Menneskelige spermmarkører for kryoskaderesistens
Molekylær diagnostik af sædkryoresistens hos sæddonorer og kliniske resultater efter kunstig insemination. Optimering af sædbank
Spermfrysning har været anvendt i årtier til bevarelse af mandlig fertilitet i tilfælde af forudsigeligt eller uventet tab af fertilitet for at garantere fremtidigt faderskab, og også som et supplement til assisterede reproduktionsteknikker.
Sædkvaliteten efter optøning er meget variabel, selv blandt på hinanden følgende prøver fra det samme individ, med gennemsnitlige overlevelsesrater omkring 40 %. Til dato er det molekylære grundlag for den tilstrækkelige resistens eller intolerance over for frysnings-/optøningsprotokoller ukendt, og dens viden kan føre til forbedringer i udvælgelsen af prøverne, der skal fryses, og også i det passende supplement af kryokonserveringsmedier. Microarray-analyse giver et kraftfuldt værktøj til at adressere den molekylære forklaring ud over denne adfærd, hvilket giver resultater om komparativ messenger-ribonukleinsyre (mRNA)-ekspression under de to forskellige biologiske forhold: optimal og suboptimal overlevelse.
Derefter er målet med efterforskernes undersøgelse at bestemme den genomiske profil af sædprøver afhængigt af deres overlevelsesresistens over for kryokonservering, for at bestemme gener involveret i kryoskadefølsomhed.
Studieoversigt
Detaljeret beskrivelse
Indlejrede tilfælde og kontroldesign, med donorsædprøver frosset under konventionelle protokoller, kategoriseret afhængigt af deres gode (GSR, n=20) (mindre end 20 % fald i motilitet) eller dårlige (BSR, n=20) (mere end 20 % motilitet) fald) overlevelsesrater. Sperm-mRNA blev ekstraheret ved hjælp af Trizol-protokol, suspenderet i diethylpyrocarbonat (DEPC)-behandlet vand og frosset ved -80 grader, indtil mikroarray-eksperimenterne blev udført. RNA'er blev analyseret på Agilent Bioanalyzer 2100. Prøver blev samlet i 4 (5 prøver/pulje og 4 pools/gruppe). Endelig blev der udført 8 Agilent One-farve Helgenom-mikroarray (44K) med poolede prøver, 4 mikroarrays pr. gruppe.
Resultaterne vil blive evalueret for at påvise de gener, der udtrykkes differentielt.
Undersøgelsestype
Tilmelding (Faktiske)
Kontakter og lokationer
Studiesteder
-
-
-
Alicante, Spanien, 03015
- IVI Alicante
-
-
Deltagelseskriterier
Berettigelseskriterier
Aldre berettiget til at studere
Tager imod sunde frivillige
Køn, der er berettiget til at studere
Prøveudtagningsmetode
Studiebefolkning
Mænd fra 18-35 år, inkluderet i donationsprogrammet for IVI Alicante. Enhver overførbar klinisk patologi, virusinfektion eller genetisk sygdom bør udelukkes af familiehistorie.
Derudover skal sædprøver fra donorer opfylde de sædkriterier, som vores laboratorium vurderer:
- sædkoncentration > 40 millioner sædceller / ml;
- procentdel af progressiv motilitet > 50 %
- procentdel af normale former > 4%.
For graviditetsrater efter IUI vil kun kvinder < 40 år uden tubal patologi og IUI indikationer blive inkluderet.
Beskrivelse
Inklusionskriterier:
Kriterierne, der anvendes til at inkludere donorer i sædbanken, vil blive taget i betragtning:
- mænd fra 18 til 35 år.
- gode fysiske og psykiske forhold og ingen arvelige sygdomme
- sædparametre: koncentration > 40 millioner sædceller / ml; procentdel af progressiv motilitet > 50 % procentdel af normale former > 4 %.
- For graviditetsrater efter kunstig befrugtning vil kun kvinder < 40 år uden tubal patologi og kunstig befrugtning blive inkluderet.
Ekskluderingskriterier:
Alle populationer, der ikke er medtaget på listen over inklusion, vil blive udelukket.
Studieplan
Hvordan er undersøgelsen tilrettelagt?
Design detaljer
Kohorter og interventioner
Gruppe / kohorte |
Intervention / Behandling |
|---|---|
|
Høj kryomodstand
Høj modstandsdygtighed over for kryokonservering af sæd (nedsat sædmotilitet <20 %)
|
Sperm fra de forskellige grupper kryokonserveres for at vurdere deres modstandsdygtighed over for konservering.
|
|
Lav kryomodstand
Lav modstand mod sperm kryokonservering (nedsat spermmotilitet >20 %)
|
Sperm fra de forskellige grupper kryokonserveres for at vurdere deres modstandsdygtighed over for konservering.
|
Hvad måler undersøgelsen?
