Ihmisen siittiöiden kryovaurioresistenssin merkit
Siemennesteen luovuttajien siittiöiden kryoresistenssin molekyylidiagnostiikka ja kliiniset tulokset keinosiemennyksen jälkeen. Spermapankin optimointi
Siittiöiden jäädyttämistä on käytetty vuosikymmeniä miesten hedelmällisyyden säilyttämiseksi ennakoitavissa tai odottamattomissa hedelmällisyyden menetyksissä tulevan isyyden takaamiseksi, ja myös avusteisten lisääntymistekniikoiden täydennyksenä.
Siittiöiden laatu sulatuksen jälkeen vaihtelee suuresti jopa samasta yksilöstä otettujen peräkkäisten näytteiden välillä, ja keskimääräinen eloonjäämisaste on noin 40 %. Tähän mennessä riittävän pakastus-/sulatusprotokollien resistenssin tai intoleranssin molekyyliperustaa ei tunneta, ja sen tietämys voi johtaa parantumiseen pakastettavien näytteiden valinnassa ja myös riittävässä kylmäsäilytysväliaineiden täydentämisessä. Microarray-analyysi tarjoaa tehokkaan työkalun molekyylin selittämiseen tämän käyttäytymisen lisäksi ja tuottaa tuloksia vertailevasta lähettiribonukleiinihapon (mRNA) ilmentymisestä kahdessa erilaisessa biologisessa tilanteessa: optimaalinen ja suboptimaalinen eloonjääminen.
Sitten tutkijoiden tutkimuksen tavoitteena on määrittää siittiönäytteiden genomiprofiili riippuen niiden selviytymisresistenssistä kryosäilytystä vastaan, selvittää geenit, jotka liittyvät kryovaurioherkkyyteen.
Tutkimuksen yleiskatsaus
Yksityiskohtainen kuvaus
Sisäkkäiset tapaukset ja kontrollit, joissa luovuttajan siittiöiden näytteet on jäädytetty tavanomaisten protokollien mukaisesti, luokiteltu niiden hyvän (GSR, n=20) (alle 20 %:n liikkuvuuden lasku) tai huonon (BSR, n=20) (yli 20 % liikkuvuuden) mukaan. lasku) eloonjäämisprosentti. Siittiöiden mRNA uutettiin käyttäen Trizol-protokollaa, suspendoitiin dietyylipyrokarbonaatilla (DEPC) käsiteltyyn veteen ja jäädytettiin -80 asteessa, kunnes mikrosirukokeet suoritettiin. RNA:t analysoitiin Agilent Bioanalyzer 2100:lla. Näytteet yhdistettiin neljään (5 näytettä/pooli ja 4 poolia/ryhmä). Lopuksi suoritettiin 8 Agilent One color Whole genomi -mikrosirua (44K) yhdistetyillä näytteillä, 4 mikrosirua ryhmää kohden.
Tulokset arvioidaan näiden erilailla ilmentyneiden geenien havaitsemiseksi.
Opintotyyppi
Ilmoittautuminen (Todellinen)
Yhteystiedot ja paikat
Opiskelupaikat
-
-
-
Alicante, Espanja, 03015
- IVI Alicante
-
-
Osallistumiskriteerit
Kelpoisuusvaatimukset
Opintokelpoiset iät
Hyväksyy terveitä vapaaehtoisia
Sukupuolet, jotka voivat opiskella
Näytteenottomenetelmä
Tutkimusväestö
Miehet 18-35 vuotta, mukana IVI Alicanten lahjoitusohjelmassa. Kaikki tarttuvat kliiniset patologiat, virusinfektiot tai geneettiset sairaudet on suljettava pois sukuhistoriasta.
Lisäksi luovuttajien siemennäytteiden on täytettävä laboratoriomme arvioimat siemennesteen kriteerit:
- siittiöiden pitoisuus> 40 miljoonaa siittiötä/ml;
- progressiivisen liikkuvuuden prosenttiosuus > 50 %
- normaalimuotojen prosenttiosuus > 4 %.
