8-hydroxy-2-deoxyguanosin, total antioxidantkapacitet i orale præmaligne og ondartede læsioner

Påvisning af molekylære markører i spyt er overlegen i forhold til deres påvisning i serum og andre kropsvæsker på grund af det faktum, at det er et let ikke-invasivt værktøj, der ikke kræver træning for dets opsamling. Derfor var formålet med vores arbejde at undersøge spyt 8-OHdG og TAC hos præmaligne og ondartede patienter sammenlignet med normale forsøgspersoner og at bestemme deres diagnostiske værdi for de ondartede patienter.

Metode:

Undersøgelsespopulation:

I alt 120 forsøgspersoner blev tilmeldt denne undersøgelse. De klinisk testede og bekræftede forsøgspersoner omfattede gruppe A: 30 patienter diagnosticeret med oral leukoplaki. Gruppe B: 30 patienter, der lider af oral lichen planus Gruppe C: 30 patienter med oral planocellulært karcinom med tungen som det hyppigst ramte sted. Gruppe D: 30 år og kønsmatchede individer uden mundslimhindelæsioner, der fungerer som en kontrolgruppe.

Der blev foretaget en omfattende oral diagnose for alle deltagende personer. Biopsiprøver blev opnået fra forskellige læsioner, hvor en kirurgisk dobbeltkile incisionsbiopsi blev udført til en dybde på ca. 2 mm. Prøver blev sendt til histopatologisk undersøgelse for at bekræfte den kliniske diagnose.

Indsamling af spytprøver: Indsamling af helt ustimuleret spyt fra alle deltagere blev udført ved hjælp af standardteknikker. Forsøgspersoner afstod fra at spise, drikke, tygge tyggegummi osv. i mindst ½ time før evalueringen. Prøver blev indsamlet ved at bede individer om at synke først, vippe hovedet fremad og opspyt alt spyt i et rør i 5 minutter uden at synke. Efter opsamling blev alle prøver straks opbevaret ved -20ºC indtil analyseret.

Påvisning af spyt 8-OHdG: Spyt blev centrifugeret i 5 minutter ved 5000 x g. Supernatanten blev fjernet til bestemmelse af 8-hydroxy-2'-deoxyguanosin under anvendelse af et ELISA-kit leveret af BioVision, USA (katalognr. K4160-100). 8-hydroxy-2'-deoxyguanosin er et oxideret derivat af deoxyguanosin og er et af de vigtigste produkter af DNA-oxidation.

Bestemmelse af spyts totale antioxidative status/kapacitet (TAS/TAC) blev udført ved hjælp af ImAnOx (TAS/TAC) Kit leveret af Immun Diagnostik, Tyskland. Det er et fotometrisk testsystem, der bruges til at bestemme den samlede antioxidative status/kapacitet i EDTA-plasma, serum og andre biologiske prøver.

Bestemmelsen af ​​den antioxidative kapacitet blev udført ved at reagere antioxidanter i prøven med en defineret mængde af eksogent tilvejebragt hydrogenperoxid (H2O2). Antioxidanterne i prøven fjerner en vis mængde af den medfølgende H2O2. Det resterende H2O2 blev bestemt fotometrisk ved en enzymatisk reaktion, som involverer omdannelse af TMB til et farvet produkt. Efter tilsætning af en stopopløsning blev prøverne målt ved 450 nm i en mikrotiterpladelæser. Kvantificeringen blev udført af den leverede kalibrator. Forskellen mellem påført og målt peroxidkoncentration i en defineret tidsperiode er proportional med reaktiviteten af ​​prøvens antioxidanter (antioxidativ kapacitet). Kvantificering blev udført med den medfølgende kalibrator.