8-Hydroxy-2-Deoxyguanosine, totale antioxidantcapaciteit bij orale premaligne en kwaadaardige laesies

Detectie van moleculaire markers in speeksel is superieur aan hun detectie in serum en andere lichaamsvloeistoffen omdat het een eenvoudig, niet-invasief hulpmiddel is dat geen training vereist voor het verzamelen ervan. Bijgevolg was het doel van ons werk om 8-OHdG en TAC in speeksel te onderzoeken bij premaligne en kwaadaardige patiënten in vergelijking met normale proefpersonen en om hun diagnostische waarde voor de kwaadaardige patiënten te bepalen.

Methodologie:

Studiepopulatie:

In totaal namen 120 proefpersonen deel aan de huidige studie. Tot de klinisch geteste en bevestigde proefpersonen behoorden Groep A: 30 patiënten met de diagnose orale leukoplakie Groep B: 30 patiënten die leden aan orale lichen planus Groep C: 30 patiënten met oraal plaveiselcelcarcinoom waarbij de tong de meest aangetaste plaats is Groep D: 30 leeftijd en op geslacht afgestemde individuen die geen laesies van het mondslijmvlies hebben, fungeren als een controlegroep.

Uitgebreide orale diagnose werd gedaan voor alle deelnemende individuen. Biopsiespecimens werden verkregen uit verschillende laesies waarbij een chirurgische biopsie met dubbele wig werd uitgevoerd tot een diepte van ongeveer 2 mm. Specimens werden verzonden voor histopathologisch onderzoek om de klinische diagnose te bevestigen.

Verzameling van speekselmonsters: het verzamelen van volledig ongestimuleerd speeksel van alle deelnemers werd uitgevoerd met behulp van standaardtechnieken. Proefpersonen onthielden zich van eten, drinken, kauwgom enz. gedurende ten minste een half uur vóór de evaluatie. Monsters werden verzameld door individuen te vragen eerst te slikken, te kantelen hun hoofd naar voren en spuwt al het speeksel in een buis gedurende 5 minuten op zonder door te slikken. Na verzameling werden alle monsters onmiddellijk bewaard bij -20°C totdat ze werden getest.

Detectie van speeksel 8-OHdG: Speeksel werd 5 minuten gecentrifugeerd bij 5000 x g. Het supernatant werd verwijderd voor bepaling van 8-hydroxy-2'-deoxyguanosine met behulp van een ELISA-kit geleverd door BioVision, USA (Catalogus # K4160-100). 8-hydroxy-2'-deoxyguanosine is een geoxideerd derivaat van deoxyguanosine en is een van de belangrijkste producten van DNA-oxidatie.

Bepaling van de totale antioxidatieve status/capaciteit van het speeksel (TAS/TAC) werd gedaan met behulp van de ImAnOx (TAS/TAC)-kit geleverd door Immun Diagnostik, Duitsland. Het is een fotometrisch testsysteem dat wordt gebruikt voor de bepaling van de totale antioxidatieve status/capaciteit in EDTA-plasma, serum en andere biologische monsters.

De bepaling van het antioxidatieve vermogen werd uitgevoerd door de reactie van antioxidanten in het monster met een gedefinieerde hoeveelheid exogeen verstrekt waterstofperoxide (H2O2). De antioxidanten in het monster elimineren een bepaalde hoeveelheid van de geleverde H2O2. Het resterende H2O2 werd fotometrisch bepaald door een enzymatische reactie waarbij TMB wordt omgezet in een gekleurd product. Na toevoeging van een stopoplossing werden de monsters gemeten bij 450 nm in een microtiterplaatlezer. De kwantificering werd uitgevoerd door de geleverde kalibrator. Het verschil tussen toegepaste en gemeten peroxideconcentratie in een gedefinieerde tijdsperiode is evenredig met de reactiviteit van de antioxidanten van het monster (antioxidatieve capaciteit). Kwantificering werd uitgevoerd met de meegeleverde kalibrator.