IUI:n jälkeisiin raskauksiin otetaan mukaan vain alle 40-vuotiaat naiset, joilla ei ole munanjohtimien patologiaa ja IUI-indikaatioita.
Kuvaus
Sisällyttämiskriteerit:
Luovuttajien spermapankkiin sisällyttämisessä käytetyt kriteerit otetaan huomioon:
- miehet 18-35 vuotta.
- hyvät fyysiset ja psyykkiset olosuhteet eikä perinnöllisiä sairauksia
- siemenparametrit: pitoisuus > 40 miljoonaa siittiötä/ml; Progressiivisen liikkuvuuden prosenttiosuus > 50 % normaalimuotojen prosenttiosuus > 4 %.
- Keinohedelmöityksen jälkeisiin raskauksiin otetaan mukaan vain alle 40-vuotiaat naiset, joilla ei ole munanjohtimien patologiaa ja keinosiemennysaiheita.
Poissulkemiskriteerit:
Kaikki väestö, joka ei ole sisällytetty luetteloon, suljetaan pois.
Opintosuunnitelma
Miten tutkimus on suunniteltu?
Suunnittelun yksityiskohdat
Kohortit ja interventiot
Ryhmä/Kohortti |
Interventio / Hoito |
|---|---|
|
Korkea kryoresistanssi
Suuri vastustuskyky siittiöiden kylmäsäilytystä vastaan (vähentynyt siittiöiden liikkuvuus <20 %)
|
Eri ryhmien siittiöitä kylmäsäilytetään niiden säilyvyyden arvioimiseksi.
|
|
Matala kryoresistanssi
Matala vastustuskyky siittiöiden kylmäsäilytystä vastaan (vähentynyt siittiöiden liikkuvuus >20 %)
|
Eri ryhmien siittiöitä kylmäsäilytetään niiden säilyvyyden arvioimiseksi.
|
Mitä tutkimuksessa mitataan?
Ensisijaiset tulostoimenpiteet
Tulosmittaus |
Toimenpiteen kuvaus |
Aikaikkuna |
|---|---|---|
|
Siittiönäytteiden genominen profiili riippuen niiden selviytymiskestävyydestä kylmäsäilytystä vastaan
Aikaikkuna: Puolitoista vuotta
|
Siittiönäytteiden genomiprofiili riippuen niiden selviytymisresistenssistä kylmäsäilytystä vastaan analysoidaan ja ilmaistaan seuraavasti:
|
Puolitoista vuotta
|
Toissijaiset tulostoimenpiteet
Tulosmittaus |
Toimenpiteen kuvaus |
Aikaikkuna |
|---|---|---|
|
Raskausluvut keinosiemennyksen jälkeen luovuttajan siemennesteellä eri ryhmissä.
Aikaikkuna: kaksi vuotta
|
Kun olemme saaneet eri ryhmiä sisältävien luovuttajien näytteiden genomiprofiilin, analysoimme sen suhdetta lisääntymistuloksiin, erityisesti tiineyden määrään tavanomaisen keinosiemennyksen jälkeen (positiivisen raskaustestin prosenttiosuus)
|
kaksi vuotta
|
Yhteistyökumppanit ja tutkijat
Yhteistyökumppanit
Julkaisuja ja hyödyllisiä linkkejä
Yleiset julkaisut
- Thurston LM, Siggins K, Mileham AJ, Watson PF, Holt WV. Identification of amplified restriction fragment length polymorphism markers linked to genes controlling boar sperm viability following cryopreservation. Biol Reprod. 2002 Mar;66(3):545-54. doi: 10.1095/biolreprod66.3.545.
- Thurston LM, Watson PF, Holt WV. Semen cryopreservation: a genetic explanation for species and individual variation? Cryo Letters. 2002 Jul-Aug;23(4):255-62.
