: insights from the cryomicroscope. Theriogenology. 2005 Jan 15;63(2):370-82. doi: 10.1016/j.theriogenology.2004.09.018.
- Casas I, Sancho S, Briz M, Pinart E, Bussalleu E, Yeste M, Bonet S. Freezability prediction of boar ejaculates assessed by functional sperm parameters and sperm proteins. Theriogenology. 2009 Oct 15;72(7):930-48. doi: 10.1016/j.theriogenology.2009.07.001. Epub 2009 Aug 3.
- Garrido N, Martinez-Conejero JA, Jauregui J, Horcajadas JA, Simon C, Remohi J, Meseguer M. Microarray analysis in sperm from fertile and infertile men without basic sperm analysis abnormalities reveals a significantly different transcriptome. Fertil Steril. 2009 Apr;91(4 Suppl):1307-10. doi: 10.1016/j.fertnstert.2008.01.078. Epub 2008 Mar 25.
- Garcia-Herrero S, Meseguer M, Martinez-Conejero JA, Remohi J, Pellicer A, Garrido N. The transcriptome of spermatozoa used in homologous intrauterine insemination varies considerably between samples that achieve pregnancy and those that do not. Fertil Steril. 2010 Sep;94(4):1360-1373. doi: 10.1016/j.fertnstert.2009.07.1671. Epub 2009 Sep 30.
- Garcia-Herrero S, Garrido N, Martinez-Conejero JA, Remohi J, Pellicer A, Meseguer M. Ontological evaluation of transcriptional differences between sperm of infertile males and fertile donors using microarray analysis. J Assist Reprod Genet. 2010 Feb;27(2-3):111-20. doi: 10.1007/s10815-010-9388-5. Epub 2010 Feb 2.
- Rahana AR, Ng SP, Leong CF, Rahimah MD. Comparison between mechanical freezer and conventional freezing using liquid nitrogen in normozoospermia. Singapore Med J. 2011 Oct;52(10):734-7.
- Gadea J, Molla M, Selles E, Marco MA, Garcia-Vazquez FA, Gardon JC. Reduced glutathione content in human sperm is decreased after cryopreservation: Effect of the addition of reduced glutathione to the freezing and thawing extenders. Cryobiology. 2011 Feb;62(1):40-6. doi: 10.1016/j.cryobiol.2010.12.001. Epub 2010 Dec 13.
Termíny studijních záznamů
Hlavní termíny studia
Začátek studia
Primární dokončení (AKTUÁLNÍ)
Dokončení studie (AKTUÁLNÍ)
Termíny zápisu do studia
První předloženo
První předloženo, které splnilo kritéria kontroly kvality
První zveřejněno (ODHAD)
Aktualizace studijních záznamů
Poslední zveřejněná aktualizace (AKTUÁLNÍ)
Odeslaná poslední aktualizace, která splnila kritéria kontroly kvality
Naposledy ověřeno
Více informací
Termíny související s touto studií
Klíčová slova
Další identifikační čísla studie
- 1406-ALC-048-ES
Tyto informace byly beze změn načteny přímo z webu clinicaltrials.gov. Máte-li jakékoli požadavky na změnu, odstranění nebo aktualizaci podrobností studie, kontaktujte prosím register@clinicaltrials.gov. Jakmile bude změna implementována na clinicaltrials.gov, bude automaticky aktualizována i na našem webu .