8-hydroksi-2-deoksiguanosiini, kokonaisantioksidanttikapasiteetti suun premaligneissa ja pahanlaatuisissa leesioissa

Molekyylimarkkerien havaitseminen syljestä on parempi kuin niiden havaitseminen seerumista ja muista kehon nesteistä, koska se on helppo ei-invasiivinen työkalu, joka ei vaadi koulutusta sen keräämiseen. Tästä syystä työmme tavoitteena oli tutkia syljen 8-OHdG- ja TAC-arvoja premaligniteilla ja pahanlaatuisilla potilailla verrattuna normaaleihin koehenkilöihin ja määrittää niiden diagnostinen arvo pahanlaatuisille potilaille.

Metodologia:

Tutkimuspopulaatio:

Tähän tutkimukseen osallistui yhteensä 120 henkilöä. Kliinisesti testattuihin ja varmistettuihin koehenkilöihin kuului ryhmä A: 30 potilasta, joilla diagnosoitiin suun leukoplakia Ryhmä B: 30 potilasta, joilla oli suun lichen planus ryhmä C: 30 potilasta, joilla on suun levyepiteelisyöpä ja kieli on yleisimmin sairastunut kohta. Ryhmä D: 30 ikä ja sukupuolta vastaavat yksilöt, joilla ei ole suun limakalvovaurioita, jotka toimivat kontrolliryhmänä.

Kaikille osallistuneille tehtiin kattava suun diagnoosi. Biopsianäytteet otettiin erilaisista leesioista, joissa tehtiin kirurginen kaksoiskiila-incisionaalinen biopsia noin 2 mm:n syvyyteen. Näytteet lähetettiin histopatologiseen tutkimukseen kliinisen diagnoosin vahvistamiseksi.

Sylkinäytteenotto: Kaikilta osallistujilta kerättiin koko stimuloimaton sylki standarditekniikoilla. Koehenkilöt pidättäytyivät syömästä, juomasta, pureskelemasta kumia jne. vähintään ½ tuntia ennen arviointia. Näytteet kerättiin pyytämällä henkilöitä nielemään ensin, kallistamaan heidän päänsä eteenpäin ja yskää kaikki sylki putkeen 5 minuutin ajan ilman nielemistä. Keräyksen jälkeen kaikki näytteet säilytettiin välittömästi -20 ºC:ssa, kunnes ne määritettiin.

Syljen 8-OHdG:n havaitseminen: Sylkeä sentrifugoitiin 5 minuuttia 5000 x g:ssä. Supernatantti poistettiin 8-hydroksi-2'-deoksiguanosiinin määrittämistä varten käyttämällä BioVisionin, USA:n toimittamaa ELISA-kittiä (luettelonumero K4160-100). 8-hydroksi-2'-deoksiguanosiini on deoksiguanosiinin hapetettu johdannainen ja yksi tärkeimmistä DNA:n hapettumistuotteista.

Syljen antioksidatiivisen kokonaistilan/kapasiteetin (TAS/TAC) määritys tehtiin ImAnOx (TAS/TAC) -sarjan avulla, jonka toimitti Immun Diagnostik, Saksa. Se on fotometrinen testijärjestelmä, jota käytetään kokonaisantioksidanttitilan/kapasiteetin määrittämiseen EDTA-plasmassa, seerumissa ja muissa biologisissa näytteissä.

Antioksidatiivisen kapasiteetin määritys suoritettiin saattamalla näytteessä olevat antioksidantit reagoimaan tietyn määrän eksogeenisesti aikaansaatua vetyperoksidia (H2O2) kanssa. Näytteen antioksidantit poistavat tietyn määrän mukana tulevaa H2O2:ta. Jäännös H202 määritettiin fotometrisesti entsymaattisella reaktiolla, joka sisältää TMB:n muuntamisen värilliseksi tuotteeksi. Pysäytysliuoksen lisäämisen jälkeen näytteet mitattiin 450 nm:ssä mikrotiitterilevynlukijassa. Kvantifioinnin suoritti toimitettu kalibraattori. Ero käytetyn ja mitatun peroksidipitoisuuden välillä määritellyn ajanjakson aikana on verrannollinen näytteen antioksidanttien reaktiivisuuteen (antioksidanttikapasiteetti). Kvantitointi suoritettiin mukana toimitetulla kalibraattorilla.