8-idrossi-2-desossiguanosina, capacità antiossidante totale nelle lesioni precancerose e maligne orali

Il rilevamento di marcatori molecolari nella saliva è superiore al loro rilevamento nel siero e in altri fluidi corporei poiché è uno strumento facile e non invasivo che non richiede addestramento per la sua raccolta. Di conseguenza, lo scopo del nostro lavoro era di indagare 8-OHdG e TAC salivari in pazienti precancerosi e maligni rispetto a soggetti normali e determinare il loro valore diagnostico per i pazienti maligni.

Metodologia:

Popolazione studiata:

Un totale di 120 soggetti sono stati arruolati nel presente studio. I soggetti clinicamente testati e confermati includevano Gruppo A: 30 pazienti con diagnosi di leucoplachia orale Gruppo B: 30 pazienti affetti da lichen planus orale Gruppo C: 30 pazienti con carcinoma orale a cellule squamose con la lingua che è la sede più comunemente colpita Gruppo D: 30 anni e individui abbinati al genere che non avevano lesioni della mucosa orale che fungevano da gruppo di controllo.

È stata effettuata una diagnosi orale completa per tutti gli individui partecipanti. I campioni bioptici sono stati ottenuti da varie lesioni in cui è stata eseguita una biopsia incisionale chirurgica a doppio cuneo a una profondità di circa 2 mm. I campioni sono stati inviati per l'esame istopatologico per confermare la diagnosi clinica.

Raccolta di campioni salivari: la raccolta di tutta la saliva non stimolata da tutti i partecipanti è stata eseguita utilizzando tecniche standard. I soggetti si sono astenuti dal mangiare, bere, masticare gomme ecc., per almeno ½ ora prima della valutazione. I campioni sono stati raccolti chiedendo alle persone di deglutire prima, inclinare la testa in avanti ed espettorare tutta la saliva in un tubo per 5 minuti senza deglutire. Dopo la raccolta, tutti i campioni sono stati immediatamente conservati a -20ºC fino al momento del dosaggio.

Rilevamento di 8-OHdG salivare: la saliva è stata centrifugata per 5 minuti a 5000 x g. Il surnatante è stato rimosso per la determinazione dell'8-idrossi-2'-deossiguanosina utilizzando un kit ELISA fornito da BioVision, USA (N. di catalogo K4160-100). L'8-idrossi-2'-deossiguanosina è un derivato ossidato della deossiguanosina ed è uno dei principali prodotti dell'ossidazione del DNA.

La determinazione dello stato/capacità antiossidante totale della saliva (TAS/TAC) è stata effettuata utilizzando il kit ImAnOx (TAS/TAC) fornito da Immun Diagnostik, Germania. Si tratta di un sistema di test fotometrico utilizzato per la determinazione dello stato/capacità antiossidante totale in plasma EDTA, siero e altri campioni biologici.

La determinazione della capacità antiossidante è stata effettuata mediante la reazione degli antiossidanti nel campione con una quantità definita di perossido di idrogeno fornito esogenamente (H2O2). Gli antiossidanti nel campione eliminano una certa quantità di H2O2 fornito. L'H2O2 residua è stata determinata fotometricamente mediante una reazione enzimatica che prevede la conversione del TMB in un prodotto colorato. Dopo l'aggiunta di una soluzione di arresto, i campioni sono stati misurati a 450 nm in un lettore di micropiastre. La quantificazione è stata eseguita dal calibratore fornito. La differenza tra la concentrazione di perossido applicata e misurata in un periodo di tempo definito è proporzionale alla reattività degli antiossidanti del campione (capacità antiossidante). La quantificazione è stata eseguita con il calibratore in dotazione.