Marcadores de esperma humano de resistencia al criodaño
Diagnóstico molecular de la criorresistencia espermática de donantes de semen y resultados clínicos después de la inseminación artificial. Optimización del Banco de Semen
La congelación de semen se ha empleado durante décadas para la preservación de la fertilidad masculina en casos de pérdida de fertilidad previsible o inesperada para garantizar la futura paternidad, y también como complemento de las técnicas de reproducción asistida.
La calidad del esperma después de la descongelación es muy variable, incluso entre muestras consecutivas del mismo individuo, con tasas de supervivencia media de alrededor del 40 %. Hasta la fecha se desconoce la base molecular de la adecuada resistencia o intolerancia a los protocolos de congelación/descongelación, y su conocimiento puede conducir a la mejora en la selección de las muestras a congelar y también en la adecuada suplementación de los medios de criopreservación. El análisis de micromatrices proporciona una poderosa herramienta para abordar la explicación molecular más allá de este comportamiento, arrojando resultados sobre la expresión comparativa del ácido ribonucleico mensajero (ARNm) en dos condiciones biológicas diferentes: supervivencia óptima y subóptima.
Entonces, el objetivo del estudio de los investigadores es determinar el perfil genómico de las muestras de esperma en función de su resistencia de supervivencia a la criopreservación, para determinar los genes implicados en la sensibilidad al criodaño.
Descripción general del estudio
Descripción detallada
Diseño de casos y controles anidados, con muestras de semen de donante congeladas bajo protocolos convencionales, categorizados según su buena (GSR, n=20) (menos del 20% de disminución de la motilidad) o mala (BSR, n=20) (más del 20% de motilidad). disminuir) las tasas de supervivencia. El ARNm de esperma se extrajo utilizando el protocolo Trizol, se suspendió en agua tratada con dietilpirocarbonato (DEPC) y se congeló a -80 grados hasta que se realizaron los experimentos de microarray. Los ARN se analizaron en Agilent Bioanalyzer 2100. Las muestras se agruparon en 4 (5 muestras/grupo y 4 grupos/grupo). Finalmente, se realizaron 8 microarrays de genoma completo Agilent One color (44K) con muestras agrupadas, 4 microarrays por grupo.
Los resultados se evaluarán para detectar aquellos genes expresados diferencialmente.
Tipo de estudio
Inscripción (Actual)
Contactos y Ubicaciones
Ubicaciones de estudio
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Alicante, España, 03015
- IVI Alicante
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Criterios de participación
Criterio de elegibilidad
Edades elegibles para estudiar
Acepta Voluntarios Saludables
Géneros elegibles para el estudio
Método de muestreo
Población de estudio
Hombres de 18 a 35 años, incluidos en el programa de donación de IVI Alicante. Cualquier patología clínica transmisible, infección viral o enfermedad genética debe ser descartada por los antecedentes familiares.
Además, las muestras seminales de donantes deben cumplir con los criterios seminales considerados por nuestro laboratorio:
- concentración de espermatozoides > 40 millones de espermatozoides/ml;
- porcentaje de motilidad progresiva> 50%
- porcentaje de formas normales > 4%.
Para las tasas de embarazo después de IIU, solo se incluirán mujeres < 40 años sin patología tubárica e indicaciones de IIU.
Descripción
Criterios de inclusión:
Se considerarán los criterios utilizados para la inclusión de donantes en el banco de semen:
- Varones de 18 a 35 años.
- buenas condiciones físicas y psíquicas y sin enfermedades hereditarias
- parámetros seminales: concentración > 40 millones de espermatozoides/ml; porcentaje de motilidad progresiva > 50% porcentaje de formas normales > 4%.
- Para las tasas de embarazo después de la inseminación artificial, solo se incluirán mujeres < 40 años sin patologías tubáricas e indicaciones de inseminación artificial.
Criterio de exclusión:
Se excluirá a toda la población no incluida en la lista de inclusión.
Plan de estudios
¿Cómo está diseñado el estudio?
Detalles de diseño
Cohortes e Intervenciones
Grupo / Cohorte |
Intervención / Tratamiento |
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Alta criorresistencia
Alta resistencia a la criopreservación de semen (disminución de la motilidad espermática <20%)
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Los espermatozoides de los diferentes grupos se criopreservan para evaluar su resistencia a la conservación.
