Marcadores de esperma humano de resistência ao dano criogênico
Diagnóstico Molecular da Criorresistência Espermática de Doadores de Sêmen e Desfechos Clínicos Após Inseminação Artificial. Otimização do Banco de Esperma
O congelamento de espermatozoides é empregado há décadas para a preservação da fertilidade masculina em casos de perda previsível ou inesperada da fertilidade para garantir a paternidade futura, e também como complemento das técnicas de reprodução assistida.
A qualidade do esperma após o descongelamento é altamente variável, mesmo entre amostras consecutivas do mesmo indivíduo, com taxas médias de sobrevivência em torno de 40%. Até o momento, a base molecular da resistência ou intolerância adequada aos protocolos de congelamento/descongelamento é desconhecida, e seu conhecimento pode levar ao aprimoramento na seleção das amostras a serem congeladas e também na suplementação adequada dos meios de criopreservação. A análise de microarranjos fornece uma ferramenta poderosa para abordar a explicação molecular além desse comportamento, produzindo resultados sobre a expressão comparativa do ácido ribonucléico mensageiro (mRNA) sob as duas condições biológicas diferentes: sobrevivência ótima e subótima.
Então, o objetivo do estudo dos investigadores é determinar o perfil genômico de amostras de esperma em função de sua resistência de sobrevivência à criopreservação, para determinar os genes envolvidos na sensibilidade ao dano criogênico.
Visão geral do estudo
Descrição detalhada
Desenho de casos e controles aninhados, com amostras de esperma de doadores congeladas sob protocolos convencionais, categorizadas dependendo de seu bom (GSR, n = 20) (menos de 20% de diminuição da motilidade) ou ruim (BSR, n = 20) (mais de 20% de motilidade diminuir) as taxas de sobrevivência. O mRNA do esperma foi extraído usando o protocolo Trizol, suspenso em água tratada com dietilpirocarbonato (DEPC) e congelado a -80 graus até que os experimentos de microarray fossem realizados. Os RNAs foram analisados no Agilent Bioanalyzer 2100. As amostras foram agrupadas em 4 (5 amostras/conjunto e 4 conjuntos/grupo). Finalmente, 8 microarrays de genoma inteiro de uma cor Agilent (44K) foram realizados com amostras combinadas, 4 microarrays por grupo.
Os resultados serão avaliados para detectar esses genes expressos diferencialmente.
Tipo de estudo
Inscrição (Real)
Contactos e Locais
Locais de estudo
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Alicante, Espanha, 03015
- IVI Alicante
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Critérios de participação
Critérios de elegibilidade
Idades elegíveis para estudo
Aceita Voluntários Saudáveis
Gêneros Elegíveis para o Estudo
Método de amostragem
População do estudo
Homens de 18 a 35 anos, incluídos no programa de doações do IVI Alicante. Qualquer patologia clínica transmissível, infecção viral ou doença genética deve ser descartada pelos registros de história familiar.
Além disso, as amostras seminais de doadores devem atender aos critérios seminais considerados por nosso laboratório:
- concentração de esperma> 40 milhões de espermatozóides / ml;
- porcentagem de motilidade progressiva > 50%
- porcentagem de formas normais > 4%.
Para as taxas de gravidez após IUI, apenas mulheres < 40 anos sem patologias tubárias e indicações de IUI serão incluídas.
Descrição
Critério de inclusão:
Serão considerados os critérios utilizados para inclusão de doadores no banco de sêmen:
- homens de 18 a 35 anos.
- boas condições físicas e psicológicas e sem doenças hereditárias
- parâmetros seminais: concentração > 40 milhões de espermatozoides/ml; porcentagem de motilidade progressiva > 50% porcentagem de formas normais > 4%.
- Para taxas de gravidez após inseminação artificial, serão incluídas apenas mulheres < 40 anos sem patologias tubárias e sem indicação de inseminação artificial.
Critério de exclusão:
Toda a população não incluída na lista de inclusão será excluída.
Plano de estudo
Como o estudo é projetado?
Detalhes do projeto
Coortes e Intervenções
Grupo / Coorte |
Intervenção / Tratamento |
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Alta crioresistência
Alta resistência à criopreservação de esperma (diminuição da motilidade espermática <20%)
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Os espermatozóides dos diferentes grupos são criopreservados para avaliar sua resistência à preservação.
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Baixa crioresistência
Baixa resistência à criopreservação de esperma (diminuição da motilidade espermática > 20%)
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Os espermatozóides dos diferentes grupos são criopreservados para avaliar sua resistência à preservação.
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O que o estudo está medindo?
