8-Hydroxy-2-Desoxyguanosin, Gesamte antioxidative Kapazität bei oralen prämalignen und bösartigen Läsionen

Der Nachweis von molekularen Markern im Speichel ist ihrem Nachweis in Serum und anderen Körperflüssigkeiten überlegen, da es sich um ein einfaches, nicht-invasives Werkzeug handelt, das keine Schulung für seine Sammlung erfordert. Ziel unserer Arbeit war es daher, 8-OHdG und TAC im Speichel bei prämalignen und malignen Patienten im Vergleich zu Normalprobanden zu untersuchen und deren diagnostischen Wert für die malignen Patienten zu ermitteln.

Methodik:

Studienpopulation:

Insgesamt wurden 120 Probanden in die vorliegende Studie aufgenommen. Zu den klinisch getesteten und bestätigten Probanden gehörten Gruppe A: 30 Patienten mit diagnostizierter oraler Leukoplakie Gruppe B: 30 Patienten mit oralem Lichen planus Gruppe C: 30 Patienten mit oralem Plattenepithelkarzinom, wobei die Zunge am häufigsten betroffen ist Gruppe D: 30 Jahre alt und geschlechtsangepasste Individuen ohne Läsionen der Mundschleimhaut, die als Kontrollgruppe dienten.

Für alle teilnehmenden Personen wurde eine umfassende mündliche Diagnose durchgeführt. Biopsieproben wurden von verschiedenen Läsionen erhalten, wo eine chirurgische Doppelkeil-Inzisionsbiopsie bis zu einer Tiefe von etwa 2 mm durchgeführt wurde. Die Proben wurden zur histopathologischen Untersuchung eingeschickt, um die klinische Diagnose zu bestätigen.

Sammlung von Speichelproben: Die Sammlung von unstimuliertem Gesamtspeichel aller Teilnehmer wurde unter Verwendung von Standardtechniken durchgeführt. Die Probanden unterließen es, mindestens ½ h vor der Bewertung zu essen, zu trinken, Kaugummi usw. zu kauen. Die Proben wurden gesammelt, indem die Personen gebeten wurden, zuerst zu schlucken und zu neigen den Kopf nach vorn und spucken Sie 5 Minuten lang den gesamten Speichel in einem Röhrchen aus, ohne zu schlucken. Nach der Entnahme wurden alle Proben bis zur Untersuchung sofort bei -20 °C gelagert.

Nachweis von Speichel-8-OHdG: Speichel wurde für 5 Minuten bei 5000 x g zentrifugiert. Der Überstand wurde zur Bestimmung von 8-Hydroxy-2'-desoxyguanosin unter Verwendung eines ELISA-Kits, bereitgestellt von BioVision, USA (Katalog # K4160-100), entfernt. 8-Hydroxy-2'-desoxyguanosin ist ein oxidiertes Derivat von Desoxyguanosin und ist eines der Hauptprodukte der DNA-Oxidation.

Die Bestimmung des gesamten antioxidativen Status/der antioxidativen Kapazität (TAS/TAC) im Speichel erfolgte mit dem ImAnOx (TAS/TAC) Kit, bereitgestellt von Immun Diagnostik, Deutschland. Es ist ein photometrisches Testsystem zur Bestimmung des gesamten antioxidativen Status/Kapazität in EDTA-Plasma, Serum und anderen biologischen Proben.

Die Bestimmung der antioxidativen Kapazität erfolgte durch die Reaktion von Antioxidantien in der Probe mit einer definierten Menge an exogen zugeführtem Wasserstoffperoxid (H2O2). Die Antioxidantien in der Probe eliminieren eine bestimmte Menge des bereitgestellten H2O2. Das restliche H2O2 wurde photometrisch durch eine enzymatische Reaktion bestimmt, bei der TMB in ein farbiges Produkt umgewandelt wird. Nach Zugabe einer Stopplösung wurden die Proben bei 450 nm in einem Mikrotiterplatten-Lesegerät gemessen. Die Quantifizierung erfolgte durch den mitgelieferten Kalibrator. Die Differenz zwischen applizierter und gemessener Peroxidkonzentration in einem definierten Zeitraum ist proportional zur Reaktivität der Antioxidantien der Probe (antioxidative Kapazität). Die Quantifizierung erfolgte mit dem beiliegenden Kalibrator.