凍結損傷耐性のヒト精子マーカー
精液ドナーの精子凍結抵抗性の分子診断と人工授精後の臨床転帰。精子バンクの最適化
精子凍結は、将来の父性を保証するために予見可能または予想外の生殖能力の喪失の場合に男性の生殖能力を維持するために、また生殖補助技術の補完として、何十年にもわたって採用されてきました。
解凍後の精子の品質は、同じ個人からの連続したサンプル間でも大きく変動し、平均生存率は約 40% です。 今日まで、凍結/解凍プロトコルに対する適切な耐性または不耐性の分子基盤は不明であり、その知識は、凍結するサンプルの選択および凍結保存培地の適切な補充の改善につながる可能性があります。 マイクロアレイ解析は、最適生存と準最適生存という 2 つの異なる生物学的条件下での比較メッセンジャー リボ核酸 (mRNA) 発現に関する結果をもたらし、この動作を超えた分子の説明に対処するための強力なツールを提供します。
次に、研究者らの研究の目的は、凍結保存に対する生存耐性に応じて精子サンプルのゲノムプロファイルを決定し、凍結損傷感受性に関与する遺伝子を決定することです。
調査の概要
詳細な説明
ドナー精子サンプルを従来のプロトコルで凍結し、良好 (GSR、n=20) (運動性の低下が 20% 未満) または悪い (BSR、n=20) (運動性の 20% 以上)減少) 生存率。 Trizol プロトコルを使用して精子 mRNA を抽出し、ジエチルピロカーボネート (DEPC) 処理水に懸濁し、マイクロアレイ実験が行われるまで -80 度で凍結しました。 RNA は、Agilent Bioanalyzer 2100 で分析しました。 サンプルは 4 つにプールされました (5 つのサンプル/プールおよび 4 つのプール/グループ)。 最後に、8 つの Agilent ワンカラー全ゲノム マイクロアレイ (44K) を、プールしたサンプルを使用して実行しました (1 グループあたり 4 つのマイクロアレイ)。
結果は、差次的に発現された遺伝子を検出するために評価されます。
研究の種類
入学 (実際)
連絡先と場所
研究場所
-
-
-
Alicante、スペイン、03015
- IVI Alicante
-
-
参加基準
適格基準
就学可能な年齢
健康ボランティアの受け入れ
受講資格のある性別
サンプリング方法
調査対象母集団
IVI Alicante の寄付プログラムに含まれる 18 ~ 35 歳の男性。 伝染性の臨床病理、ウイルス感染、または遺伝病は、家族歴の記録によって除外する必要があります。
さらに、ドナーからの精液サンプルは、私たちの研究室で考慮される精液基準を満たす必要があります。
- 精子濃度> 4000万精子/ml;
- 進行性運動率> 50%
- 正常な形態のパーセンテージ> 4%。
IUI 後の妊娠率については、卵管病変および IUI 適応症のない 40 歳未満の女性のみが含まれます。
説明
包含基準:
精子バンクにドナーを含めるために使用される基準が考慮されます。
- 18歳から35歳までの男性。
- 身体的および精神的状態が良好で、遺伝性疾患がないこと
- 精液パラメータ:濃度> 4000万精子/ ml。漸進的運動性のパーセンテージ> 50% 正常なフォームのパーセンテージ> 4%。
- 人工授精後の妊娠率については、卵管の病状および人工授精の適応がない 40 歳未満の女性のみが含まれます。
除外基準:
包含のリストに含まれていないすべての母集団は除外されます。
研究計画
研究はどのように設計されていますか?
デザインの詳細
コホートと介入
グループ/コホート |
介入・治療 |
---|---|
高い耐寒性
精子の凍結保存に対する高い耐性(精子の運動性の低下 <20%)
|
さまざまなグループの精子を凍結保存して、保存に対する耐性を評価します。
|
低凍結抵抗
精子の凍結保存に対する耐性が低い(精子の運動性の低下 > 20%)
|
さまざまなグループの精子を凍結保存して、保存に対する耐性を評価します。
|
この研究は何を測定していますか?
