8-hidroxi-2-desoxiguanosina, capacidad antioxidante total en lesiones orales premalignas y malignas

La detección de marcadores moleculares en saliva es superior a su detección en suero y otros fluidos corporales por el hecho de ser una herramienta fácil y no invasiva que no requiere entrenamiento para su recolección. En consecuencia, el objetivo de nuestro trabajo fue investigar la 8-OHdG y el TAC salivales en pacientes premalignos y malignos en comparación con sujetos normales y determinar su valor diagnóstico para los pacientes malignos.

Metodología:

Población de estudio:

Un total de 120 sujetos se inscribieron en el presente estudio. Los sujetos clínicamente probados y confirmados incluyeron Grupo A: 30 pacientes diagnosticados con leucoplasia oral Grupo B: 30 pacientes con liquen plano oral Grupo C: 30 pacientes con carcinoma de células escamosas oral, siendo la lengua el sitio más comúnmente afectado Grupo D: 30 años e individuos emparejados por sexo que no tenían lesiones en la mucosa oral que actuaban como grupo de control.

Se realizó un diagnóstico oral completo para todas las personas participantes. Se obtuvieron muestras de biopsia de varias lesiones en las que se realizó una biopsia incisional quirúrgica de doble cuña a una profundidad de aproximadamente 2 mm. Las muestras se enviaron para examen histopatológico para confirmar el diagnóstico clínico.

Recolección de muestras de saliva: la recolección de saliva entera no estimulada de todos los participantes se realizó utilizando técnicas estándar. Los sujetos se abstuvieron de comer, beber, mascar chicle, etc., durante al menos ½ h antes de la evaluación. Las muestras se recolectaron pidiendo a las personas que tragaran primero, inclinaran su cabeza hacia adelante y expectorar toda la saliva en un tubo durante 5 minutos sin tragar. Después de la recolección, todas las muestras se almacenaron inmediatamente a -20ºC hasta su análisis.

Detección de 8-OHdG salival: La saliva se centrifugó durante 5 minutos a 5000 x g. Se eliminó el sobrenadante para la determinación de 8-hidroxi-2'-desoxiguanosina utilizando un kit ELISA proporcionado por BioVision, EE. UU. (n.º de catálogo K4160-100). La 8-hidroxi-2'-desoxiguanosina es un derivado oxidado de la desoxiguanosina y es uno de los principales productos de la oxidación del ADN.

La determinación del estado/capacidad antioxidante total salival (TAS/TAC) se realizó utilizando el kit ImAnOx (TAS/TAC) proporcionado por Immun Diagnostik, Alemania. Es un sistema de prueba fotométrico utilizado para la determinación del estado/capacidad antioxidante total en EDTA-plasma, suero y otras muestras biológicas.

La determinación de la capacidad antioxidante se realizó mediante la reacción de los antioxidantes de la muestra con una cantidad definida de peróxido de hidrógeno (H2O2) proporcionado exógenamente. Los antioxidantes de la muestra eliminan una cierta cantidad del H2O2 proporcionado. El H2O2 residual se determinó fotométricamente mediante una reacción enzimática que implica la conversión de TMB en un producto coloreado. Después de la adición de una solución de parada, las muestras se midieron a 450 nm en un lector de placas de microtitulación. La cuantificación fue realizada por el calibrador entregado. La diferencia entre la concentración de peróxido aplicada y medida en un período de tiempo definido es proporcional a la reactividad de los antioxidantes de la muestra (capacidad antioxidante). La cuantificación se realizó con el calibrador adjunto.