8-hydroksy-2-deoksyguanozyna, całkowita pojemność przeciwutleniająca w zmianach przednowotworowych i złośliwych jamy ustnej

Wykrywanie markerów molekularnych w ślinie ma przewagę nad ich wykrywaniem w surowicy i innych płynach ustrojowych, ponieważ jest łatwym, nieinwazyjnym narzędziem, które nie wymaga szkolenia w zakresie jego pobierania. W związku z tym celem naszej pracy było zbadanie stężenia 8-OHdG i TAC w ślinie u pacjentów przednowotworowych i złośliwych w porównaniu z osobami zdrowymi oraz określenie ich wartości diagnostycznej dla pacjentów z nowotworem złośliwym.

Metodologia:

Badana populacja:

W niniejszym badaniu wzięło udział łącznie 120 osób. Klinicznie przebadani i potwierdzeni pacjenci to Grupa A: 30 pacjentów z rozpoznaniem leukoplakii jamy ustnej Grupa B: 30 pacjentów cierpiących na liszaj płaski jamy ustnej Grupa C: 30 pacjentów z rakiem płaskonabłonkowym jamy ustnej z najczęściej dotkniętym chorobą językiem Grupa D: 30 lat i osobników dobranych pod względem płci bez uszkodzeń błony śluzowej jamy ustnej, stanowiących grupę kontrolną.

U wszystkich uczestniczących osób przeprowadzono kompleksową diagnostykę jamy ustnej. Próbki do biopsji pobrano z różnych zmian chorobowych, gdzie wykonano chirurgiczną biopsję nacięcia z podwójnym klinem na głębokość około 2 mm. Wycinki przesłano do badania histopatologicznego w celu potwierdzenia rozpoznania klinicznego.

Pobieranie próbek śliny: Pobieranie pełnej niestymulowanej śliny od wszystkich uczestników przeprowadzono przy użyciu standardowych technik. Badani powstrzymywali się od jedzenia, picia, żucia gumy itp. przez co najmniej ½ godziny przed oceną. Próbki pobierano prosząc osoby najpierw o przełknięcie, przechylenie głową do przodu i wypluwać całą ślinę w probówce przez 5 minut bez połykania. Po pobraniu wszystkie próbki były natychmiast przechowywane w temperaturze -20ºC do czasu oznaczenia.

Wykrywanie 8-OHdG w ślinie: Ślina była wirowana przez 5 minut przy 5000 x g. Supernatant usunięto w celu oznaczenia 8-hydroksy-2'-deoksyguanozyny przy użyciu zestawu ELISA dostarczonego przez BioVision, USA (nr katalogowy K4160-100). 8-hydroksy-2'-deoksyguanozyna jest utlenioną pochodną deoksyguanozyny i jest jednym z głównych produktów utleniania DNA.

Oznaczenie całkowitego stanu/pojemności antyoksydacyjnej śliny (TAS/TAC) przeprowadzono za pomocą zestawu ImAnOx (TAS/TAC) dostarczonego przez Immun Diagnostik, Niemcy. Jest to fotometryczny system testowy używany do określania całkowitego stanu/pojemności antyoksydacyjnej w osoczu z EDTA, surowicy i innych próbkach biologicznych.

Oznaczenie pojemności antyoksydacyjnej przeprowadzono poprzez reakcję przeciwutleniaczy w próbce z określoną ilością egzogennie dostarczonego nadtlenku wodoru (H2O2). Przeciwutleniacze w próbce eliminują pewną ilość dostarczonego H2O2. Resztkową zawartość H2O2 określono fotometrycznie za pomocą reakcji enzymatycznej, która obejmuje konwersję TMB do barwnego produktu. Po dodaniu roztworu zatrzymującego próbki mierzono przy 450 nm w czytniku płytek do mikromiareczkowania. Oznaczenie ilościowe zostało wykonane za pomocą dostarczonego kalibratora. Różnica między zastosowanym a zmierzonym stężeniem nadtlenku w określonym czasie jest proporcjonalna do reaktywności przeciwutleniaczy w próbce (pojemności antyoksydacyjnej). Oznaczenie ilościowe przeprowadzono za pomocą dołączonego kalibratora.