Marcatori di spermatozoi umani di resistenza al criodagismo
Diagnostica molecolare della crioresistenza degli spermatozoi dei donatori di seme e risultati clinici dopo l'inseminazione artificiale. Ottimizzazione della banca del seme
Il congelamento del seme è stato impiegato per decenni per preservare la fertilità maschile in caso di perdita di fertilità prevedibile o inaspettata per garantire la paternità futura, e anche come complemento delle tecniche di riproduzione assistita.
La qualità dello sperma dopo lo scongelamento è molto variabile, anche tra campioni consecutivi dello stesso individuo, con tassi di sopravvivenza media intorno al 40%. Ad oggi, le basi molecolari dell'adeguata resistenza o intolleranza ai protocolli di congelamento/scongelamento sono sconosciute e la sua conoscenza può portare a miglioramenti nella selezione dei campioni da congelare e anche nell'adeguato supplemento di terreni di crioconservazione. L'analisi dei microarray fornisce un potente strumento per affrontare la spiegazione molecolare al di là di questo comportamento, producendo risultati sull'espressione comparativa dell'acido ribonucleico messaggero (mRNA) nelle due diverse condizioni biologiche: sopravvivenza ottimale e subottimale.
Quindi, lo scopo dello studio dei ricercatori è determinare il profilo genomico dei campioni di spermatozoi in base alla loro resistenza alla sopravvivenza alla crioconservazione, per determinare i geni coinvolti nella sensibilità al criodanneggiamento.
Panoramica dello studio
Stato
Condizioni
Intervento / Trattamento
Descrizione dettagliata
Progettazione di casi nidificati e controlli, con campioni di sperma di donatore congelati secondo protocolli convenzionali, classificati in base al loro buono (GSR, n=20) (diminuzione della motilità inferiore al 20%) o cattivo (BSR, n=20) (diminuzione della motilità superiore al 20%) diminuzione) tassi di sopravvivenza. L'mRNA dello sperma è stato estratto utilizzando il protocollo Trizol, sospeso in acqua trattata con dietilpirocarbonato (DEPC) e congelato a -80 gradi fino a quando non sono stati eseguiti gli esperimenti di microarray. Gli RNA sono stati analizzati su Agilent Bioanalyzer 2100. I campioni sono stati raggruppati in 4 (5 campioni/pool e 4 pool/gruppo). Infine, sono stati eseguiti 8 microarray Agilent One color Whole genoma (44K) con campioni raggruppati, 4 microarray per gruppo.
I risultati saranno valutati per rilevare quei geni differenzialmente espressi.
Tipo di studio
Iscrizione (Effettivo)
Contatti e Sedi
Luoghi di studio
-
-
-
Alicante, Spagna, 03015
- IVI Alicante
-
-
Criteri di partecipazione
Criteri di ammissibilità
Età idonea allo studio
Accetta volontari sani
Sessi ammissibili allo studio
Metodo di campionamento
Popolazione di studio
Uomini dai 18 ai 35 anni, inclusi nel programma di donazioni di IVI Alicante. Qualsiasi patologia clinica trasmissibile, infezione virale o malattia genetica dovrebbe essere esclusa dai registri della storia familiare.
Inoltre, i campioni seminali di donatori devono soddisfare i criteri seminali considerati dal nostro laboratorio:
- concentrazione di spermatozoi > 40 milioni di spermatozoi/ml;
- percentuale di motilità progressiva > 50%
- percentuale di forme normali > 4%.
Per i tassi di gravidanza dopo IUI, saranno incluse solo le donne < 40 anni senza patologie tubariche e indicazioni IUI.
Descrizione
Criterio di inclusione:
I criteri utilizzati per l'inclusione dei donatori nella banca del seme saranno considerati:
- maschi dai 18 ai 35 anni.
- buone condizioni fisiche e psicologiche e nessuna malattia ereditaria
- parametri seminali: concentrazione > 40 milioni di spermatozoi/ml; percentuale di motilità progressiva > 50% percentuale di forme normali > 4%.
- Per i tassi di gravidanza dopo l'inseminazione artificiale, saranno incluse solo le donne < 40 anni senza patologie tubariche e indicazioni per l'inseminazione artificiale.
Criteri di esclusione:
Tutta la popolazione non inclusa nell'elenco di inclusione sarà esclusa.
Piano di studio
Come è strutturato lo studio?
Dettagli di progettazione
Coorti e interventi
Gruppo / Coorte |
Intervento / Trattamento |
|---|---|
|
Elevata crioresistenza
Elevata resistenza alla crioconservazione degli spermatozoi (diminuzione della motilità degli spermatozoi <20%)
|
Gli spermatozoi dei diversi gruppi vengono crioconservati per valutarne la resistenza alla conservazione.
|
|
Crioresistenza bassa
Bassa resistenza alla crioconservazione degli spermatozoi (diminuzione della motilità degli spermatozoi >20%)
|
Gli spermatozoi dei diversi gruppi vengono crioconservati per valutarne la resistenza alla conservazione.
|
Cosa sta misurando lo studio?