Medidas de resultados primários
Medida de resultado |
Descrição da medida |
Prazo |
|---|---|---|
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Perfil genômico de amostras de esperma em função de sua sobrevivência e resistência à criopreservação
Prazo: Um ano e meio
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O perfil genômico de amostras de esperma em função de sua resistência à criopreservação será analisado e expresso como:
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Um ano e meio
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Medidas de resultados secundários
Medida de resultado |
Descrição da medida |
Prazo |
|---|---|---|
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Taxas de gravidez após inseminação artificial com sêmen de doador nos diferentes grupos.
Prazo: dois anos
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Uma vez obtido o perfil genômico de amostras de doadoras incluídas nos diferentes grupos, analisaremos sua relação com os resultados reprodutivos, em particular as taxas de gravidez após inseminação artificial convencional (percentagem de teste de gravidez positivo)
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dois anos
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Colaboradores e Investigadores
Patrocinador
Colaboradores
Publicações e links úteis
Publicações Gerais
- Thurston LM, Siggins K, Mileham AJ, Watson PF, Holt WV. Identification of amplified restriction fragment length polymorphism markers linked to genes controlling boar sperm viability following cryopreservation. Biol Reprod. 2002 Mar;66(3):545-54. doi: 10.1095/biolreprod66.3.545.
- Thurston LM, Watson PF, Holt WV. Semen cryopreservation: a genetic explanation for species and individual variation? Cryo Letters. 2002 Jul-Aug;23(4):255-62.
- Holt WV, Medrano A, Thurston LM, Watson PF. The significance of cooling rates and animal variability for boar sperm cryopreservation: insights from the cryomicroscope. Theriogenology. 2005 Jan 15;63(2):370-82. doi: 10.1016/j.theriogenology.2004.09.018.
- Casas I, Sancho S, Briz M, Pinart E, Bussalleu E, Yeste M, Bonet S. Freezability prediction of boar ejaculates assessed by functional sperm parameters and sperm proteins. Theriogenology. 2009 Oct 15;72(7):930-48. doi: 10.1016/j.theriogenology.2009.07.001. Epub 2009 Aug 3.
- Garrido N, Martinez-Conejero JA, Jauregui J, Horcajadas JA, Simon C, Remohi J, Meseguer M. Microarray analysis in sperm from fertile and infertile men without basic sperm analysis abnormalities reveals a significantly different transcriptome. Fertil Steril. 2009 Apr;91(4 Suppl):1307-10. doi: 10.1016/j.fertnstert.2008.01.078. Epub 2008 Mar 25.
- Garcia-Herrero S, Meseguer M, Martinez-Conejero JA, Remohi J, Pellicer A, Garrido N. The transcriptome of spermatozoa used in homologous intrauterine insemination varies considerably between samples that achieve pregnancy and those that do not. Fertil Steril. 2010 Sep;94(4):1360-1373. doi: 10.1016/j.fertnstert.2009.07.1671. Epub 2009 Sep 30.
- Garcia-Herrero S, Garrido N, Martinez-Conejero JA, Remohi J, Pellicer A, Meseguer M. Ontological evaluation of transcriptional differences between sperm of infertile males and fertile donors using microarray analysis. J Assist Reprod Genet. 2010 Feb;27(2-3):111-20. doi: 10.1007/s10815-010-9388-5. Epub 2010 Feb 2.
- Rahana AR, Ng SP, Leong CF, Rahimah MD. Comparison between mechanical freezer and conventional freezing using liquid nitrogen in normozoospermia. Singapore Med J. 2011 Oct;52(10):734-7.
- Gadea J, Molla M, Selles E, Marco MA, Garcia-Vazquez FA, Gardon JC. Reduced glutathione content in human sperm is decreased after cryopreservation: Effect of the addition of reduced glutathione to the freezing and thawing extenders. Cryobiology. 2011 Feb;62(1):40-6. doi: 10.1016/j.cryobiol.2010.12.001. Epub 2010 Dec 13.
Datas de registro do estudo
Datas Principais do Estudo
Início do estudo
Conclusão Primária (REAL)
Conclusão do estudo (REAL)
Datas de inscrição no estudo
Enviado pela primeira vez
Enviado pela primeira vez que atendeu aos critérios de CQ
Primeira postagem (ESTIMATIVA)
Atualizações de registro de estudo
Última Atualização Postada (REAL)
Última atualização enviada que atendeu aos critérios de controle de qualidade
Última verificação
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Termos relacionados a este estudo
Palavras-chave
Outros números de identificação do estudo
- 1406-ALC-048-ES
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