Účinnost perorálních probiotik na neonatální hyperbilirubinémii

Hyperbilirubinémie je jedním z běžných onemocnění novorozenců. Podle literatury se výskyt novorozenecké žloutenky pohybuje v západních zemích kolem 60~70 %, u novorozenců asijského etnika je ještě vyšší. Příčin novorozenecké hyperbilirubinémie je mnoho, jedním z důležitých mechanismů je nedostatek střevní mikrobiální flóry, který způsobuje přeměnu vysoké hladiny konjugovaného bilirubinu na nekonjugovaný prostřednictvím β-glukuronidázy ve střevě. Vysoká hladina nekonjugovaného bilirubinu bude absorbována nebo vrácena do krve enterohepatální cirkulací, což vede ke žloutence. Hlavní léčbou novorozenecké žloutenky je fototerapie: nekonjugovaný bilirubin se modrým světlem (vlnová délka 425-457 nm) přeměňuje na netoxický izomer.

V současné době bylo potvrzeno, že Escherichia coli (E. coli) ve střevech zvířat produkuje dva škodlivé bakteriální enzymy, β-glukosidázu a β-glukuronidázu. V posledních letech proto vědci ke studiu léčby novorozenecké žloutenky používají probiotika, která inhibují růstové charakteristiky patogenních bakterií. Chen Yi-Ji a kol. prokázali, že probiotika inhibují aktivitu střevní β-glukuronidázy, zabraňují přeměně konjugovaného bilirubinu na nekonjugovaný bilirubin, čímž snižují hladinu nekonjugovaného bilirubinu v krvi. Výzkum Funda Tuzun et al. ukazuje, že probiotika bifidobakterií předcházejí žloutence mateřského mléka a probiotika předcházejí žloutence zvýšením střevní peristaltiky a mikrobiální flóry. Kromě toho mnoho studií ukázalo, že druhy Lactobacillus a Bifidobacterium mají inhibiční účinnost na intestinální β-glukuronidázovou aktivitu, ale neexistuje žádný konkrétní údaj o tom, který kmen má nejlepší inhibiční účinnost. Na základě výše uvedeného výzkumu je otázkou, kterou si vyšetřovatelé potřebují objasnit, zda perorální probiotika mohou upravit střevní mikrobiální flóru novorozenců se žloutenkou? Je nějaký rozdíl ve zlepšení novorozenecké žloutenky přidáním probiotik do mateřského mléka, umělé výživy nebo míchaného mléka? Proto tato studie nejprve prověří probiotika, která mají nejlepší inhibiční účinnost na aktivitu střevní β-glukuronidázy. Ve druhé fázi budou výsledky první fáze použity k provedení neonatální žloutenky perorální probiotické dvojitě zaslepené randomizované studie a bude sledována terapeutická účinnost.

Tato zkouška bude provedena ve dvou fázích v pokoji pro nemocné děti v dětské nemocnici Čínské lékařské univerzity (CMUH). První etapa je: kit API ZYM byl použit ke stanovení β-glukuronidázové aktivity 9 kmenů Lactobacillus a 4 kmenů Bifidobacterium, screeningem probiotik, která mají nejlepší inhibiční účinnost na střevní β-glukuronidázovou aktivitu; Druhá fáze je: s využitím výsledků analýzy první fáze léčba novorozenců se žloutenkou perorálními probiotiky. Kritéria pro zařazení kojenců se žloutenkou byla následující: donošené dítě (≧37 týdnů) mělo čtvrtý den po narození index žloutenky vyšší než 15 mg/dl, zatímco novorozenci s hypotyreózou, trizomií 21, mateřskou krevní skupinou A, Inkompatibilita B a O, gastrointestinální onemocnění, nedostatek glukózo-6-fosfátdehydrogenázy (nedostatek G6PD), hemangiom, cefalhematom nebo krvácení, těžká asfyxie (stadium III), fetální chromozomální anomálie, cyanotické vrozené srdeční onemocnění, omfalokéla, časná sepse nebo selhání jater byli vyloučeni. Druhé stadium žloutenky novorozenců bude rozděleno do tří skupin: (I. experimentální skupina) světelná terapie + Lactobacillus salivarius (L. salivarius), (II. experimentální skupina) světelná terapie + Bifidobacterium Animalis poddruh Lactis (B. Animalis subsp. Lactis), (III. kontrolní skupina) světelná terapie + placebo. Studie bude probíhat po dobu 7 dnů, hladina sérového bilirubinu bude měřena stejnou skupinou zkušených sester každý den a u všech dětí jsou sledovány nepříznivé stavy, jako je zvracení, průjem nebo nadýmání.

Výpočet velikosti vzorku ve druhé fázi: Podle výzkumu Chou Hung-Chieh et al. byl výskyt neonatální hyperbilirubinémie 30,5 % pro koncentraci ≧ 15 mg/dl. výzkumníci předpokládají, že experimentální skupina má 50% zlepšení ve srovnání s kontrolní skupinou. Pokud vyšetřovatelé připustí 5% pravděpodobnost chyby typu 1 (α=0,05) a 10% pravděpodobnost chyby typu 2 (β=0,1), potom bude požadovaná velikost vzorku v každé skupině 60 osob (celkem 180 miminek).

Výzkumná data budou založena na statistickém softwaru (nazývaném IBM SPSS) pro analytickou statistiku. Normálně distribuovaná data byla analyzována pomocí Studentova dvoustranného testu t-testu a data nenormálně distribuovaná byla analyzována pomocí Wilcoxonova testu se znaménkem. Data byla prezentována jako průměr ± standardní odchylka (SEM) nebo medián, přičemž hodnoty P < 0,05 byly považovány za statisticky významné.