8-Hydroxy-2-deoxyguanosin, celková antioxidační kapacita u orálních premaligních a maligních lézí

Detekce molekulárních markerů ve slinách je lepší než jejich detekce v séru a jiných tělesných tekutinách, protože se jedná o snadný neinvazivní nástroj, který nevyžaduje žádné školení pro jejich odběr. Cílem naší práce tedy bylo vyšetřit slinné 8-OHdG a TAC u premaligních a maligních pacientů ve srovnání s normálními subjekty a určit jejich diagnostickou hodnotu pro maligní pacienty.

Metodologie:

Studijní populace:

Do této studie bylo zařazeno celkem 120 subjektů. Mezi klinicky testované a potvrzené subjekty patřila skupina A: 30 pacientů s diagnózou orální leukoplakie Skupina B: 30 pacientů trpících orálním lichen planus Skupina C: 30 pacientů s spinocelulárním karcinomem dutiny ústní, přičemž jazyk je nejčastěji postiženým místem Skupina D: 30 let a jedinci s odpovídajícím pohlavím, kteří nemají žádné orální slizniční léze působící jako kontrolní skupina.

U všech zúčastněných jedinců byla provedena komplexní orální diagnostika. Bioptické vzorky byly získány z různých lézí, kde byla provedena chirurgická biopsie s dvojitým klínem incizí do hloubky asi 2 mm. Vzorky byly odeslány na histopatologické vyšetření k potvrzení klinické diagnózy.

Odběr vzorků slin: Odběr celých nestimulovaných slin od všech účastníků byl proveden pomocí standardních technik. Subjekty se zdržely jídla, pití, žvýkání žvýkačky atd. po dobu nejméně ½ hodiny před vyhodnocením. Vzorky byly odebrány tak, že jednotlivci byli požádáni, aby nejprve spolkli a naklonili se. jejich hlavu dopředu a vykašlávání všech slin ve zkumavce po dobu 5 minut bez polykání. Po odběru byly všechny vzorky okamžitě skladovány při -20 °C až do testování.

Detekce 8-OHdG ve slinách: Sliny byly centrifugovány po dobu 5 minut při 5000 x g. Supernatant byl odstraněn pro stanovení 8-hydroxy-2'-deoxyguanosinu pomocí soupravy ELISA poskytnuté BioVision, USA (katalogové č. K4160-100). 8-hydroxy-2'-deoxyguanosin je oxidovaný derivát deoxyguanosinu a je jedním z hlavních produktů oxidace DNA.

Stanovení celkového antioxidačního stavu/kapacity slin (TAS/TAC) bylo provedeno pomocí soupravy ImAnOx (TAS/TAC) od společnosti Immun Diagnostik, Německo. Jedná se o fotometrický testovací systém používaný pro stanovení celkového antioxidačního stavu/kapacity v EDTA-plazmě, séru a dalších biologických vzorcích.

Stanovení antioxidační kapacity bylo provedeno reakcí antioxidantů ve vzorku s definovaným množstvím exogenně poskytnutého peroxidu vodíku (H2O2). Antioxidanty ve vzorku eliminují určité množství poskytnutého H2O2. Zbytkový H2O2 byl stanoven fotometricky enzymatickou reakcí, která zahrnuje konverzi TMB na barevný produkt. Po přidání zastavovacího roztoku byly vzorky měřeny při 450 nm ve čtečce mikrotitračních destiček. Kvantifikace byla provedena dodaným kalibrátorem. Rozdíl mezi aplikovanou a naměřenou koncentrací peroxidu v definovaném časovém období je úměrný reaktivitě antioxidantů vzorku (antioxidační kapacitě). Kvantifikace byla provedena pomocí přiloženého kalibrátoru.