8-гидрокси-2-дезоксигуанозин, общая антиоксидантная способность при предраковых и злокачественных поражениях полости рта

Обнаружение молекулярных маркеров в слюне превосходит их обнаружение в сыворотке и других жидкостях организма, поскольку это простой неинвазивный инструмент, не требующий обучения для его сбора. Следовательно, целью нашей работы было исследование слюнных 8-OHdG и TAC у предраковых и злокачественных пациентов по сравнению с нормальными субъектами и определение их диагностической ценности для злокачественных пациентов.

Методология:

Исследуемая популяция:

Всего в настоящее исследование было включено 120 человек. Клинически проверенные и подтвержденные субъекты включали группу A: 30 пациентов с диагнозом лейкоплакия полости рта. Группа B: 30 пациентов, страдающих красным плоским лишаем полости рта. Группа C: 30 пациентов с плоскоклеточным раком полости рта с наиболее часто поражаемым участком языка. Группа D: возраст 30 лет. и лица соответствующего пола, не имеющие поражений слизистой оболочки полости рта, выступающие в качестве контрольной группы.

Всем участникам была проведена комплексная устная диагностика. Образцы биопсии были получены из различных поражений, где была проведена хирургическая двойная клиновидная инцизионная биопсия на глубину около 2 мм. Образцы были отправлены на гистопатологическое исследование для подтверждения клинического диагноза.

Сбор образцов слюны. Сбор цельной нестимулированной слюны у всех участников проводился с использованием стандартных методов. Субъекты воздерживались от еды, питья, жевания резинки и т. д. в течение как минимум ½ часа до оценки. Образцы собирали, прося людей сначала проглотить, наклонить голову вперед и отхаркивают всю слюну в пробирку в течение 5 минут, не глотая. После сбора все образцы немедленно хранились при -20ºC до анализа.

Обнаружение 8-OHdG в слюне: Слюну центрифугировали в течение 5 минут при 5000 g. Супернатант удаляли для определения 8-гидрокси-2'-дезоксигуанозина с использованием набора ELISA, предоставленного BioVision, USA (каталожный № K4160-100). 8-гидрокси-2'-дезоксигуанозин представляет собой окисленное производное дезоксигуанозина и является одним из основных продуктов окисления ДНК.

Определение общего антиоксидантного статуса/способности слюны (TAS/TAC) проводили с использованием набора ImAnOx (TAS/TAC), предоставленного Immun Diagnostik, Германия. Это фотометрическая тест-система, используемая для определения общего антиоксидантного статуса/потенциала в ЭДТА-плазме, сыворотке и других биологических образцах.

Определение антиоксидантной способности проводили путем реакции антиоксидантов в образце с определенным количеством экзогенно обеспечиваемой перекиси водорода (H2O2). Антиоксиданты в образце устраняют определенное количество выделенной H2O2. Остаточный Н2О2 определяли фотометрически с помощью ферментативной реакции, включающей превращение ТМБ в окрашенный продукт. После добавления стоп-раствора образцы измеряли при 450 нм в ридере для микротитрационных планшетов. Количественное определение проводили с помощью поставляемого калибратора. Разница между нанесенной и измеренной концентрацией пероксида за определенный период времени пропорциональна реакционной способности антиоксидантов образца (антиоксидантная способность). Количественную оценку проводили с помощью прилагаемого калибратора.