Perda muscular no câncer (MWIC) (MWIC)

Pacientes: Serão recrutados pacientes com câncer gastrointestinal superior e inferior para cirurgia de ressecção planejada. Os pacientes serão identificados pela equipe clínica na reunião da equipe multidisciplinar relevante e, em seguida, abordados para informações do estudo e consentimento na clínica cirúrgica. Controles saudáveis ​​da mesma idade submetidos a cirurgia eletiva para condições benignas (por exemplo, hérnias) também serão recrutados.

Fenotipagem do paciente: Tomografias computadorizadas realizadas como parte rotineira do diagnóstico e estadiamento serão usadas para análise da composição corporal. Todos os pacientes recrutados terão suas tomografias analisadas quando presentes. Pacientes de controle (por exemplo, hérnias) podem não ter tomografias computadorizadas, mas, quando disponíveis, serão analisadas. Uma imagem de TC transversal da terceira vértebra lombar será avaliada e os volumes de tecido estimados por um único observador treinado. A área de secção transversal para músculo e tecido adiposo será normalizada para estatura (cm2/m2). Estimativas de armazenamento de corpo inteiro serão geradas a partir de dados brutos (cm2) usando equações de regressão. Os pontos de corte para baixa musculatura são baseados em sarcopenia baseada em TC mais estudos de obesidade de pacientes com câncer. Em um estudo anterior, o tempo médio para a biópsia muscular após a tomografia computadorizada foi de 18 dias. A fenotipagem também envolverá a medição de atributos físicos básicos (por exemplo, peso, altura, etc.) e habilidades físicas autorrelatadas (através de questionários).

Avaliação da função muscular/atividade física: Uma avaliação objetiva da capacidade física será realizada na clínica para todos os pacientes. Isso envolverá um teste de "temporizado e pronto" e um teste de "caminhada de 6 minutos". Esses testes foram bem validados na literatura e têm boa confiabilidade entre avaliadores. Embora eles adicionem um leve incômodo à visita clínica do paciente, isso é mínimo. Além disso, um medidor de atividade física será aplicado na coxa dos pacientes sob um curativo à prova d'água. Os investigadores validaram esses medidores em pacientes com câncer e são pequenos (35x53x7mm) e leves (20g). Quando usados ​​em estudos anteriores como acima, os pacientes os acharam discretos e foram bem tolerados. Sempre que possível, os investigadores pedirão aos pacientes que repitam o "timed up and go" e o "teste de caminhada de 6 minutos" na clínica pós-operatória até 12 meses após a cirurgia.

Avaliação autorreferida pelo paciente: Na clínica de rotina, todos os pacientes serão solicitados a preencher questionários validados sobre sua saúde física e suas percepções sobre ela. Estes serão usados ​​para avaliar a gravidade da comorbidade e também para avaliar a fragilidade. Os questionários de exemplo incluem a pontuação escocesa de gravidade da comorbidade, o índice de comorbidade de Charlson e a escala de fragilidade de Edmonton. Outros questionários relacionados ao apetite e função autorreferidos serão considerados, mas o objetivo geral será fazer perguntas selecionadas para reduzir o fardo do questionamento e evitar a fadiga do questionário. Os investigadores pedirão aos participantes que repitam esses questionários na clínica de rotina até 12 meses após a cirurgia.

Amostragem de sangue e urina: Na clínica de rotina do Serviço Nacional de Saúde (NHS), todos os pacientes serão solicitados a fornecer uma amostra de sangue e urina. Quando isso não for possível, a equipe de pesquisa solicitará permissão para coletar essas amostras sob anestesia geral na cirurgia planejada por meio de cateteres urinários e vasculares inseridos como parte dos cuidados de rotina. Na fase pós-operatória, os investigadores solicitarão aos participantes que forneçam amostras de sangue e urina, sempre que possível, na clínica de rotina até 12 meses após a cirurgia.

Biópsia muscular: Uma biópsia do músculo reto abdominal será realizada na cirurgia pelo cirurgião operacional para todos os pacientes. Isso será retirado da incisão realizada para a cirurgia planejada e não requer mais incisões. Sempre que possível, uma biópsia de agulha adicional do quadríceps (músculo da coxa) também será amostrada para comparação. As amostras serão limpas de gorduras, sangue/tecido fibroso, congeladas em nitrogênio líquido e armazenadas a -80°C. Para imuno-histoquímica (IHC), as amostras de músculo serão costuradas em uma rolha, tratadas com temperatura de corte ideal (OCT) e então baixado em solvente isopentano resfriado (-190°C) antes do armazenamento a -80°C.

