8-hydroksy-2-deoksyguanosin, total antioksidantkapasitet i orale premaligne og ondartede lesjoner

Påvisning av molekylære markører i spytt er overlegen i forhold til påvisning i serum og andre kroppsvæsker på grunn av det faktum at det er et enkelt ikke-invasivt verktøy som ikke krever opplæring for å samle det. Følgelig var målet med vårt arbeid å undersøke spytt 8-OHdG og TAC hos premaligne og ondartede pasienter sammenlignet med normale forsøkspersoner og å bestemme deres diagnostiske verdi for de ondartede pasientene.

Metodikk:

Studiepopulasjon:

Totalt 120 personer ble registrert i denne studien. De klinisk testede og bekreftede forsøkspersonene inkluderte gruppe A: 30 pasienter diagnostisert med oral leukoplaki Gruppe B: 30 pasienter som lider av oral lichen planus Gruppe C: 30 pasienter med oral plateepitelkarsinom med tungen som det hyppigst rammede stedet Gruppe D: 30 år og kjønnstilpassede individer som ikke har lesjoner i munnslimhinnen som fungerer som en kontrollgruppe.

Omfattende oral diagnose ble gjort for alle deltakende individer. Biopsiprøver ble tatt fra forskjellige lesjoner hvor en kirurgisk dobbel kile snittbiopsi ble utført til en dybde på ca. 2 mm. Prøver ble sendt til histopatologisk undersøkelse for å bekrefte den kliniske diagnosen.

Innsamling av spyttprøver: Innsamling av helt ustimulert spytt fra alle deltakerne ble utført ved bruk av standardteknikker. Forsøkspersonene avsto fra å spise, drikke, tygge tyggegummi osv. i minst ½ time før evalueringen. Prøver ble samlet ved å be individene om å svelge først, vippe hodet fremover og oppspytt alt spytt i et rør i 5 minutter uten å svelge. Etter innsamling ble alle prøvene umiddelbart lagret ved -20ºC inntil de ble analysert.

Påvisning av spytt 8-OHdG: Spytt ble sentrifugert i 5 minutter ved 5000 x g. Supernatanten ble fjernet for bestemmelse av 8-hydroksy-2'-deoksyguanosin ved bruk av et ELISA-sett levert av BioVision, USA (katalognummer K4160-100). 8-hydroksy-2'-deoksyguanosin er et oksidert derivat av deoksyguanosin og er et av hovedproduktene av DNA-oksidasjon.

Bestemmelse av spytt total antioksidativ status/kapasitet (TAS/TAC) ble gjort ved bruk av ImAnOx (TAS/TAC) Kit levert av Immun Diagnostik, Tyskland. Det er et fotometrisk testsystem som brukes for å bestemme total antioksidativ status/kapasitet i EDTA-plasma, serum og andre biologiske prøver.

Bestemmelsen av den antioksidative kapasiteten ble utført ved reaksjon av antioksidanter i prøven med en definert mengde eksogent tilveiebrakt hydrogenperoksid (H2O2). Antioksidantene i prøven eliminerer en viss mengde av den medfølgende H2O2. Resterende H2O2 ble bestemt fotometrisk ved en enzymatisk reaksjon som involverer konvertering av TMB til et farget produkt. Etter tilsetning av en stoppløsning ble prøvene målt ved 450 nm i en mikrotiterplateleser. Kvantifiseringen ble utført av den leverte kalibratoren. Forskjellen mellom påført og målt peroksidkonsentrasjon i en definert tidsperiode er proporsjonal med reaktiviteten til antioksidantene i prøven (antioksidativ kapasitet). Kvantifisering ble utført med den vedlagte kalibratoren.