主要な結果の測定
結果測定 |
メジャーの説明 |
時間枠 |
---|---|---|
凍結保存に対する生存耐性に応じた精子サンプルのゲノムプロファイル
時間枠:1年半
|
凍結保存に対する生存耐性に応じた精子サンプルのゲノムプロファイルを分析し、次のように表します。
|
1年半
|
二次結果の測定
結果測定 |
メジャーの説明 |
時間枠 |
---|---|---|
異なる群におけるドナー精液による人工授精後の妊娠率。
時間枠:2年
|
さまざまなグループを含むドナーからサンプルのゲノムプロファイルを取得したら、生殖結果、特に従来の人工授精後の妊娠率(妊娠検査陽性率)との関係を分析します。
|
2年
|
協力者と研究者
出版物と役立つリンク
一般刊行物
- Thurston LM, Siggins K, Mileham AJ, Watson PF, Holt WV. Identification of amplified restriction fragment length polymorphism markers linked to genes controlling boar sperm viability following cryopreservation. Biol Reprod. 2002 Mar;66(3):545-54. doi: 10.1095/biolreprod66.3.545.
- Thurston LM, Watson PF, Holt WV. Semen cryopreservation: a genetic explanation for species and individual variation? Cryo Letters. 2002 Jul-Aug;23(4):255-62.
- Holt WV, Medrano A, Thurston LM, Watson PF. The significance of cooling rates and animal variability for boar sperm cryopreservation: insights from the cryomicroscope. Theriogenology. 2005 Jan 15;63(2):370-82. doi: 10.1016/j.theriogenology.2004.09.018.
- Casas I, Sancho S, Briz M, Pinart E, Bussalleu E, Yeste M, Bonet S. Freezability prediction of boar ejaculates assessed by functional sperm parameters and sperm proteins. Theriogenology. 2009 Oct 15;72(7):930-48. doi: 10.1016/j.theriogenology.2009.07.001. Epub 2009 Aug 3.
- Garrido N, Martinez-Conejero JA, Jauregui J, Horcajadas JA, Simon C, Remohi J, Meseguer M. Microarray analysis in sperm from fertile and infertile men without basic sperm analysis abnormalities reveals a significantly different transcriptome. Fertil Steril. 2009 Apr;91(4 Suppl):1307-10. doi: 10.1016/j.fertnstert.2008.01.078. Epub 2008 Mar 25.
- Garcia-Herrero S, Meseguer M, Martinez-Conejero JA, Remohi J, Pellicer A, Garrido N. The transcriptome of spermatozoa used in homologous intrauterine insemination varies considerably between samples that achieve pregnancy and those that do not. Fertil Steril. 2010 Sep;94(4):1360-1373. doi: 10.1016/j.fertnstert.2009.07.1671. Epub 2009 Sep 30.
- Garcia-Herrero S, Garrido N, Martinez-Conejero JA, Remohi J, Pellicer A, Meseguer M. Ontological evaluation of transcriptional differences between sperm of infertile males and fertile donors using microarray analysis. J Assist Reprod Genet. 2010 Feb;27(2-3):111-20. doi: 10.1007/s10815-010-9388-5. Epub 2010 Feb 2.
- Rahana AR, Ng SP, Leong CF, Rahimah MD. Comparison between mechanical freezer and conventional freezing using liquid nitrogen in normozoospermia. Singapore Med J. 2011 Oct;52(10):734-7.
- Gadea J, Molla M, Selles E, Marco MA, Garcia-Vazquez FA, Gardon JC. Reduced glutathione content in human sperm is decreased after cryopreservation: Effect of the addition of reduced glutathione to the freezing and thawing extenders. Cryobiology. 2011 Feb;62(1):40-6. doi: 10.1016/j.cryobiol.2010.12.001. Epub 2010 Dec 13.
研究記録日
主要日程の研究
研究開始
一次修了 (実際)
研究の完了 (実際)
試験登録日
最初に提出
QC基準を満たした最初の提出物
最初の投稿 (見積もり)
学習記録の更新
投稿された最後の更新 (実際)
QC基準を満たした最後の更新が送信されました
最終確認日
詳しくは
この情報は、Web サイト clinicaltrials.gov から変更なしで直接取得したものです。研究の詳細を変更、削除、または更新するリクエストがある場合は、register@clinicaltrials.gov。 までご連絡ください。 clinicaltrials.gov に変更が加えられるとすぐに、ウェブサイトでも自動的に更新されます。
精子凍結保存の臨床試験
-
Instituto Valenciano de Infertilidad, IVI VALENCIAIVI Madrid募集