Menschliche Spermienmarker für Kryoschadensresistenz
Molekulare Diagnostik der Spermien-Kryoresistenz von Samenspendern und klinische Ergebnisse nach künstlicher Befruchtung. Optimierung der Samenbank
Das Einfrieren von Spermien wird seit Jahrzehnten zur Erhaltung der männlichen Fertilität bei vorhersehbarem oder unerwartetem Fruchtbarkeitsverlust zur Gewährleistung einer zukünftigen Vaterschaft sowie als Ergänzung zu Techniken der assistierten Reproduktion eingesetzt.
Die Spermienqualität nach dem Auftauen ist sehr unterschiedlich, selbst bei aufeinanderfolgenden Proben derselben Person, mit mittleren Überlebensraten von etwa 40 %. Die molekulare Grundlage der adäquaten Resistenz bzw. Unverträglichkeit gegenüber Einfrier-/Auftauprotokollen ist bisher unbekannt und ihre Kenntnis kann zur Verbesserung der Auswahl der einzufrierenden Proben und auch der adäquaten Ergänzung von Kryokonservierungsmedien führen. Die Microarray-Analyse bietet ein leistungsstarkes Werkzeug, um die molekulare Erklärung über dieses Verhalten hinaus anzugehen, und liefert Ergebnisse zur vergleichenden Expression von Boten-Ribonukleinsäure (mRNA) unter zwei verschiedenen biologischen Bedingungen: optimales und suboptimales Überleben.
Das Ziel der Studie der Forscher ist es dann, das genomische Profil von Spermienproben in Abhängigkeit von ihrer Überlebensresistenz gegen Kryokonservierung zu bestimmen, um Gene zu bestimmen, die an der Kryoschädigungsempfindlichkeit beteiligt sind.
Studienübersicht
Status
Bedingungen
Intervention / Behandlung
Detaillierte Beschreibung
Design von verschachtelten Fällen und Kontrollen mit Spendersamenproben, die nach herkömmlichen Protokollen eingefroren wurden, kategorisiert in Abhängigkeit von ihrer guten (GSR, n = 20) (weniger als 20 % Abnahme der Beweglichkeit) oder schlechten (BSR, n = 20) (mehr als 20 % Beweglichkeit). sinken) Überlebensraten. Spermien-mRNA wurde unter Verwendung des Trizol-Protokolls extrahiert, in mit Diethylpyrocarbonat (DEPC) behandeltem Wasser suspendiert und bei -80 Grad eingefroren, bis die Microarray-Experimente durchgeführt wurden. RNAs wurden auf dem Agilent Bioanalyzer 2100 analysiert. Proben wurden in 4 gepoolt (5 Proben/Pool und 4 Pools/Gruppe). Schließlich wurden 8 Agilent One Color Whole Genome Microarray (44K) mit gepoolten Proben durchgeführt, 4 Microarrays pro Gruppe.
Die Ergebnisse werden ausgewertet, um die differentiell exprimierten Gene nachzuweisen.
Studientyp
Einschreibung (Tatsächlich)
Kontakte und Standorte
Studienorte
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Alicante, Spanien, 03015
- IVI Alicante
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Teilnahmekriterien
Zulassungskriterien
Studienberechtigtes Alter
Akzeptiert gesunde Freiwillige
Studienberechtigte Geschlechter
Probenahmeverfahren
Studienpopulation
Männer von 18-35 Jahren, im Spendenprogramm von IVI Alicante enthalten. Jede übertragbare klinische Pathologie, virale Infektion oder genetische Erkrankung sollte durch Aufzeichnungen der Familienanamnese ausgeschlossen werden.
Darüber hinaus müssen Samenproben von Spendern die von unserem Labor berücksichtigten Samenkriterien erfüllen:
- Spermienkonzentration> 40 Millionen Spermien / ml;
- Prozentsatz der progressiven Beweglichkeit > 50 %
- Prozentsatz der normalen Formen> 4%.
Für Schwangerschaftsraten nach IUI werden nur Frauen < 40 Jahre ohne Eileiterpathologien und IUI-Indikationen eingeschlossen.
Beschreibung
Einschlusskriterien:
Die Kriterien für die Aufnahme von Spendern in die Samenbank werden berücksichtigt:
- Männer von 18 bis 35 Jahren.
- gute körperliche und psychische Verfassung und keine Erbkrankheiten
- Samenparameter: Konzentration > 40 Millionen Spermien / ml; Prozentsatz der progressiven Motilität > 50 % Prozentsatz der normalen Formen > 4 %.
- Bei den Schwangerschaftsraten nach künstlicher Befruchtung werden nur Frauen < 40 Jahre ohne Eileiterpathologien und Indikationen für künstliche Befruchtung berücksichtigt.
Ausschlusskriterien:
Alle Bevölkerungsgruppen, die nicht in der Aufnahmeliste aufgeführt sind, werden ausgeschlossen.
Studienplan
Wie ist die Studie aufgebaut?
Designdetails
Kohorten und Interventionen
Gruppe / Kohorte |
Intervention / Behandlung |
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Hohe Kryoresistenz
Hohe Resistenz gegen Kryokonservierung von Spermien (verringerte Spermienmotilität <20 %)
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Spermien aus den verschiedenen Gruppen werden kryokonserviert, um ihre Beständigkeit gegen die Konservierung zu bewerten.
