8-hidroxi-2-desoxiguanosina, capacidade antioxidante total em lesões orais pré-malignas e malignas

A detecção de marcadores moleculares na saliva é superior à sua detecção no soro e outros fluidos corporais devido ao fato de ser uma ferramenta fácil, não invasiva e que não requer treinamento para sua coleta. Consequentemente, o objetivo do nosso trabalho foi investigar o 8-OHdG salivar e o TAC em pacientes pré-malignos e malignos em comparação com indivíduos normais e determinar seu valor diagnóstico para os pacientes malignos.

Metodologia:

População do estudo:

Um total de 120 indivíduos foram incluídos no presente estudo. Os indivíduos clinicamente testados e confirmados incluíram Grupo A: 30 pacientes com diagnóstico de leucoplasia oral Grupo B: 30 pacientes com líquen plano oral Grupo C: 30 pacientes com carcinoma de células escamosas oral, sendo a língua o local mais comumente afetado Grupo D: 30 anos e indivíduos do mesmo gênero sem lesões na mucosa oral, atuando como um grupo controle.

Diagnóstico oral abrangente foi feito para todos os indivíduos participantes. Espécimes de biópsia foram obtidos de várias lesões onde uma biópsia incisional cirúrgica de dupla cunha foi realizada a uma profundidade de cerca de 2 mm. Os espécimes foram enviados para exame histopatológico para confirmação do diagnóstico clínico.

Coleta de amostra salivar: A coleta de saliva total não estimulada de todos os participantes foi realizada usando técnicas padrão. Os indivíduos abstiveram-se de comer, beber, mascar chiclete, etc., por pelo menos ½ h antes da avaliação. As amostras foram coletadas pedindo aos indivíduos que engolissem primeiro, inclinassem a cabeça para frente e expectorar toda a saliva em um tubo por 5 minutos sem engolir. Após a coleta, todas as amostras foram imediatamente armazenadas a -20ºC até serem ensaiadas.

Detecção de 8-OHdG salivar: A saliva foi centrifugada por 5 minutos a 5000 x g. O sobrenadante foi removido para determinação de 8-hidroxi-2'-desoxiguanosina usando um kit ELISA fornecido pela BioVision, EUA (Catálogo # K4160-100). A 8-hidroxi-2'-desoxiguanosina é um derivado oxidado da desoxiguanosina e é um dos principais produtos da oxidação do DNA.

A determinação do estado/capacidade antioxidante total salivar (TAS/TAC) foi feita usando o kit ImAnOx (TAS/TAC) fornecido pela Immun Diagnostik, Alemanha. É um sistema de teste fotométrico usado para a determinação do estado/capacidade antioxidante total em EDTA-plasma, soro e outras amostras biológicas.

A determinação da capacidade antioxidante foi realizada pela reação dos antioxidantes da amostra com uma quantidade definida de peróxido de hidrogênio (H2O2) fornecido exogenamente. Os antioxidantes da amostra eliminam certa quantidade do H2O2 fornecido. O H2O2 residual foi determinado fotometricamente por uma reação enzimática que envolve a conversão do TMB em um produto colorido. Após a adição de uma solução de parada, as amostras foram medidas a 450 nm em um leitor de placas de microtitulação. A quantificação foi realizada pelo calibrador fornecido. A diferença entre a concentração de peróxido aplicada e medida em um período de tempo definido é proporcional à reatividade dos antioxidantes da amostra (capacidade antioxidante). A quantificação foi realizada com o calibrador incluso.