Markers van menselijk sperma voor weerstand tegen cryoschade
Moleculaire diagnostiek van spermacryoresistentie van spermadonors en klinische resultaten na kunstmatige inseminatie. Optimalisatie van de spermabank
Het invriezen van sperma wordt al tientallen jaren gebruikt voor het behoud van de mannelijke vruchtbaarheid in gevallen van voorzienbaar of onverwacht verlies van vruchtbaarheid om toekomstig vaderschap te garanderen, en ook als aanvulling op technieken voor geassisteerde voortplanting.
De spermakwaliteit na ontdooien is zeer variabel, zelfs tussen opeenvolgende monsters van dezelfde persoon, met gemiddelde overlevingspercentages van ongeveer 40%. Tot op heden is de moleculaire basis van de adequate weerstand tegen of intolerantie voor protocollen voor invriezen/ontdooien onbekend, en de kennis ervan kan leiden tot verbetering bij de selectie van de in te vriezen monsters en ook bij de adequate aanvulling van cryopreservatiemedia. Microarray-analyse biedt een krachtig hulpmiddel om de moleculaire verklaring achter dit gedrag aan te pakken, wat resultaten oplevert over vergelijkende expressie van boodschapperribonucleïnezuur (mRNA) onder de twee verschillende biologische omstandigheden: optimale en suboptimale overleving.
Vervolgens is het doel van de studie van de onderzoekers om het genomische profiel van spermamonsters te bepalen, afhankelijk van hun overlevingsresistentie tegen cryopreservatie, om genen te bepalen die betrokken zijn bij cryoschadegevoeligheid.
Studie Overzicht
Toestand
Conditie
Interventie / Behandeling
Gedetailleerde beschrijving
Ontwerp van geneste gevallen en controles, met donorspermamonsters ingevroren volgens conventionele protocollen, gecategoriseerd op basis van hun goede (GSR, n=20) (minder dan 20% motiliteitsafname) of slechte (BSR, n=20) (meer dan 20% motiliteitsafname afname) overlevingspercentages. Sperma-mRNA werd geëxtraheerd met behulp van het Trizol-protocol, gesuspendeerd in met diethylpyrocarbonaat (DEPC) behandeld water en ingevroren bij -80 graden totdat de microarray-experimenten werden uitgevoerd. RNA's werden geanalyseerd op Agilent Bioanalyzer 2100. Monsters werden samengevoegd in 4 (5 monsters/pool en 4 pools/groep). Ten slotte werden 8 Agilent One color Whole genoom microarray (44K) uitgevoerd met gepoolde monsters, 4 microarrays per groep.
De resultaten zullen worden geëvalueerd om die genen te detecteren die differentieel tot expressie worden gebracht.
Studietype
Inschrijving (Werkelijk)
Contacten en locaties
Studie Locaties
-
-
-
Alicante, Spanje, 03015
- IVI Alicante
-
-
Deelname Criteria
Geschiktheidscriteria
Leeftijden die in aanmerking komen voor studie
Accepteert gezonde vrijwilligers
Geslachten die in aanmerking komen voor studie
Bemonsteringsmethode
Studie Bevolking
Mannen van 18-35 jaar, opgenomen in het donatieprogramma van IVI Alicante. Elke overdraagbare klinische pathologie, virale infectie of genetische ziekte moet worden uitgesloten door middel van familieanamnese.
Bovendien moeten zaadmonsters van donoren voldoen aan de zaadcriteria die door ons laboratorium worden overwogen:
- spermaconcentratie> 40 miljoen sperma / ml;
- percentage progressieve motiliteit> 50%
- percentage normale vormen> 4%.
Voor zwangerschapspercentages na IUI worden alleen vrouwen < 40 jaar zonder eileiderspathologieën en IUI-indicaties opgenomen.
Beschrijving
Inclusiecriteria:
De gehanteerde criteria voor opname van donoren in de spermabank worden in overweging genomen:
- mannen van 18 tot 35 jaar.
- goede lichamelijke en psychische gesteldheid en geen erfelijke ziekten
- rudimentaire parameters: concentratie > 40 miljoen zaadcellen/ml; percentage progressieve motiliteit> 50% percentage normale vormen> 4%.
- Voor zwangerschapspercentages na kunstmatige inseminatie worden alleen vrouwen < 40 jaar zonder eileiderspathologieën en indicaties voor kunstmatige inseminatie opgenomen.
Uitsluitingscriteria:
Alle populaties die niet op de lijst van opname staan, worden uitgesloten.
Studie plan
Hoe is de studie opgezet?
Ontwerpdetails
Cohorten en interventies
Groep / Cohort |
Interventie / Behandeling |
|---|---|
|
Hoge cryoweerstand
Hoge weerstand tegen cryopreservatie van sperma (verminderde beweeglijkheid van sperma <20%)
|
Sperma van de verschillende groepen wordt gecryopreserveerd om hun weerstand tegen conservering te evalueren.
|
|
Lage cryoweerstand
Lage weerstand tegen cryopreservatie van sperma (verminderde beweeglijkheid van sperma >20%)
|
Sperma van de verschillende groepen wordt gecryopreserveerd om hun weerstand tegen conservering te evalueren.
|
Wat meet het onderzoek?
