Autologiczne przeszczepy dorosłych komórek macierzystych pochodzących z tkanki tłuszczowej w przypadku chorób rogówki (A-ADAS-CT-CD)

Różne rodzaje komórek macierzystych zostały wykorzystane w różny sposób w kilku projektach badawczych w celu znalezienia optymalnej procedury regeneracji zrębu rogówki człowieka. Obejmowało ono kilka podejść, które można sklasyfikować jako śródstromalną implantację komórek macierzystych (1) samodzielnie, (2) razem z rusztowaniem biodegradowalnym, (3) z rusztowaniem nieulegającym biodegradacji lub (4) z odkomórkowionym rusztowaniem zrębu rogówki. W rzeczywistości złożona struktura zrębu rogówki nie została jeszcze odtworzona, a stosowanie syntetycznych konstrukcji opartych na rusztowaniach ma dobrze znane wady. Ostatnio opisano kilka technik decelularyzacji rogówki, które zapewniają bezkomórkową macierz zewnątrzkomórkową rogówki (ECM). Rusztowania te zyskały zainteresowanie w ciągu ostatnich kilku lat, ponieważ zapewniają bardziej naturalne środowisko dla wzrostu i różnicowania komórek w porównaniu z rusztowaniami syntetycznymi. Ponadto składniki ECM są generalnie zachowane wśród gatunków i są dobrze tolerowane nawet przez ksenogenicznych biorców. Keratocyty są niezbędne do przebudowy zrębu rogówki i prawidłowej fizjologii nabłonka. Podkreśla to znaczenie przeszczepiania substytutu komórkowego wraz ze wsparciem strukturalnym (bezkomórkowa ECM) w celu podjęcia tych krytycznych funkcji w homeostazie rogówki. Zgodnie z najlepszą wiedzą badaczy, wszystkie próby ponownego zaludnienia odkomórkowionych rusztowań rogówki wykorzystywały komórki rogówki, ale komórki te mają poważne wady, które wykluczają ich autologiczne zastosowanie w praktyce klinicznej (uszkodzenie tkanki dawcy, brak komórek i nieefektywne podhodowle komórkowe), stąd wysiłki zmierzające do znalezienia pozagałkowego źródła komórek autologicznych. Niedawne badanie przeprowadzone przez badaczy wykazało doskonałą biointegrację ludzkich odkomórkowionych arkuszy zrębu rogówki (o grubości 100 µm) z kolonizacją h-ADASC i bez kolonii wewnątrz rogówki królika in vivo, bez zaobserwowania jakiejkolwiek odpowiedzi odrzucenia, mimo że przeszczep jest ksenogeniczny. Badacze wykazali również różnicowanie h-ADASC w funkcjonalne keratocyty wewnątrz tych implantów in vivo, które następnie osiągnęły właściwą biofunkcjonalizację. Zdaniem badacza przeszczep komórek macierzystych wraz z odkomórkowioną ECM rogówki byłby najlepszą techniką skutecznego przywrócenia grubości chorej rogówki ludzkiej, takiej jak w przypadku stożka rogówki. Dzięki tej technice i użyciu zewnątrzgałkowych mezenchymalnych komórek macierzystych pochodzących od pacjentów możliwe jest przekształcenie alergennych przeszczepów w funkcjonalne autologiczne przeszczepy, teoretycznie unikając ryzyka odrzucenia.

Przebieg procesu jest zdefiniowany w następujący sposób: (1) badanie akt: które rozpoczyna się od otrzymania dokumentacji pacjenta, dokumentacja zostanie przekazana wyznaczonym koordynatorom lekarzy w celu przeglądu i złożenia raportu medycznego, następnie raport medyczny zostanie oceniony w ciągu komisja terapii komórkowej i pacjent zostaną poproszeni o poddanie się badaniu klinicznemu, a po konsultacji pacjent otrzyma odpowiedź z decyzją lekarską z akceptacją lub odmową rekrutacji, a jeśli tak, złożenie krótkiego raportu z zabiegu i wyjaśnienie szczegółowo pacjentowi, w przypadku wyrażenia przez pacjenta zgody na udział w badaniu należy podpisać formularz zgody, (2) przyjęcie pacjenta: które może rozpocząć się od wypełnienia formularzy zabiegowych i wykonania oceny przedoperacyjnej (opracowanie wstępne zdefiniowana jako ocena kliniczna i biologiczna na podstawie C.A.S, która może obejmować dokonaną bez pomocy i najlepiej skorygowaną okularami ostrość wzroku, refrakcję, badanie w lampie szczelinowej, ciśnienie wewnątrzgałkowe, badanie dna oka, topografię rogówki, aberrometrię, liczbę komórek śródbłonka (mikroskopia zwierciadlana), jak również badania krwi) okulisty, następnie lipoaspiracja podskórnej tkanki tłuszczowej do wykonania przez chirurga plastycznego, następnie obróbka próbki w zakładzie cGMP w celu izolacji i charakterystyki podścieliska frakcji naczyniowej wzbogaconej ADAS oraz przygotowanie blaszek (ocena kontroli jakości będzie zrealizowane przed i po wszystkich etapach procedury od pobrania ADAS do przeszczepu, w tym hodowli komórkowej, spoczynku komórek, decelularyzacji ludzkiej blaszki rogówki, recelularyzacji blaszek ADAS i transplantacji; ocena będzie obejmować żywotność komórek, liczbę komórek, apoptozę komórek, immunofenotypowanie, infekcję, stan zapalny poprzez analizę wydzielanych cytokin z ADAS, cięcie blaszki, grubość blaszki, barwienie immunologiczne, mikroskopię konfokalną itp.); (3) poród (przeszczep), który rozpoczyna się znieczuleniem okołogałkowym lub pozagałkowym, w którym pacjent jest umieszczany pod mikroskopem operacyjnym, po którym następuje wspomagane laserem femtosekundowym wycięcie blaszek środkowego podścieliska, po czym ADAS lub blaszki lub blaszki recelularyzowane zostaną umieszczone w kieszeń, a na koniec zamknięte przez lepsze zamknięcie nacięcia. Pacjent zostanie poddany antybiotykoterapii / sterydom przez określony czas, a zespół będzie obserwowany przez 1 tydzień, 2 tygodnie, 1 miesiąc, 3 miesiące, 6 miesięcy i 1 rok.

Ten protokół terapii komórkowej będzie stosowany wyłącznie w Laser Vision (Hazmieh-Liban) i przygotowany w Centrum Medycyny Regeneracyjnej Reviva we współpracy z VISSUM (Alicante-Hiszpania) i Optica General (Saida-Liban).

Rekrutacja pacjenta odbywać się będzie: na lipoaspirację, obróbkę, preparację blaszek stwardniałych i ocenę kontroli jakości w Bliskim Wschodzie Instytutu Zdrowia Centrum Reviva (Bsalim-Liban) na zasadach obowiązujących w szpitalu i Centrum Reviva; do wstrzykiwań, w Laser Vision (Hazmieh-Liban); oraz w celu kontynuacji w Laser Vision & optica general. Wszystkimi tymi etapami zarządza VISSUM (prof. J. ALIO).