Biópsia de gordura: Uma biópsia de gordura subcutânea e, sempre que possível, gordura visceral será coletada no momento da cirurgia para todos os pacientes pelo cirurgião operacional. Este procedimento não requer quaisquer incisões adicionais. Essas amostras serão congeladas em nitrogênio líquido e armazenadas a -80°C.

Biópsia do tumor: Para os pacientes com câncer, uma vez que a amostra de ressecção tenha sido removida na cirurgia, ela será levada fresca para o laboratório de patologia, onde o patologista de plantão recuperará as seções do tumor. Isso será feito sem comprometer o estadiamento clínico e de acordo com os procedimentos atuais. As amostras tumorais serão divididas em alíquotas e congeladas em nitrogênio líquido a -80°C. Isso não se aplica ao grupo de controle.

Amostragem repetida: Na clínica de acompanhamento do NHS, todos os pacientes serão solicitados a fornecer amostras repetidas de sangue e urina, que serão divididas em alíquotas e congeladas rapidamente em nitrogênio líquido a -80°C. Quando o paciente for receptivo, ele também será solicitado a fornecer uma única biópsia de agulha repetida do músculo quadríceps. Isso será realizado na clínica sob anestesia local usando técnica asséptica padrão. Há algum desconforto associado à injeção de anestésico local, mas é transitório. Há também algum desconforto associado à biópsia muscular, mas isso é de curta duração e no passado foi bem tolerado. A biópsia do quadríceps será solicitada apenas no acompanhamento de rotina (cerca de 6-8 meses após a cirurgia). Sempre que possível, amostras repetidas de sangue e urina serão solicitadas em consultas subsequentes de acompanhamento de rotina durante o estudo. Os investigadores previram que isso ocorreria até 12 meses após a cirurgia.

Imuno-histoquímica (IHC) e Western Blots: Serão realizados conforme publicações anteriores. Para IHC, as seções musculares congeladas serão co-coradas para cadeia pesada de laminina e miosina ou lla para distinguir o tipo de fibra. Seções de parafina também podem ser usadas e coradas. A distribuição dos tipos de fibra, a área transversal de fibras individuais e a distribuição dos núcleos (localização central versus periférica para avaliar o nível de regeneração) serão avaliadas por uma plataforma proprietária de análise de imagem. Possíveis marcadores para medição incluirão vias integrantes da autofagia (beclin, lâmpada, globulina anti-timócito (ATG)); apoptose (poliadenosina difosfato ribose polimerase (PARP), caspase-3); estresse oxidativo (4-hidroxinonenal nitrosilado (HNE) e proteínas ubiquitinadas [K48, K63]); estresse celular (fator nuclear (derivado de eritroide 2) semelhante a 2 proteína derivada de célula eritroide semelhante a Kelch com proteína 1 associada à homologia Cap 'N' Collar (NRF2KEAP1), proteína de choque térmico (HSP), estresse do retículo endoplasmático (ER) ); inflamação (IkB quinase (IKK), fator nuclear kappa-potenciador de cadeia leve de células B ativadas (NFkB)-9p65, p.38, quinase extracelular relacionada ao sinal (erk)1/2, c-Jun N-terminal quinase (sink)); maturação das células satélites (Paired Box (Pax)3, Pax7, fator miogênico (MYF)5, M-caderina); miogênese (miogenina, desmina); sma/mães contra decapentaplégicos (SMAD) (SMAD3, fosfoSMAD3); e P-selectina.

Análise da proteína C - reativa (PCR): A inflamação sistêmica (IS) será avaliada pela concentração plasmática de PCR, que será medida com um ensaio imunoturbidimétrico automatizado pelo Departamento de Química Clínica, Royal Infirmary of Edinburgh (RIE).

Essas análises serão realizadas tanto na Universidade de Edimburgo quanto nas instalações de colaboradores internacionais. Qualquer tecido transferido para fora dos cuidados da Universidade será totalmente anonimizado usando identificadores de estudo exclusivos.

Este estudo atual é uma continuação de um estudo anterior financiado e apoiado pela Cancer Research United Kingdom (UK). Como parte desse estudo, amostras de tecido foram coletadas, algumas das quais permanecem na Universidade. Os investigadores pretendem usar essas amostras restantes para adicionar poder às novas amostras coletadas pelos investigadores, aumentando o tamanho da coorte e, portanto, a probabilidade de qualquer potencial biomarcador identificado ser significativo em vez de errôneo. Além disso, incluir essas amostras na análise agregará valor a elas, além do já obtido com a inclusão no projeto anterior.