Primære resultatmål
Resultatmål |
Foranstaltningsbeskrivelse |
Tidsramme |
|---|---|---|
|
Genomisk profil af sædprøver afhængig af deres overlevelsesresistens over for kryokonservering
Tidsramme: Halvandet år
|
Den genomiske profil af sædprøver afhængig af deres overlevelsesresistens over for kryokonservering vil blive analyseret og udtrykt som:
|
Halvandet år
|
Sekundære resultatmål
Resultatmål |
Foranstaltningsbeskrivelse |
Tidsramme |
|---|---|---|
|
Graviditetstal efter kunstig befrugtning med donorsæd i de forskellige grupper.
Tidsramme: to år
|
Når vi har opnået den genomiske profil af prøver fra donorer inkluderet de forskellige grupper, vil vi analysere dens sammenhæng med de reproduktive resultater, især graviditetsrater efter konventionel kunstig insemination (procentdel af positiv graviditetstest)
|
to år
|
Samarbejdspartnere og efterforskere
Samarbejdspartnere
Publikationer og nyttige links
Generelle publikationer
- Thurston LM, Siggins K, Mileham AJ, Watson PF, Holt WV. Identification of amplified restriction fragment length polymorphism markers linked to genes controlling boar sperm viability following cryopreservation. Biol Reprod. 2002 Mar;66(3):545-54. doi: 10.1095/biolreprod66.3.545.
- Thurston LM, Watson PF, Holt WV. Semen cryopreservation: a genetic explanation for species and individual variation? Cryo Letters. 2002 Jul-Aug;23(4):255-62.
- Holt WV, Medrano A, Thurston LM, Watson PF. The significance of cooling rates and animal variability for boar sperm cryopreservation: insights from the cryomicroscope. Theriogenology. 2005 Jan 15;63(2):370-82. doi: 10.1016/j.theriogenology.2004.09.018.
- Casas I, Sancho S, Briz M, Pinart E, Bussalleu E, Yeste M, Bonet S. Freezability prediction of boar ejaculates assessed by functional sperm parameters and sperm proteins. Theriogenology. 2009 Oct 15;72(7):930-48. doi: 10.1016/j.theriogenology.2009.07.001. Epub 2009 Aug 3.
- Garrido N, Martinez-Conejero JA, Jauregui J, Horcajadas JA, Simon C, Remohi J, Meseguer M. Microarray analysis in sperm from fertile and infertile men without basic sperm analysis abnormalities reveals a significantly different transcriptome. Fertil Steril. 2009 Apr;91(4 Suppl):1307-10. doi: 10.1016/j.fertnstert.2008.01.078. Epub 2008 Mar 25.
- Garcia-Herrero S, Meseguer M, Martinez-Conejero JA, Remohi J, Pellicer A, Garrido N. The transcriptome of spermatozoa used in homologous intrauterine insemination varies considerably between samples that achieve pregnancy and those that do not. Fertil Steril. 2010 Sep;94(4):1360-1373. doi: 10.1016/j.fertnstert.2009.07.1671. Epub 2009 Sep 30.
- Garcia-Herrero S, Garrido N, Martinez-Conejero JA, Remohi J, Pellicer A, Meseguer M. Ontological evaluation of transcriptional differences between sperm of infertile males and fertile donors using microarray analysis. J Assist Reprod Genet. 2010 Feb;27(2-3):111-20. doi: 10.1007/s10815-010-9388-5. Epub 2010 Feb 2.
- Rahana AR, Ng SP, Leong CF, Rahimah MD. Comparison between mechanical freezer and conventional freezing using liquid nitrogen in normozoospermia. Singapore Med J. 2011 Oct;52(10):734-7.
- Gadea J, Molla M, Selles E, Marco MA, Garcia-Vazquez FA, Gardon JC. Reduced glutathione content in human sperm is decreased after cryopreservation: Effect of the addition of reduced glutathione to the freezing and thawing extenders. Cryobiology. 2011 Feb;62(1):40-6. doi: 10.1016/j.cryobiol.2010.12.001. Epub 2010 Dec 13.
Datoer for undersøgelser
Studer store datoer
Studiestart
Primær færdiggørelse (FAKTISKE)
Studieafslutning (FAKTISKE)
Datoer for studieregistrering
Først indsendt
Først indsendt, der opfyldte QC-kriterier
Først opslået (SKØN)
Opdateringer af undersøgelsesjournaler
Sidste opdatering sendt (FAKTISKE)
Sidste opdatering indsendt, der opfyldte kvalitetskontrolkriterier
Sidst verificeret
Mere information
Begreber relateret til denne undersøgelse
Nøgleord
Andre undersøgelses-id-numre
- 1406-ALC-048-ES
Disse oplysninger blev hentet direkte fra webstedet clinicaltrials.gov uden ændringer. Hvis du har nogen anmodninger om at ændre, fjerne eller opdatere dine undersøgelsesoplysninger, bedes du kontakte register@clinicaltrials.gov. Så snart en ændring er implementeret på clinicaltrials.gov, vil denne også blive opdateret automatisk på vores hjemmeside .