Primaire uitkomstmaten
Uitkomstmaat |
Maatregel Beschrijving |
Tijdsspanne |
|---|---|---|
|
Genomisch profiel van spermamonsters afhankelijk van hun overlevingsweerstand tegen cryopreservatie
Tijdsspanne: Anderhalf jaar
|
Het genomisch profiel van spermamonsters, afhankelijk van hun overlevingsresistentie tegen cryopreservatie, zal worden geanalyseerd en uitgedrukt als:
|
Anderhalf jaar
|
Secundaire uitkomstmaten
Uitkomstmaat |
Maatregel Beschrijving |
Tijdsspanne |
|---|---|---|
|
Zwangerschapscijfers na kunstmatige inseminatie met donorsperma in de verschillende groepen.
Tijdsspanne: twee jaar
|
Zodra we het genomische profiel hebben verkregen van monsters van donoren inclusief de verschillende groepen, zullen we de relatie met de reproductieve resultaten analyseren, in het bijzonder zwangerschapspercentages na conventionele kunstmatige inseminatie (percentage positieve zwangerschapstest)
|
twee jaar
|
Medewerkers en onderzoekers
Medewerkers
Publicaties en nuttige links
Algemene publicaties
- Thurston LM, Siggins K, Mileham AJ, Watson PF, Holt WV. Identification of amplified restriction fragment length polymorphism markers linked to genes controlling boar sperm viability following cryopreservation. Biol Reprod. 2002 Mar;66(3):545-54. doi: 10.1095/biolreprod66.3.545.
- Thurston LM, Watson PF, Holt WV. Semen cryopreservation: a genetic explanation for species and individual variation? Cryo Letters. 2002 Jul-Aug;23(4):255-62.
- Holt WV, Medrano A, Thurston LM, Watson PF. The significance of cooling rates and animal variability for boar sperm cryopreservation: insights from the cryomicroscope. Theriogenology. 2005 Jan 15;63(2):370-82. doi: 10.1016/j.theriogenology.2004.09.018.
- Casas I, Sancho S, Briz M, Pinart E, Bussalleu E, Yeste M, Bonet S. Freezability prediction of boar ejaculates assessed by functional sperm parameters and sperm proteins. Theriogenology. 2009 Oct 15;72(7):930-48. doi: 10.1016/j.theriogenology.2009.07.001. Epub 2009 Aug 3.
- Garrido N, Martinez-Conejero JA, Jauregui J, Horcajadas JA, Simon C, Remohi J, Meseguer M. Microarray analysis in sperm from fertile and infertile men without basic sperm analysis abnormalities reveals a significantly different transcriptome. Fertil Steril. 2009 Apr;91(4 Suppl):1307-10. doi: 10.1016/j.fertnstert.2008.01.078. Epub 2008 Mar 25.
- Garcia-Herrero S, Meseguer M, Martinez-Conejero JA, Remohi J, Pellicer A, Garrido N. The transcriptome of spermatozoa used in homologous intrauterine insemination varies considerably between samples that achieve pregnancy and those that do not. Fertil Steril. 2010 Sep;94(4):1360-1373. doi: 10.1016/j.fertnstert.2009.07.1671. Epub 2009 Sep 30.
- Garcia-Herrero S, Garrido N, Martinez-Conejero JA, Remohi J, Pellicer A, Meseguer M. Ontological evaluation of transcriptional differences between sperm of infertile males and fertile donors using microarray analysis. J Assist Reprod Genet. 2010 Feb;27(2-3):111-20. doi: 10.1007/s10815-010-9388-5. Epub 2010 Feb 2.
- Rahana AR, Ng SP, Leong CF, Rahimah MD. Comparison between mechanical freezer and conventional freezing using liquid nitrogen in normozoospermia. Singapore Med J. 2011 Oct;52(10):734-7.
- Gadea J, Molla M, Selles E, Marco MA, Garcia-Vazquez FA, Gardon JC. Reduced glutathione content in human sperm is decreased after cryopreservation: Effect of the addition of reduced glutathione to the freezing and thawing extenders. Cryobiology. 2011 Feb;62(1):40-6. doi: 10.1016/j.cryobiol.2010.12.001. Epub 2010 Dec 13.
Studie record data
Bestudeer belangrijke data
Studie start
Primaire voltooiing (WERKELIJK)
Studie voltooiing (WERKELIJK)
Studieregistratiedata
Eerst ingediend
Eerst ingediend dat voldeed aan de QC-criteria
Eerst geplaatst (SCHATTING)
Updates van studierecords
Laatste update geplaatst (WERKELIJK)
Laatste update ingediend die voldeed aan QC-criteria
Laatst geverifieerd
Meer informatie
Termen gerelateerd aan deze studie
Trefwoorden
Andere studie-ID-nummers
- 1406-ALC-048-ES
Deze informatie is zonder wijzigingen rechtstreeks van de website clinicaltrials.gov gehaald. Als u verzoeken heeft om uw onderzoeksgegevens te wijzigen, te verwijderen of bij te werken, neem dan contact op met register@clinicaltrials.gov. Zodra er een wijziging wordt doorgevoerd op clinicaltrials.gov, wordt deze ook automatisch bijgewerkt op onze website .
Klinische onderzoeken op Cryopreservatie van sperma
-
Instituto Valenciano de Infertilidad, IVI VALENCIAIVI MadridWervingOnvruchtbaarheid, man | Aantal zaadcellen, laagSpanje