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Baja criorresistencia
Baja resistencia a la criopreservación de espermatozoides (disminución de la motilidad espermática >20%)
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Los espermatozoides de los diferentes grupos se criopreservan para evaluar su resistencia a la conservación.
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¿Qué mide el estudio?
Medidas de resultado primarias
Medida de resultado |
Medida Descripción |
Periodo de tiempo |
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Perfil genómico de las muestras de esperma en función de su resistencia de supervivencia a la criopreservación
Periodo de tiempo: Un año y medio
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El perfil genómico de las muestras de esperma en función de su resistencia de supervivencia a la criopreservación se analizará y expresará como:
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Un año y medio
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Medidas de resultado secundarias
Medida de resultado |
Medida Descripción |
Periodo de tiempo |
|---|---|---|
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Tasas de embarazo tras inseminación artificial con semen de donante en los diferentes grupos.
Periodo de tiempo: dos años
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Una vez obtenido el perfil genómico de las muestras de donantes incluidas en los diferentes grupos, analizaremos su relación con los resultados reproductivos, en particular las tasas de embarazo tras inseminación artificial convencional (porcentaje de test de embarazo positivo)
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dos años
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Colaboradores e Investigadores
Patrocinador
Colaboradores
Publicaciones y enlaces útiles
Publicaciones Generales
- Thurston LM, Siggins K, Mileham AJ, Watson PF, Holt WV. Identification of amplified restriction fragment length polymorphism markers linked to genes controlling boar sperm viability following cryopreservation. Biol Reprod. 2002 Mar;66(3):545-54. doi: 10.1095/biolreprod66.3.545.
- Thurston LM, Watson PF, Holt WV. Semen cryopreservation: a genetic explanation for species and individual variation? Cryo Letters. 2002 Jul-Aug;23(4):255-62.
- Holt WV, Medrano A, Thurston LM, Watson PF. The significance of cooling rates and animal variability for boar sperm cryopreservation: insights from the cryomicroscope. Theriogenology. 2005 Jan 15;63(2):370-82. doi: 10.1016/j.theriogenology.2004.09.018.
- Casas I, Sancho S, Briz M, Pinart E, Bussalleu E, Yeste M, Bonet S. Freezability prediction of boar ejaculates assessed by functional sperm parameters and sperm proteins. Theriogenology. 2009 Oct 15;72(7):930-48. doi: 10.1016/j.theriogenology.2009.07.001. Epub 2009 Aug 3.
- Garrido N, Martinez-Conejero JA, Jauregui J, Horcajadas JA, Simon C, Remohi J, Meseguer M. Microarray analysis in sperm from fertile and infertile men without basic sperm analysis abnormalities reveals a significantly different transcriptome. Fertil Steril. 2009 Apr;91(4 Suppl):1307-10. doi: 10.1016/j.fertnstert.2008.01.078. Epub 2008 Mar 25.
- Garcia-Herrero S, Meseguer M, Martinez-Conejero JA, Remohi J, Pellicer A, Garrido N. The transcriptome of spermatozoa used in homologous intrauterine insemination varies considerably between samples that achieve pregnancy and those that do not. Fertil Steril. 2010 Sep;94(4):1360-1373. doi: 10.1016/j.fertnstert.2009.07.1671. Epub 2009 Sep 30.
- Garcia-Herrero S, Garrido N, Martinez-Conejero JA, Remohi J, Pellicer A, Meseguer M. Ontological evaluation of transcriptional differences between sperm of infertile males and fertile donors using microarray analysis. J Assist Reprod Genet. 2010 Feb;27(2-3):111-20. doi: 10.1007/s10815-010-9388-5. Epub 2010 Feb 2.
- Rahana AR, Ng SP, Leong CF, Rahimah MD. Comparison between mechanical freezer and conventional freezing using liquid nitrogen in normozoospermia. Singapore Med J. 2011 Oct;52(10):734-7.
- Gadea J, Molla M, Selles E, Marco MA, Garcia-Vazquez FA, Gardon JC. Reduced glutathione content in human sperm is decreased after cryopreservation: Effect of the addition of reduced glutathione to the freezing and thawing extenders. Cryobiology. 2011 Feb;62(1):40-6. doi: 10.1016/j.cryobiol.2010.12.001. Epub 2010 Dec 13.
Fechas de registro del estudio
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- 1406-ALC-048-ES
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