Misure di risultato primarie
Misura del risultato |
Misura Descrizione |
Lasso di tempo |
|---|---|---|
|
Profilo genomico dei campioni di spermatozoi in funzione della loro sopravvivenza alla crioconservazione
Lasso di tempo: Un anno e mezzo
|
Il profilo genomico dei campioni di sperma in base alla loro resistenza alla crioconservazione sarà analizzato ed espresso come:
|
Un anno e mezzo
|
Misure di risultato secondarie
Misura del risultato |
Misura Descrizione |
Lasso di tempo |
|---|---|---|
|
Tassi di gravidanza dopo l'inseminazione artificiale con seme di donatore nei diversi gruppi.
Lasso di tempo: due anni
|
Una volta ottenuto il profilo genomico dei campioni da donatori inclusi i diversi gruppi, analizzeremo la sua relazione con gli esiti riproduttivi, in particolare i tassi di gravidanza dopo l'inseminazione artificiale convenzionale (percentuale di test di gravidanza positivi)
|
due anni
|
Collaboratori e investigatori
Collaboratori
Pubblicazioni e link utili
Pubblicazioni generali
- Thurston LM, Siggins K, Mileham AJ, Watson PF, Holt WV. Identification of amplified restriction fragment length polymorphism markers linked to genes controlling boar sperm viability following cryopreservation. Biol Reprod. 2002 Mar;66(3):545-54. doi: 10.1095/biolreprod66.3.545.
- Thurston LM, Watson PF, Holt WV. Semen cryopreservation: a genetic explanation for species and individual variation? Cryo Letters. 2002 Jul-Aug;23(4):255-62.
- Holt WV, Medrano A, Thurston LM, Watson PF. The significance of cooling rates and animal variability for boar sperm cryopreservation: insights from the cryomicroscope. Theriogenology. 2005 Jan 15;63(2):370-82. doi: 10.1016/j.theriogenology.2004.09.018.
- Casas I, Sancho S, Briz M, Pinart E, Bussalleu E, Yeste M, Bonet S. Freezability prediction of boar ejaculates assessed by functional sperm parameters and sperm proteins. Theriogenology. 2009 Oct 15;72(7):930-48. doi: 10.1016/j.theriogenology.2009.07.001. Epub 2009 Aug 3.
- Garrido N, Martinez-Conejero JA, Jauregui J, Horcajadas JA, Simon C, Remohi J, Meseguer M. Microarray analysis in sperm from fertile and infertile men without basic sperm analysis abnormalities reveals a significantly different transcriptome. Fertil Steril. 2009 Apr;91(4 Suppl):1307-10. doi: 10.1016/j.fertnstert.2008.01.078. Epub 2008 Mar 25.
- Garcia-Herrero S, Meseguer M, Martinez-Conejero JA, Remohi J, Pellicer A, Garrido N. The transcriptome of spermatozoa used in homologous intrauterine insemination varies considerably between samples that achieve pregnancy and those that do not. Fertil Steril. 2010 Sep;94(4):1360-1373. doi: 10.1016/j.fertnstert.2009.07.1671. Epub 2009 Sep 30.
- Garcia-Herrero S, Garrido N, Martinez-Conejero JA, Remohi J, Pellicer A, Meseguer M. Ontological evaluation of transcriptional differences between sperm of infertile males and fertile donors using microarray analysis. J Assist Reprod Genet. 2010 Feb;27(2-3):111-20. doi: 10.1007/s10815-010-9388-5. Epub 2010 Feb 2.
- Rahana AR, Ng SP, Leong CF, Rahimah MD. Comparison between mechanical freezer and conventional freezing using liquid nitrogen in normozoospermia. Singapore Med J. 2011 Oct;52(10):734-7.
- Gadea J, Molla M, Selles E, Marco MA, Garcia-Vazquez FA, Gardon JC. Reduced glutathione content in human sperm is decreased after cryopreservation: Effect of the addition of reduced glutathione to the freezing and thawing extenders. Cryobiology. 2011 Feb;62(1):40-6. doi: 10.1016/j.cryobiol.2010.12.001. Epub 2010 Dec 13.
Studiare le date dei record
Studia le date principali
Inizio studio
Completamento primario (EFFETTIVO)
Completamento dello studio (EFFETTIVO)
Date di iscrizione allo studio
Primo inviato
Primo inviato che soddisfa i criteri di controllo qualità
Primo Inserito (STIMA)
Aggiornamenti dei record di studio
Ultimo aggiornamento pubblicato (EFFETTIVO)
Ultimo aggiornamento inviato che soddisfa i criteri QC
Ultimo verificato
Maggiori informazioni
Termini relativi a questo studio
Parole chiave
Altri numeri di identificazione dello studio
- 1406-ALC-048-ES
Queste informazioni sono state recuperate direttamente dal sito web clinicaltrials.gov senza alcuna modifica. In caso di richieste di modifica, rimozione o aggiornamento dei dettagli dello studio, contattare register@clinicaltrials.gov. Non appena verrà implementata una modifica su clinicaltrials.gov, questa verrà aggiornata automaticamente anche sul nostro sito web .