Ubývání svalů u rakoviny (MWIC) (MWIC)

Pacienti: Budou přijati pacienti s karcinomem horního a dolního gastrointestinálního traktu pro plánovanou resekční operaci. Pacienti budou identifikováni klinickým týmem na příslušné schůzce multidisciplinárního týmu a poté budou osloveni pro informace o studii a souhlas na chirurgické klinice. Věkově odpovídající zdravé kontroly podstupující elektivní operaci pro benigní stavy (např. kýly) budou také rekrutováni.

Fenotypizace pacienta: CT skeny prováděné jako rutinní součást diagnostiky a stagingu budou použity pro analýzu tělesného složení. U všech přijatých pacientů bude jejich CT vyšetření analyzováno, pokud jsou přítomni. Kontrolní pacienti (např. kýly) nemusí mít CT vyšetření, ale bude-li k dispozici, bude analyzováno. Jediný vyškolený pozorovatel vyhodnotí příčný CT snímek ze třetího bederního obratle a odhadne objemy tkáně. Plocha průřezu pro svalovou a tukovou tkáň bude normalizována pro postavu (cm2/m2). Odhady celotělových zásob budou generovány z hrubých dat (cm2) pomocí regresních rovnic. Hranice pro nízkou muskularitu jsou založeny na studiích sarkopenie a obezity na CT u pacientů s rakovinou. V předchozí studii byl střední čas do svalové biopsie po CT vyšetření 18 dní. Fenotypizace bude také zahrnovat měření základních fyzických atributů (např. váha, výška atd.) a fyzických schopností (prostřednictvím dotazníků).

Hodnocení svalové funkce/fyzické aktivity: U všech pacientů bude na klinice provedeno objektivní posouzení fyzické schopnosti. To bude zahrnovat test „timed up and go“ a test „6 minut chůze“. Tyto testy byly dobře ověřeny v literatuře a mají dobrou spolehlivost mezi hodnotiteli. I když přinášejí mírné břemeno nepohodlí návštěvy pacientské kliniky, je to minimální. Kromě toho bude na stehno pacientů pod vodotěsným obvazem aplikován měřič fyzické aktivity. Vyšetřovatelé ověřili tyto měřiče u pacientů s rakovinou a jsou malé (35x53x7mm) a lehké (20g). Při použití v předchozích studiích, jak je uvedeno výše, pacienti zjistili, že jsou nenápadné a jsou dobře snášeny. Tam, kde je to možné, vyšetřovatelé požádají pacienty, aby opakovali „timed up and go“ a „6 minutový test chůze“ na pooperační klinice až 12 měsíců po operaci.

Hodnocení pacientem: Na běžné klinice budou všichni pacienti požádáni, aby vyplnili ověřené dotazníky týkající se jejich fyzického zdraví a jejich vnímání tohoto stavu. Ty budou použity k posouzení závažnosti komorbidity a také k posouzení křehkosti. Mezi příklady dotazníků patří skotské skóre závažnosti komorbidity, Charlsonův index komorbidity a Edmonton Frail Scale. Budou zváženy další dotazníky týkající se chuti k jídlu a funkce, které si sami uvedli, ale celkovým cílem bude položit vybrané otázky, aby se snížila zátěž dotazování a předešlo se únavě z dotazníku. Vyšetřovatelé požádají účastníky, aby opakovali tyto dotazníky na běžné klinice až 12 měsíců po operaci.

Odběr vzorků krve a moči: Na běžné klinice National Health Service (NHS) budou všichni pacienti požádáni, aby poskytli vzorek krve a moči. Tam, kde to není možné, požádá výzkumný tým o povolení k odběru těchto vzorků v celkové anestezii při plánované operaci prostřednictvím močových a cévních katetrů zavedených v rámci běžné péče. V pooperační fázi vyšetřovatelé požádají účastníky, aby poskytli vzorky krve a moči, pokud je to možné, na běžné klinice do 12 měsíců po operaci.

Svalová biopsie: Biopsie přímého břišního svalu bude při operaci odebrána operujícím chirurgem všem pacientům. Toto bude převzato z řezu provedeného pro plánovanou operaci a nevyžaduje žádné další řezy. Kde je to možné, bude pro srovnání odebrána také další jehlová biopsie kvadricepsu (stehenního svalu). Vzorky budou očištěny od tuků, krve/vláknité tkáně, bleskově zmraženy v tekutém dusíku a uloženy při -80 °C. Pro imunohistochemii (IHC) budou svalové vzorky přišity na korek, ošetřeny optimální teplotou řezání (OCT) a poté snížena do ochlazeného isopentanového rozpouštědla (-190 °C) před skladováním při -80 °C.

