Muscle Wasting in Cancer (MWIC) (MWIC)

Betegek: A tervezett reszekciós műtétre felső és alsó gyomor-bélrendszeri daganatos betegeket toboroznak. A betegeket a klinikai csapat azonosítja a megfelelő multidiszciplináris csoportülésen, majd a sebészeti klinikán felkeresi őket tanulmányi információk és beleegyezés céljából. Életkoruknak megfelelő, egészséges kontrollok, akik jóindulatú állapotok miatt elektív műtéten esnek át (pl. sérvek) is felvesznek.

Beteg fenotipizálás: A diagnózis és a stádiummeghatározás rutin részeként végzett CT-vizsgálatokat a testösszetétel elemzésére használják. Minden felvett páciens CT-vizsgálatát elemzik, ahol jelen vannak. Kontroll betegek (pl. sérv) előfordulhat, hogy nem végeznek CT-vizsgálatot, de ha lehetséges, azt elemzik. A harmadik ágyéki csigolyáról készült keresztirányú CT-képet egyetlen képzett megfigyelő értékeli, és a szövettérfogatot becsüli meg. Az izom- és zsírszövet keresztmetszeti területe a termetre normalizálva lesz (cm2/m2). A teljes test készleteinek becslését nyers adatokból (cm2) állítjuk elő regressziós egyenletekkel. Az alacsony izomzat határértékei CT-alapú szarkopéniával és rákos betegeken végzett elhízással kapcsolatos vizsgálatokon alapulnak. Egy korábbi vizsgálatban az izombiopsziáig eltelt medián idő CT-vizsgálat után 18 nap volt. A fenotipizálás magában foglalja az alapvető fizikai tulajdonságok (pl. súly, magasság stb.) és az önbevallott fizikai képességek mérését is (kérdőívek segítségével).

Izomfunkció/fizikai aktivitás felmérése: A klinikán minden beteg esetében objektív felmérést kell végezni a fizikai képességekről. Ez magában foglal egy „időzített és indulás” tesztet és egy „6 perces séta” tesztet. Ezeket a teszteket a szakirodalom jól validálta, és jó az értékelők közötti megbízhatóság. Bár enyhe kényelmetlenségi terhet jelentenek a betegklinikai látogatás során, ez minimális. Ezenkívül egy fizikai aktivitásmérőt helyeznek a páciens combjára vízálló kötszer alatt. A nyomozók ezeket a mérőket rákbetegeknél validálták, kicsik (35x53x7mm) és könnyűek (20g). A korábbi vizsgálatok során, a fentiek szerint, a betegek észrevétlennek találták, és jól tolerálták őket. Ahol lehetséges, a nyomozók felkérik a betegeket, hogy a műtét után 12 hónapig ismételjék meg az "időzített és menjen" és a "6 perces séta tesztet" a posztoperatív klinikán.

A páciens saját bevallása szerinti értékelése: A rutin klinikán minden pácienst felkérnek, hogy töltsön ki validált kérdőíveket testi egészségi állapotáról és ezzel kapcsolatos megítéléséről. Ezeket a társbetegségek súlyosságának, valamint a törékenység értékelésére fogják használni. A kérdőívek példái közé tartozik a skót társmorbiditás súlyossági pontszáma, a Charlson komorbiditási index és az Edmonton Frail Skála. Más kérdőíveket is figyelembe kell venni, amelyek az önbevallásos étvágyra és funkcióra vonatkoznak, de az általános cél az lesz, hogy válogatott kérdéseket tegyenek fel a kérdezés terhének csökkentése és a kérdőíves kimerültség megelőzése érdekében. A vizsgálók arra kérik a résztvevőket, hogy ismételjék meg ezeket a kérdőíveket a rutin klinikán a műtét után 12 hónapig.

Vér- és vizeletmintavétel: Az Országos Egészségügyi Szolgálat (NHS) rutin klinikáján minden betegtől vér- és vizeletmintát kérnek. Ahol ez nem lehetséges, a kutatócsoport engedélyt fog kérni arra, hogy a tervezett műtét során általános érzéstelenítésben levegyék ezeket a mintákat a rutin ellátás részeként behelyezett húgyúti és érkatétereken keresztül. A posztoperatív szakaszban a vizsgálók arra kérik a résztvevőket, hogy lehetőség szerint adjanak vér- és vizeletmintát a rutin klinikán a műtétet követő 12 hónapig.

Izombiopszia: A műtét során a kezelő sebész minden betegnél biopsziát vesz az egyenes hasizom izomzatából. Ezt a tervezett műtét során elvégzett bemetszésből veszik, és nincs szükség további bemetszésekre. Ahol lehetséges, a négyfejű izom (comb izom) kiegészítő tűbiopsziájáról is mintát vesznek összehasonlítás céljából. A mintákat megtisztítják a zsíroktól, vértől/rostos szövettől, folyékony nitrogénben lefagyasztják és -80°C-on tárolják. Immunhisztokémiához (IHC) az izommintákat parafára varrják, optimális vágási hőmérséklettel (OCT) kezelik, majd lehűtött izopentán oldószerbe (-190 °C), mielőtt -80 °C-on tárolnánk.