- Holt WV, Medrano A, Thurston LM, Watson PF. The significance of cooling rates and animal variability for boar sperm cryopreservation: insights from the cryomicroscope. Theriogenology. 2005 Jan 15;63(2):370-82. doi: 10.1016/j.theriogenology.2004.09.018.
- Casas I, Sancho S, Briz M, Pinart E, Bussalleu E, Yeste M, Bonet S. Freezability prediction of boar ejaculates assessed by functional sperm parameters and sperm proteins. Theriogenology. 2009 Oct 15;72(7):930-48. doi: 10.1016/j.theriogenology.2009.07.001. Epub 2009 Aug 3.
- Garrido N, Martinez-Conejero JA, Jauregui J, Horcajadas JA, Simon C, Remohi J, Meseguer M. Microarray analysis in sperm from fertile and infertile men without basic sperm analysis abnormalities reveals a significantly different transcriptome. Fertil Steril. 2009 Apr;91(4 Suppl):1307-10. doi: 10.1016/j.fertnstert.2008.01.078. Epub 2008 Mar 25.
- Garcia-Herrero S, Meseguer M, Martinez-Conejero JA, Remohi J, Pellicer A, Garrido N. The transcriptome of spermatozoa used in homologous intrauterine insemination varies considerably between samples that achieve pregnancy and those that do not. Fertil Steril. 2010 Sep;94(4):1360-1373. doi: 10.1016/j.fertnstert.2009.07.1671. Epub 2009 Sep 30.
- Garcia-Herrero S, Garrido N, Martinez-Conejero JA, Remohi J, Pellicer A, Meseguer M. Ontological evaluation of transcriptional differences between sperm of infertile males and fertile donors using microarray analysis. J Assist Reprod Genet. 2010 Feb;27(2-3):111-20. doi: 10.1007/s10815-010-9388-5. Epub 2010 Feb 2.
- Rahana AR, Ng SP, Leong CF, Rahimah MD. Comparison between mechanical freezer and conventional freezing using liquid nitrogen in normozoospermia. Singapore Med J. 2011 Oct;52(10):734-7.
- Gadea J, Molla M, Selles E, Marco MA, Garcia-Vazquez FA, Gardon JC. Reduced glutathione content in human sperm is decreased after cryopreservation: Effect of the addition of reduced glutathione to the freezing and thawing extenders. Cryobiology. 2011 Feb;62(1):40-6. doi: 10.1016/j.cryobiol.2010.12.001. Epub 2010 Dec 13.
Opintojen ennätyspäivät
Opi tärkeimmät päivämäärät
Opiskelun aloitus
Ensisijainen valmistuminen (TODELLINEN)
Opintojen valmistuminen (TODELLINEN)
Opintoihin ilmoittautumispäivät
Ensimmäinen lähetetty
Ensimmäinen toimitettu, joka täytti QC-kriteerit
Ensimmäinen Lähetetty (ARVIO)
Tutkimustietojen päivitykset
Viimeisin päivitys julkaistu (TODELLINEN)
Viimeisin lähetetty päivitys, joka täytti QC-kriteerit
Viimeksi vahvistettu
Lisää tietoa
Tähän tutkimukseen liittyvät termit
Avainsanat
Muut tutkimustunnusnumerot
- 1406-ALC-048-ES
Nämä tiedot haettiin suoraan verkkosivustolta clinicaltrials.gov ilman muutoksia. Jos sinulla on pyyntöjä muuttaa, poistaa tai päivittää tutkimustietojasi, ota yhteyttä register@clinicaltrials.gov. Heti kun muutos on otettu käyttöön osoitteessa clinicaltrials.gov, se päivitetään automaattisesti myös verkkosivustollemme .
Kliiniset tutkimukset Siittiöiden kylmäsäilytys
-
Instituto Valenciano de Infertilidad, IVI VALENCIAIVI MadridRekrytointiLapsettomuus, mies | Siittiöiden määrä, alhainenEspanja