Autologní transplantace dospělých kmenových buněk odvozených z tukové tkáně pro onemocnění rohovky (A-ADAS-CT-CD)

Různé typy kmenových buněk byly různými způsoby použity v několika výzkumných projektech s cílem nalézt optimální postup pro regeneraci stromatu lidské rohovky. Zahrnoval několik přístupů, které lze klasifikovat jako intrastromální implantaci kmenových buněk (1) samotných, (2) společně s biodegradabilním skafoldem, (3) s nebiodegradovatelným skafoldem nebo (4) s decelularizovaným rohovkovým stromálním skafoldem. Ve skutečnosti složitá struktura stromatu rohovky dosud nebyla replikována a existují dobře známé nevýhody použití konstrukcí na bázi syntetického lešení. Nedávno bylo popsáno několik technik decelularizace rohovky, které poskytují acelulární rohovkovou extracelulární matrici (ECM). Tyto scafoldy si získaly pozornost v posledních několika letech, protože poskytují přirozenější prostředí pro růst a diferenciaci buněk ve srovnání se syntetickými scafoldy. Kromě toho jsou složky ECM mezi druhy obecně konzervované a jsou dobře tolerovány i xenogenními příjemci. Keratocyty jsou nezbytné pro remodelaci stromatu rohovky a pro normální fyziologii epitelu. To zdůrazňuje důležitost transplantace buněčné náhrady spolu se strukturní podporou (acelulární ECM) pro provádění těchto kritických funkcí v homeostáze rohovky. Podle nejlepšího vědomí výzkumníků všechny pokusy o repopulaci decelularizovaných korneálních skeletů využívaly rohovkové buňky, ale tyto buňky mají velké nevýhody, které znemožňují jejich autologní použití v klinické praxi (poškození dárcovské tkáně, nedostatek buněk a neefektivní buněčné subkultury), tedy snahy najít extraokulární zdroj autologních buněk. Nedávná studie výzkumníků prokázala dokonalou biointegraci lidských decelularizovaných stromálních listů rohovky (100 µm tloušťky) s a bez kolonizace h-ADASC uvnitř králičí rohovky in vivo, aniž by byla pozorována jakákoli reakce odmítnutí navzdory tomu, že štěp je xenogenní. Výzkumníci také prokázali diferenciaci h-ADASC na funkční keratocyty uvnitř těchto implantátů in vivo, které pak dosáhly jejich správné biofunkcionalizace. Podle názoru výzkumníka by transplantace kmenových buněk spolu s decelularizovanou rohovkovou ECM byla nejlepší technikou, jak efektivně obnovit tloušťku nemocné lidské rohovky, jako je tomu u keratokonu. Prostřednictvím této techniky a za použití extraokulárních mezenchymálních kmenových buněk od pacientů je možné transformovat alergenní štěpy na funkční autologní štěpy, čímž se teoreticky zabrání riziku rejekce.

Průběh procesu je definován následovně: (1) spisová studie: která začíná přijetím spisu pacienta, spis bude předán určeným lékařským koordinátorům k posouzení a předložení lékařské zprávy, následně bude lékařská zpráva vyhodnocena v rámci komise pro buněčnou terapii a pacient budou požádáni o klinické vyšetření a po konzultaci bude následovat odpověď pacientovi s lékařským rozhodnutím se souhlasem nebo nezařazením, a pokud ano, bude předložena a vysvětlena stručná zpráva o postupu podrobně pacientovi, musí být podepsán formulář souhlasu, pokud pacient souhlasí se zařazením do studie, (2) přijetí pacienta: které může začít vyplněním formulářů procedury a provedením předoperačního vyhodnocení (počáteční zpracování definováno jako klinické a biologické hodnocení na C.A.S, které může zahrnovat bez pomoci a nejlépe brýlí korigovanou zrakovou ostrost, refrakci, vyšetření štěrbinovou lampou, nitrooční tlak, fundoskopii, topografii rohovky, aberometrii, počet endoteliálních buněk (spekulární mikroskopie) a krevní testy). oftalmologem, následuje lipoaspirace podkožní tukové tkáně, kterou provede plastický chirurg, poté zpracování vzorku v zařízení cGMP pro izolaci a charakterizaci stromální vaskulární frakce obohacené o ADAS a přípravu lamin (posouzení kontroly kvality bude realizované před a po všech krocích postupu počínaje odběrem ADAS po transplantaci včetně buněčné kultury, buněčného klidu, decelularizace laminy lidské rohovky, recelulární laminy pomocí ADAS a transplantace; hodnocení bude zahrnovat životaschopnost buněk, počet buněk, buněčnou apoptózu, imunofenotypizaci, infekci, zánět pomocí analýzy secernovaných cytokinů z ADAS, řezání lamin, tloušťku lamin, imunobarvení, konfokální mikroskopii atd.); (3) porod (transplantace), který začíná peribulbární nebo retrobulbární anestezií, kde je pacient umístěn pod operační mikroskop, následuje femtosekundová laserem asistovaná střední stromální lamelární disekce, poté budou ADAS nebo laminy nebo recelulární laminy umístěny do kapsa a nakonec uzavřena vynikajícím zářezem. Pacient bude nasazen na antibiotika/steroidy na definovanou dobu a tým bude sledován po 1 týdnu, 2 týdnech, 1 měsíci, 3 měsících, 6 měsících a 1 roce.

Tento protokol buněčné terapie bude aplikován výhradně v Laser Vision (Hazmieh-Libanon) a připraven v Reviva Regenerative Medicine Center ve spolupráci s VISSUM (Alicante-Španělsko) a Optica General (Saida-Libanon).

Nábor pacienta se uskuteční: pro lipoaspiraci, zpracování, přípravu celuralizovaných lamin a hodnocení kontroly kvality v Middle East Institute of Health, Reviva Center (Bsalim-Libanon) podle předpisů nemocnice a Reviva Center; pro injekci, v Laserové vidění (Hazmieh-Libanon); a pro pokračování v Laser vision & optica general. Všechny tyto kroky řídí VISSUM (Prof. J. ALIO).