8-ヒドロキシ-2-デオキシグアノシン、口腔前悪性および悪性病変における総抗酸化能

唾液中の分子マーカーの検出は、収集のためのトレーニングを必要としない簡単な非侵襲的ツールであるため、血清やその他の体液中の分子マーカーの検出よりも優れています。 その結果、私たちの研究の目的は、正常な被験者と比較して前悪性および悪性患者の唾液中 8-OHdG および TAC を調査し、悪性患者の診断的価値を判断することでした。

方法論:

調査対象母集団：

合計120人の被験者が本研究に登録されました。 グループ A: 口腔白板症と診断された 30 人の患者 グループ B: 口腔扁平苔癬に苦しむ 30 人の患者 グループ C: 30 人の口腔扁平上皮癌患者で、舌が最も一般的に影響を受ける部位である グループ D: 30 歳および対照群として機能する口腔粘膜病変のない性別が一致した個人。

参加者全員に対して包括的な口腔診断が行われました。 生検標本は、約２ｍｍの深さまで外科的ダブルウェッジ切開生検を行った様々な病変から得た。 標本は、臨床診断を確認するために組織病理学的検査のために送られました。

唾液サンプルの収集：すべての参加者からの刺激されていない唾液全体の収集は、標準的な手法を使用して実行されました。被験者は、評価の少なくとも1/2時間前に、飲食、チューインガムなどを控えました。サンプルは、個人に最初に飲み込み、傾けるように依頼して収集されました頭を前に出し、チューブ内のすべての唾液を飲み込まずに 5 分間吐き出します。 収集後、すべてのサンプルはアッセイまで-20℃で直ちに保存されました。

唾液 8-OHdG の検出: 唾液を 5000 x g で 5 分間遠心分離しました。 BioVision, USA (カタログ番号 K4160-100) から提供された ELISA キットを使用して 8-ヒドロキシ-2'-デオキシグアノシンを測定するために、上清を除去しました。 8-ヒドロキシ-2'-デオキシグアノシンは、デオキシグアノシンの酸化誘導体であり、DNA 酸化の主要な生成物の 1 つです。

唾液の総抗酸化状態/容量 (TAS/TAC) の測定は、ドイツの Immun Diagnostik が提供する ImAnOx (TAS/TAC) キットを使用して行いました。 これは、EDTA 血漿、血清、およびその他の生物学的サンプルの総抗酸化状態/容量の決定に使用される測光試験システムです。

抗酸化能力の測定は、サンプル中の抗酸化物質と規定量の外因性過酸化水素 (H2O2) との反応によって行われました。 サンプル中の抗酸化物質は、提供された H2O2 の一定量を除去します。 残留Ｈ ２ Ｏ ２ は、ＴＭＢの着色生成物への変換を伴う酵素反応によって測光的に決定された。 停止溶液の添加後、サンプルをマイクロタイタープレートリーダーで450 nmで測定しました。 定量化は、付属のキャリブレーターによって実行されました。 定義された時間内に適用された過酸化物濃度と測定された過酸化物濃度の差は、サンプルの抗酸化物質の反応性 (抗酸化能力) に比例します。 定量は付属のキャリブレータで行った。