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Niedriger Kryowiderstand
Geringe Resistenz gegen Kryokonservierung von Spermien (verringerte Spermienmotilität > 20 %)
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Spermien aus den verschiedenen Gruppen werden kryokonserviert, um ihre Beständigkeit gegen die Konservierung zu bewerten.
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Was misst die Studie?
Primäre Ergebnismessungen
Ergebnis Maßnahme |
Maßnahmenbeschreibung |
Zeitfenster |
|---|---|---|
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Genomisches Profil von Spermienproben in Abhängigkeit von ihrer Überlebensresistenz gegenüber Kryokonservierung
Zeitfenster: Eineinhalb Jahre
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Das genomische Profil von Spermienproben in Abhängigkeit von ihrer Überlebensresistenz gegenüber Kryokonservierung wird analysiert und ausgedrückt als:
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Eineinhalb Jahre
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Sekundäre Ergebnismessungen
Ergebnis Maßnahme |
Maßnahmenbeschreibung |
Zeitfenster |
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Schwangerschaftsraten nach künstlicher Befruchtung mit Spendersamen in den verschiedenen Gruppen.
Zeitfenster: 2 Jahre
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Sobald das genomische Profil von Proben von Spendern verschiedener Gruppen erhalten wurde, werden wir seine Beziehung zu den reproduktiven Ergebnissen analysieren, insbesondere Schwangerschaftsraten nach herkömmlicher künstlicher Befruchtung (Prozentsatz positiver Schwangerschaftstests).
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2 Jahre
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Mitarbeiter und Ermittler
Mitarbeiter
Publikationen und hilfreiche Links
Allgemeine Veröffentlichungen
- Thurston LM, Siggins K, Mileham AJ, Watson PF, Holt WV. Identification of amplified restriction fragment length polymorphism markers linked to genes controlling boar sperm viability following cryopreservation. Biol Reprod. 2002 Mar;66(3):545-54. doi: 10.1095/biolreprod66.3.545.
- Thurston LM, Watson PF, Holt WV. Semen cryopreservation: a genetic explanation for species and individual variation? Cryo Letters. 2002 Jul-Aug;23(4):255-62.
- Holt WV, Medrano A, Thurston LM, Watson PF. The significance of cooling rates and animal variability for boar sperm cryopreservation: insights from the cryomicroscope. Theriogenology. 2005 Jan 15;63(2):370-82. doi: 10.1016/j.theriogenology.2004.09.018.
- Casas I, Sancho S, Briz M, Pinart E, Bussalleu E, Yeste M, Bonet S. Freezability prediction of boar ejaculates assessed by functional sperm parameters and sperm proteins. Theriogenology. 2009 Oct 15;72(7):930-48. doi: 10.1016/j.theriogenology.2009.07.001. Epub 2009 Aug 3.
- Garrido N, Martinez-Conejero JA, Jauregui J, Horcajadas JA, Simon C, Remohi J, Meseguer M. Microarray analysis in sperm from fertile and infertile men without basic sperm analysis abnormalities reveals a significantly different transcriptome. Fertil Steril. 2009 Apr;91(4 Suppl):1307-10. doi: 10.1016/j.fertnstert.2008.01.078. Epub 2008 Mar 25.
- Garcia-Herrero S, Meseguer M, Martinez-Conejero JA, Remohi J, Pellicer A, Garrido N. The transcriptome of spermatozoa used in homologous intrauterine insemination varies considerably between samples that achieve pregnancy and those that do not. Fertil Steril. 2010 Sep;94(4):1360-1373. doi: 10.1016/j.fertnstert.2009.07.1671. Epub 2009 Sep 30.
- Garcia-Herrero S, Garrido N, Martinez-Conejero JA, Remohi J, Pellicer A, Meseguer M. Ontological evaluation of transcriptional differences between sperm of infertile males and fertile donors using microarray analysis. J Assist Reprod Genet. 2010 Feb;27(2-3):111-20. doi: 10.1007/s10815-010-9388-5. Epub 2010 Feb 2.
- Rahana AR, Ng SP, Leong CF, Rahimah MD. Comparison between mechanical freezer and conventional freezing using liquid nitrogen in normozoospermia. Singapore Med J. 2011 Oct;52(10):734-7.
- Gadea J, Molla M, Selles E, Marco MA, Garcia-Vazquez FA, Gardon JC. Reduced glutathione content in human sperm is decreased after cryopreservation: Effect of the addition of reduced glutathione to the freezing and thawing extenders. Cryobiology. 2011 Feb;62(1):40-6. doi: 10.1016/j.cryobiol.2010.12.001. Epub 2010 Dec 13.
Studienaufzeichnungsdaten
Haupttermine studieren
Studienbeginn
Primärer Abschluss (TATSÄCHLICH)
Studienabschluss (TATSÄCHLICH)
Studienanmeldedaten
Zuerst eingereicht
Zuerst eingereicht, das die QC-Kriterien erfüllt hat
Zuerst gepostet (SCHÄTZEN)
Studienaufzeichnungsaktualisierungen
Letztes Update gepostet (TATSÄCHLICH)
Letztes eingereichtes Update, das die QC-Kriterien erfüllt
Zuletzt verifiziert
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- 1406-ALC-048-ES
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