Trapianto autologo di cellule staminali adulte di derivazione adiposa per malattie della cornea (A-ADAS-CT-CD)

Diversi tipi di cellule staminali sono state utilizzate in vari modi in diversi progetti di ricerca al fine di trovare la procedura ottimale per rigenerare lo stroma corneale umano. Comprendeva diversi approcci che possono essere classificati come impianto intrastromale di cellule staminali (1) da solo, (2) insieme a un'impalcatura biodegradabile, (3) con un'impalcatura non biodegradabile o (4) con un'impalcatura stromale corneale decellularizzata. In effetti, la complessa struttura dello stroma corneale non è stata ancora replicata e vi sono ben noti inconvenienti nell'uso di progetti basati su scaffold sintetici. Recentemente sono state descritte diverse tecniche di decellularizzazione corneale, che forniscono una matrice extracellulare corneale acellulare (ECM). Questi scaffold hanno attirato l'attenzione negli ultimi anni in quanto forniscono un ambiente più naturale per la crescita e la differenziazione delle cellule rispetto agli scaffold sintetici. Inoltre, i componenti dell'ECM sono generalmente conservati tra le specie e sono ben tollerati anche dai riceventi xenogenici. I cheratociti sono essenziali per il rimodellamento dello stroma corneale e per la normale fisiologia epiteliale. Ciò evidenzia l'importanza di trapiantare un sostituto cellulare insieme al supporto strutturale (ECM acellulare) per svolgere queste funzioni critiche nell'omeostasi corneale. Per quanto a conoscenza dei ricercatori, tutti i tentativi di ripopolare gli scaffold corneali decellularizzati hanno utilizzato cellule corneali, ma queste cellule presentano gravi inconvenienti che ne precludono l'uso autologo nella pratica clinica (danno del tessuto donatore, mancanza di cellule e sottocolture cellulari inefficienti), quindi gli sforzi per trovare una fonte extraoculare di cellule autologhe. Un recente studio dei ricercatori ha mostrato una perfetta biointegrazione di fogli stromali corneali decellularizzati umani (spessore 100 µm) con e senza colonizzazione h-ADASC all'interno della cornea di coniglio in vivo, senza osservare alcuna risposta di rigetto nonostante l'innesto sia xenogenico. I ricercatori hanno anche dimostrato la differenziazione degli h-ADASC in cheratociti funzionali all'interno di questi impianti in vivo, che hanno poi raggiunto la loro corretta biofunzionalizzazione. Secondo l'opinione dello sperimentatore il trapianto di cellule staminali insieme alla ECM corneale decellularizzata sarebbe la tecnica migliore per ripristinare efficacemente lo spessore di una cornea umana malata, come nel cheratocono. Attraverso questa tecnica, e utilizzando cellule staminali mesenchimali extraoculari di pazienti, è possibile trasformare innesti allergenici in innesti autologhi funzionali, evitando teoricamente il rischio di rigetto.

Il flusso del processo è definito come segue: (1) lo studio del file: che inizia ricevendo il file del paziente, il file verrà inoltrato ai coordinatori dei medici nominati per la revisione e l'invio del rapporto medico, quindi il rapporto medico sarà valutato entro al comitato di terapia cellulare e al paziente verrà richiesto un esame clinico e, previa consultazione, seguirà una risposta al paziente con decisione medica con l'approvazione o la non assunzione e, in caso affermativo, verrà presentata e spiegata una breve relazione sulla procedura in dettaglio al paziente, deve essere firmato un modulo di consenso se il paziente accetta di essere incluso nello studio, (2) il ricovero del paziente: che può iniziare con il completamento dei moduli procedurali e la valutazione preoperatoria (lavoro iniziale fino definito come una valutazione clinica e biologica su C.A.S che può includere l'acuità visiva non assistita e con la migliore correzione degli occhiali, rifrazione, esame con lampada a fessura, pressione intraoculare, fundoscopia, topografia corneale, aberrometria, conta delle cellule endoteliali (microscopia speculare) nonché esami del sangue) da un oftalmologo, seguita da lipoaspirazione del tessuto adiposo sottocutaneo da eseguire da parte di un chirurgo plastico, quindi elaborazione del campione presso una struttura cGMP per l'isolamento e la caratterizzazione della frazione vascolare stromale arricchita con ADAS e preparazione delle lamine (la valutazione del controllo di qualità sarà realizzato prima e dopo tutte le fasi della procedura a partire dalla raccolta ADAS al trapianto includendo coltura cellulare, quiescenza cellulare, decellularizzazione della lamina corneale umana, ricellularizzazione delle lamine con ADAS e trapianto; la valutazione includerà la vitalità cellulare, il numero cellulare, l'apoptosi cellulare, l'immunofenotipizzazione, l'infezione, l'infiammazione mediante l'analisi delle citochine secrete da ADAS, il taglio della lamina, lo spessore della lamina, l'immunocolorazione, la microscopia confocale, ecc.); (3) il parto (trapianto) che inizia con un'anestesia peribulbare o retrobulbare in cui il paziente viene posto sotto il microscopio operatorio, seguito da una dissezione lamellare medio-stromale assistita da laser a femtosecondi, quindi l'ADAS o le lamine o le lamine ricellularizzate saranno posizionate all'interno del tasca, ed infine chiusa da una chiusura ad incisione superiore. Il paziente verrà sottoposto ad antibiotici/steroidi per un periodo definito e seguito dal team a 1 settimana, 2 settimane, 1 mese, 3 mesi, 6 mesi e 1 anno.

Questo protocollo di terapia cellulare sarà applicato esclusivamente presso Laser Vision (Hazmieh-Libano) e preparato presso il Reviva Regenerative Medicine Center in affiliazione con VISSUM (Alicante-Spagna) e Optica General (Saida-Libano).

Il reclutamento del paziente avverrà: per la lipoaspirazione, la lavorazione, la preparazione delle lamine cellurate e le valutazioni di controllo qualità, presso il Middle East Institute of Health the Reviva Center (Bsalim-Libano) secondo i regolamenti dell'ospedale e del Reviva Center; per iniezione, a Visione laser (Hazmieh-Libano); e per il follow-up, presso Laser vision & optica general. Tutti questi passaggi sono gestiti da VISSUM (Prof. J. ALIO).