Zsírbiopszia: A bőr alatti zsírból, és ahol lehetséges, a zsigeri zsírból is biopsziát vesz a műtétkor minden betegnél a kezelő sebész. Ez az eljárás nem igényel további bemetszéseket. Ezeket a mintákat azonnal lefagyasztják folyékony nitrogénben, és -80 °C-on tárolják.

Tumorbiopszia: A daganatos betegeknél, miután a műtét során eltávolították a reszekciós mintát, frissen viszik a patológiai laborba, ahol az ügyeletes patológus kiveszi a daganat metszeteit. Ez a klinikai stádium veszélyeztetése nélkül és a jelenlegi eljárásoknak megfelelően történik. A tumormintákat alikvot részekre osztjuk, és folyékony nitrogénben -80 °C-on lefagyasztjuk. Ez nem vonatkozik a kontrollcsoportra.

Ismételt mintavétel: Az NHS nyomon követési klinikáján minden pácienst felkérnek, hogy adjanak ismételt vér- és vizeletmintákat, amelyeket alikvot részekre osztanak, és -80 °C-on folyékony nitrogénben lefagyasztják. Ahol a páciens kezelhető, egyszeri ismételt tűbiopsziát is kérnek a négyfejű izomból. Ezt a klinikán helyi érzéstelenítésben, szokásos aszeptikus technikával végzik. A helyi érzéstelenítő injekció beadásával jár némi kellemetlenség, de ez átmeneti. Az izombiopsziával kapcsolatban némi kellemetlenség is jár, de ez rövid életű, és a múltban jól tolerálták. Quadriceps biopsziát csak a rutin utánkövetés során (kb. 6-8 hónappal a műtét után) kérnek. Ahol lehetséges, ismételt vér- és vizeletmintát kell kérni a következő rutin utánkövetési időpontokban a vizsgálat időtartama alatt. A nyomozók előrejelzése szerint ez a műtét utáni 12 hónapig tart.

Immunhisztokémia (IHC) és Western blot: ezeket a korábbi publikációk szerint hajtják végre. Az IHC esetében a fagyasztott izommetszeteket együtt festik laminin és miozin nehézláncra vagy lla-ra a rosttípus megkülönböztetésére. Paraffin metszetek is használhatók és festhetők. A száltípusok eloszlását, az egyes szálak keresztmetszeti területét és a magok eloszlását (a regeneráció szintjének felméréséhez a központi és a perifériás elhelyezkedést) egy szabadalmaztatott képelemző platform fogja értékelni. A mérés lehetséges markerei közé tartoznak az autofágia útvonalai (beclin, lámpa, anti-timocita globulin (ATG)); apoptózis (poli adenozin-difoszfát ribóz polimeráz (PARP), kaszpáz-3); oxidatív stressz (nitrozilált 4-hidroxinonenál (HNE) és ubiquitinált [K48, K63] fehérjék); sejtstressz (Nukleáris faktor (eritroid eredetű 2)-szerű 2 Kelch-szerű eritroid sejtből származó fehérje Cap 'N' Collar homológiához kapcsolódó fehérjével 1 (NRF2KEAP1), Heat Shock Protein (HSP), endoplazmatikus retikulum (ER) stressz ); gyulladás (IkB kináz (IKK), nukleáris faktor kappa-light-chain-enhancer of activated B sejtek (NFkB)-9p65, p.38, extracelluláris szignál-kapcsolódó kináz (erk)1/2, c-Jun N-terminális kináz (jnk)); szatellit sejtérés (Paired Box (Pax)3, Pax7, Myogenic factor (MYF)5, M-cadherin); miogenezis (miogenin, dezmin); sma/mothers a decapentaplegic(SMAD) ellen (SMAD3, phosphoSMAD3); és P-szelektin.

C - reaktív fehérje (CRP) elemzése: A szisztémás gyulladást (SI) a plazma CRP-koncentrációjával értékelik, amelyet automatizált immunturbidimetriás assay-vel mérnek az Edinburgh-i Királyi Kórház Klinikai Kémiai Tanszéke (RIE).

Ezeket az elemzéseket mind az Edinburgh-i Egyetemen, mind a nemzetközi munkatársak telephelyén végzik majd. Az egyetem gondozásából átadott szöveteket egyedi vizsgálati azonosítók segítségével teljesen anonimizálják.

Ez a jelenlegi tanulmány a Cancer Research United Kingdom (Egyesült Királyság) által finanszírozott és támogatott korábbi tanulmány folytatása. A vizsgálat részeként szövetmintákat gyűjtöttek, amelyek egy része az egyetemen maradt. A Vizsgálók ezeket a fennmaradó mintákat arra kívánják felhasználni, hogy a vizsgálók által gyűjtött új mintákat a kohorsz méretének növelésével növeljék, és ezáltal növeljék annak valószínűségét, hogy bármely potenciális biomarker szignifikáns, semmint hibás. Ezen túlmenően ezeknek a mintáknak az elemzésbe való bevonása növeli értéküket az előző projektben való részvétellel már elért érték felett.