Muscle Wasting in Cancer (MWIC) (MWIC)

Potilaat: Potilaat, joilla on ylemmän ja alemman maha-suolikanavan syöpä suunniteltua resektioleikkausta varten, rekrytoidaan. Kliininen tiimi tunnistaa potilaat asiaankuuluvassa monialaisen tiimin kokouksessa, ja sitten heiltä pyydetään tutkimustietoja ja suostumus kirurgisella klinikalla. Ikäiset, terveet kontrollit, joille tehdään valinnainen leikkaus hyvänlaatuisten sairauksien vuoksi (esim. tyrät) myös värvätään.

Potilaan fenotyyppi: Rutiininomaisena osana diagnoosia ja lavastusta suoritettavia CT-skannauksia käytetään kehon koostumuksen analysointiin. Kaikille palvelukseen otetuille potilaille analysoidaan CT-skannaukset, jos niitä on. Kontrollipotilaat (esim. tyrät) ei ehkä tehdä TT-skannauksia, mutta jos mahdollista, ne analysoidaan. Yksi koulutettu tarkkailija arvioi poikittaisen CT-kuvan kolmannesta lannenikamasta ja arvioi kudostilavuudet. Lihas- ja rasvakudoksen poikkileikkausala normalisoidaan pituuden mukaan (cm2/m2). Arviot koko kehon varastoista muodostetaan raakatiedoista (cm2) käyttämällä regressioyhtälöitä. Alhaisen lihaksiston rajat perustuvat CT-pohjaisiin sarkopenia- ja syöpäpotilaiden liikalihavuustutkimuksiin. Aiemmassa tutkimuksessa mediaaniaika lihasbiopsiaan TT-skannauksen jälkeen oli 18 päivää. Fenotyypitykseen kuuluu myös fyysisten perusominaisuuksien (esim. paino, pituus jne.) ja itse ilmoittamien fyysisten kykyjen mittaaminen (kyselylomakkeiden avulla).

Lihastoiminnan/fyysisen aktiivisuuden arviointi: Klinikalla tehdään objektiivinen fyysisen kyvyn arviointi kaikille potilaille. Tämä sisältää "ajastettu ja mene" -testin ja "6 minuutin kävely" -testin. Nämä testit on validoitu hyvin kirjallisuudessa ja niillä on hyvä arvioijien välinen luotettavuus. Vaikka ne lisäävätkin potilasklinikan käynnille hieman haittaa, tämä on minimaalista. Lisäksi potilaan reisille laitetaan fyysinen aktiivisuusmittari vedenpitävän siteen alle. Tutkijat ovat validoineet nämä mittarit syöpäpotilaille, ja ne ovat pieniä (35x53x7mm) ja kevyitä (20g). Käytettäessä aiemmissa tutkimuksissa, kuten edellä, potilaat ovat pitäneet niitä huomaamattomina ja ne ovat olleet hyvin siedettyjä. Mikäli mahdollista, tutkijat pyytävät potilaita toistamaan "ajastettu ja mene" ja "6 minuutin kävelytesti" postoperatiivisessa klinikassa 12 kuukauden ajan leikkauksen jälkeen.

Potilaan itse ilmoittama arviointi: Rutiiniklinikalla kaikkia potilaita pyydetään täyttämään validoidut kyselylomakkeet, jotka koskevat heidän fyysistä terveyttään ja käsityksiään tästä. Näitä käytetään arvioitaessa rinnakkaissairauksien vakavuutta ja myös haurautta. Esimerkkejä kyselylomakkeista ovat Scottish Co-Morbidity Severity Score, Charlson Co-morbidity Index ja Edmonton Frail Scale. Muita itse ilmoittamaan ruokahaluon ja toimintaan liittyviä kyselylomakkeita harkitaan, mutta yleisenä tavoitteena on esittää valikoituja kysymyksiä kyselytaakan vähentämiseksi ja kyselylomakkeiden väsymisen ehkäisemiseksi. Tutkijat pyytävät osallistujia toistamaan nämä kyselyt rutiiniklinikalla 12 kuukauden ajan leikkauksen jälkeen.

Veri- ja virtsanäytteenotto: Kansallisen terveyspalvelun (NHS) rutiiniklinikalla kaikkia potilaita pyydetään toimittamaan veri- ja virtsanäyte. Jos tämä ei ole mahdollista, tutkimusryhmä pyytää lupaa ottaa nämä näytteet yleisanestesiassa suunnitellussa leikkauksessa virtsa- ja verisuonikatetrien kautta, jotka asetetaan osana rutiinihoitoa. Leikkauksen jälkeisessä vaiheessa tutkijat pyytävät osallistujia toimittamaan veri- ja virtsanäytteitä, mikäli mahdollista, rutiiniklinikalla 12 kuukauden kuluessa leikkauksesta.

Lihasbiopsia: Leikkauskirurgi ottaa biopsian vatsasuorasta lihaksesta leikkauksen yhteydessä kaikille potilaille. Tämä otetaan suunnitellussa leikkauksessa tehdystä viillosta, eikä se vaadi muita viiltoja. Mikäli mahdollista, otetaan myös ylimääräinen neulabiopsia nelipäisestä (reisilihaksesta) vertailua varten. Näytteet puhdistetaan rasvoista, verestä/kuitukudoksesta, pakastetaan nestetypessä ja säilytetään -80°C:ssa. Immunohistokemiaa (IHC) varten lihasnäytteet ommellaan korkkiin, käsitellään optimaalisella leikkauslämpötilalla (OCT) ja sitten lasketaan jäähdytettyyn isopentaaniliuottimeen (-190 °C) ennen varastointia -80 °C:ssa.