Tuková biopsie: Biopsie podkožního tuku a tam, kde je to možné, viscerálního tuku odebere všem pacientům v době operace operující chirurg. Tento postup nevyžaduje žádné další řezy. Tyto vzorky budou rychle zmrazeny v kapalném dusíku a skladovány při -80 °C.

Biopsie nádoru: U pacientů s rakovinou, jakmile byl resekční vzorek odebrán při operaci, bude čerstvý odvezen do patologické laboratoře, kde službukonající patolog získá části nádoru. To bude provedeno bez ohrožení klinického stadia a v souladu se současnými postupy. Vzorky nádoru se rozdělí na alikvoty a rychle zmrazí v kapalném dusíku při -80 °C. To se nevztahuje na kontrolní skupinu.

Opakovaný odběr vzorků: Na následné klinice NHS budou všichni pacienti požádáni, aby poskytli opakované vzorky krve a moči, které se rozdělí na alikvoty a rychle zmrazí v tekutém dusíku při -80 °C. Tam, kde je pacient schůdný, bude také požádán, aby provedl jedinou opakovanou biopsii čtyřhlavého svalu stehenní. To bude provedeno na klinice v lokální anestezii za použití standardní aseptické techniky. S injekcí lokálního anestetika je spojeno určité nepohodlí, ale to je přechodné. Existuje také určité nepohodlí spojené se svalovou biopsií, ale to je krátkodobé a v minulosti bylo dobře tolerováno. Biopsie kvadricepsu bude vyžadována pouze při běžné kontrole (přibližně 6-8 měsíců po operaci). Pokud je to možné, budou po dobu trvání studie požadovány opakované vzorky krve a moči při následných rutinních kontrolách. Vyšetřovatelé předpokládali, že k tomu dojde až 12 měsíců po operaci.

Imunohistochemie (IHC) a Western bloty: Budou provedeny podle předchozích publikací. Pro IHC budou zmrazené svalové řezy společně barveny na laminin a těžký řetězec myosinu nebo lla, aby se rozlišil typ vlákna. Parafínové řezy mohou být také použity a obarveny. Distribuce typů vláken, plocha průřezu jednotlivých vláken a distribuce jader (centrální versus periferní umístění pro posouzení úrovně regenerace) bude posouzeno patentovanou platformou pro analýzu obrazu. Potenciální markery pro měření budou zahrnovat členy cest autofagie (beclin, lampa, anti-thymocytární globulin (ATG)); apoptóza (polyadenosindifosfátribózapolymeráza (PARP), kaspáza-3); oxidační stres (nitrosylovaný 4-Hydroxynonenal (HNE) a ubikvitinované [K48, K63] proteiny); buněčný stres (nukleární faktor (odvozený od erytroidů 2) 2 Kelch-like erytroidní buňce odvozený protein s Cap 'N' Collar homology-associated protein 1 (NRF2KEAP1), Heat Shock Protein (HSP), endoplazmatické retikulum (ER)-stres ); zánět (IkB kináza (IKK), nukleární faktor kappa-light-chain-enhancer aktivovaných B buněk (NFkB)-9p65, str. 38, extracelulární signál-příbuzná kináza (erk)1/2, c-Jun N-terminální kináza (jnk)); zrání satelitních buněk (Paired Box (Pax)3, Pax7, Myogenní faktor (MYF)5, M-cadherin); myogeneze (myogenin, desmin); sma/matky proti dekapentaplegii (SMAD) (SMAD3, fosfoSMAD3); a P-selektin.

Analýza C - reaktivního proteinu (CRP): Systémový zánět (SI) bude hodnocen pomocí plazmatické koncentrace CRP, která bude měřena automatizovaným imunoturbidimetrickým testem na oddělení klinické chemie, Royal Infirmary of Edinburgh (RIE).

Tyto analýzy budou prováděny jak na University of Edinburgh, tak v prostorách mezinárodních spolupracovníků. Jakákoli tkáň převedená mimo péči univerzity bude plně anonymizována pomocí jedinečných studijních identifikátorů.

Tato aktuální studie je pokračováním předchozí studie financované a podporované Cancer Research United Kingdom (UK). V rámci této studie byly odebrány vzorky tkáně, z nichž některé zůstaly na univerzitě. Zkoušející mají v úmyslu použít tyto zbývající vzorky k přidání výkonu k novým vzorkům, které výzkumníci shromáždí, zvýšením velikosti kohorty, a tím i pravděpodobnosti, že jakýkoli potenciální identifikovaný biomarker bude spíše významný než chybný. Zahrnutí těchto vzorků do analýzy navíc přidá na jejich hodnotě, nad rámec již získané zařazením do předchozího projektu.