Transplantation autologue de cellules souches adultes dérivées de la graisse pour les maladies de la cornée (A-ADAS-CT-CD)

Différents types de cellules souches ont été utilisées de diverses manières dans plusieurs projets de recherche afin de trouver la procédure optimale pour régénérer le stroma cornéen humain. Il comprenait plusieurs approches qui peuvent être classées comme implantation intrastromale de cellules souches (1) seules, (2) avec un échafaudage biodégradable, (3) avec un échafaudage non biodégradable ou (4) avec un échafaudage stromal cornéen décellularisé. En fait, la structure complexe du stroma cornéen n'a pas encore été reproduite, et il existe des inconvénients bien connus à l'utilisation de conceptions à base d'échafaudage synthétique. Récemment, plusieurs techniques de décellularisation cornéenne ont été décrites, qui fournissent une matrice extracellulaire cornéenne acellulaire (ECM). Ces échafaudages ont attiré l'attention au cours des dernières années car ils fournissent un environnement plus naturel pour la croissance et la différenciation des cellules par rapport aux échafaudages synthétiques. De plus, les composants de l'ECM sont généralement conservés parmi les espèces et sont bien tolérés même par les receveurs xénogéniques. Les kératocytes sont essentiels au remodelage du stroma cornéen et à la physiologie épithéliale normale. Cela souligne l'importance de la transplantation d'un substitut cellulaire avec le support structurel (ECM acellulaire) pour entreprendre ces fonctions critiques dans l'homéostasie cornéenne. À la connaissance des chercheurs, toutes les tentatives de repeuplement d'échafaudages cornéens décellularisés ont utilisé des cellules cornéennes, mais ces cellules présentent des inconvénients majeurs qui empêchent leur utilisation autologue en pratique clinique (endommagement du tissu donneur, manque de cellules et sous-cultures cellulaires inefficaces), d'où les efforts pour trouver une source extraoculaire de cellules autologues. Une étude récente des chercheurs a montré une biointégration parfaite des feuillets stromaux cornéens décellularisés humains (épaisseur 100µm) avec et sans colonisation h-ADASC à l'intérieur de la cornée de lapin in vivo, sans observer de réponse de rejet malgré le fait que la greffe soit xénogénique. Les chercheurs ont également démontré la différenciation des h-ADASC en kératocytes fonctionnels à l'intérieur de ces implants in vivo, qui ont ensuite atteint leur propre biofonctionnalisation. Selon l'opinion de l'investigateur, la greffe de cellules souches associée à une MEC cornéenne décellularisée serait la meilleure technique pour restaurer efficacement l'épaisseur d'une cornée humaine malade, comme dans le cas du kératocône. Par cette technique, et en utilisant des cellules souches mésenchymateuses extraoculaires de patients, il est possible de transformer des greffons allergènes en greffons autologues fonctionnels, évitant théoriquement le risque de rejet.

Le flux de processus est défini comme suit : (1) l'étude du dossier : qui commence par la réception du dossier du patient, le dossier sera transmis aux médecins coordonnateurs désignés pour examen et soumission du rapport médical, puis le rapport médical sera évalué dans un délai le comité de thérapie cellulaire et le patient seront invités à un examen clinique, et après consultation une réponse au patient avec décision médicale suivra avec une approbation ou non d'être recruté et si oui, un bref rapport sur la procédure sera soumis et expliqué en détail au patient, un formulaire de consentement doit être signé si le patient accepte d'être inclus dans l'étude, (2) l'admission du patient : qui peut commencer par remplir les formulaires de procédure et faire l'évaluation préopératoire (examen initial défini comme une évaluation clinique et biologique sur C.A.S qui peut inclure l'acuité visuelle sans aide et la meilleure correction de lunettes, la réfraction, l'examen à la lampe à fente, la pression intraoculaire, la fundoscopie, la topographie cornéenne, l'aberrométrie, le nombre de cellules endothéliales (microscopie spéculaire) ainsi que des tests sanguins) par un ophtalmologiste, suivi d'une lipoaspiration du tissu adipeux sous-cutané à effectuer par un chirurgien plasticien, puis traitement des échantillons dans une installation cGMP pour l'isolement et la caractérisation de la fraction vasculaire stromale enrichie en ADAS ainsi que la préparation des lames (l'évaluation du contrôle qualité sera réalisé avant et après toutes les étapes de la procédure allant de la collecte ADAS à la transplantation incluant la culture cellulaire, la quiescence cellulaire, la décellularisation de la lame cornéenne humaine, la recellularisation des lames avec ADAS et la transplantation ; l'évaluation comprendra la viabilité cellulaire, le nombre de cellules, l'apoptose cellulaire, l'immunophénotypage, l'infection, l'inflammation par analyse des cytokines sécrétées par l'ADAS, la coupe laminaire, l'épaisseur laminaire, l'immunomarquage, la microscopie confocale, etc.) ; (3) l'accouchement (transplantation) qui commence par une anesthésie péribulbaire ou rétrobulbaire où le patient est placé sous microscope opératoire, suivi d'une dissection lamellaire médio-stromale assistée par laser femtoseconde, puis l'ADAS ou les laminas ou les laminas recellularisées seront placés dans le poche, et enfin fermé par une fermeture d'incision supérieure. Le patient sera mis sous antibiotique/stéroïdes pendant une durée définie et suivi par l'équipe à 1 semaine, 2 semaines, 1 mois, 3 mois, 6 mois et 1 an.

Ce protocole de thérapie cellulaire sera appliqué exclusivement à Laser Vision (Hazmieh-Liban) et préparé au Reviva Regenerative Medicine Center en affiliation avec VISSUM (Alicante-Espagne) et Optica General (Saida-Liban).

Le recrutement du patient aura lieu : pour la lipoaspiration, le traitement, la préparation des lames celluraisées et les évaluations de contrôle qualité, au Middle East Institute of Health the Reviva Center (Bsalim-Liban) sous les règlements de l'hôpital et du Reviva Center ; pour injection, chez Laser vision (Hazmieh-Liban) ; et pour le suivi, chez Laser vision & optica general. Toutes ces étapes sont gérées par VISSUM (Prof. J. ALIO).