Rasvabiopsia: Leikkauskirurgi ottaa leikkauksen yhteydessä kaikilta potilailta koepalan ihonalaisesta rasvasta ja mahdollisuuksien mukaan viskeraalisesta rasvasta. Tämä toimenpide ei vaadi ylimääräisiä viiltoja. Nämä näytteet pikapakastetaan nestetypessä ja säilytetään -80 °C:ssa.

Kasvainbiopsia: Kun syöpäpotilailla leikkausnäyte on poistettu leikkauksessa, se viedään tuoreena patologian laboratorioon, josta päivystävä patologi ottaa osia kasvaimesta. Tämä tehdään kliinisestä vaiheesta tinkimättä ja nykyisten menettelytapojen mukaisesti. Kasvainnäytteet jaetaan eriin ja pikapakastetaan nestetypessä -80 °C:ssa. Tämä ei koske kontrolliryhmää.

Toistuva näytteenotto: NHS:n seurantaklinikalla kaikkia potilaita pyydetään toimittamaan toistuvia veri- ja virtsanäytteitä, jotka jaetaan eriin ja pakastetaan nestetypessä -80 °C:ssa. Jos potilasta voidaan parantaa, häntä pyydetään myös ottamaan nelipäälihaksesta yksi toistuva neulabiopsia. Tämä tehdään klinikalla paikallispuudutuksessa käyttäen tavallista aseptista tekniikkaa. Paikallispuudutusaineen injektioon liittyy jonkin verran epämukavuutta, mutta tämä on ohimenevää. Lihasbiopsiaan liittyy myös epämukavuutta, mutta tämä on lyhytaikaista ja on aiemmin ollut hyvin siedetty. Nelipäälihaksen biopsiaa pyydetään vain rutiiniseurannassa (noin 6-8 kuukautta leikkauksen jälkeen). Mikäli mahdollista, toistetaan veri- ja virtsanäytteitä myöhemmillä rutiininomaisilla seurantakäynneillä tutkimuksen ajan. Tutkijat arvioivat tämän tapahtuvan jopa 12 kuukautta leikkauksen jälkeen.

Immunohistokemia (IHC) ja Western Blots: Nämä suoritetaan aiempien julkaisujen mukaisesti. IHC:tä varten jäädytetyt lihasleikkeet värjätään yhdessä laminiinin ja myosiinin raskaan ketjun tai lla:n suhteen kuitutyypin erottamiseksi. Parafiinileikkeitä voidaan myös käyttää ja värjätä. Kuitutyyppien jakautuminen, yksittäisten kuitujen poikkileikkauspinta-ala ja ytimien jakautuminen (keskeinen vs. perifeerinen sijainti regeneraatiotason arvioimiseksi) arvioidaan patentoidun kuva-analyysialustan avulla. Mahdollisia mittausmarkkereita ovat autofagian jäsenet (beklini, lamppu, anti-tymosyyttiglobuliini (ATG)); apoptoosi (polyadenosiinidifosfaattiriboosipolymeraasi (PARP), kaspaasi-3); oksidatiivinen stressi (nitrosyloitu 4-hydroksinonenaali (HNE) ja ubikvitinoituneet [K48, K63] -proteiinit); solustressi (ydintekijä (erytroidiperäinen 2) kaltainen 2 Kelchin kaltainen erytroidisoluista peräisin oleva proteiini, jossa on Cap 'N' Collar -homologiaan liittyvä proteiini 1 (NRF2KEAP1), lämpöshokkiproteiini (HSP), endoplasminen verkkokalvo (ER) -stressi ); tulehdus (IkB-kinaasi (IKK), ydintekijä kappa-kevytketjun tehostaja aktivoitujen B-solujen (NFkB)-9p65, s.38, solunulkoinen signaaliin liittyvä kinaasi (erk)1/2, c-Jun N-terminaalinen kinaasi (jnk)); satelliittisolujen kypsyminen (paired Box (Pax)3, Pax7, myogeeninen tekijä (MYF)5, M-kadheriini); myogeneesi (myogeniini, desmiini); sma/äidit dekapentaplegista (SMAD) vastaan ​​(SMAD3, phosphoSMAD3); ja P-selektiini.

C - reaktiivisen proteiinin (CRP) analyysi: Systeeminen tulehdus (SI) arvioidaan käyttämällä plasman CRP-pitoisuutta, joka mitataan automaattisella immunoturbidimetrisellä määrityksellä Kliinisen kemian laitoksella, Royal Infirmary of Edinburgh (RIE).

Nämä analyysit tehdään sekä Edinburghin yliopistossa että kansainvälisten yhteistyökumppaneiden tiloissa. Kaikki yliopiston hoidosta siirretyt kudokset anonymisoidaan täysin yksilöllisillä tutkimustunnisteilla.

Tämä nykyinen tutkimus on jatkoa aiemmalle tutkimukselle, jota on rahoittanut ja tukenut Cancer Research United Kingdom (UK). Osana tutkimusta kerättiin kudosnäytteitä, joista osa jää yliopistoon. Tutkijat aikovat käyttää näitä jäljellä olevia näytteitä lisätäkseen tehoa tutkijoiden keräämiin uusiin näytteisiin lisäämällä kohortin kokoa ja siten lisäämällä todennäköisyyttä, että minkä tahansa potentiaalisen biomarkkerin tunnistaminen on merkittävää eikä virheellistä. Lisäksi näiden näytteiden sisällyttäminen analyysiin lisää niiden arvoa sen lisäksi, mikä on jo saatu edellisessä projektissa.