Fibrotické zaměření u rakoviny prsu

Pozadí Karcinomy prsu vykazují široký rozsah morfologických znaků s prokázaným prognostickým významem. Tyto funkce mají tu výhodu, že je lze snadno vyhodnotit v rutinním hlášení; nabízí tak velký klinický potenciál. V naší dřívější analýze bylo prokázáno, že fibrotické ohnisko (FF) má přidanou hodnotu k současnému stagingu. FF označuje centrální oblast podobnou jizvám v invazivním nádoru a je obklopena vysoce buněčnou zónou infiltrujících nádorových buněk. Skládá se z fibroblastů a kolagenových vláken tvořících radiálně expandující fibrosklerotické jádro s výskytem kolem 20 %. Přesné složení různých složek v rámci FF může ovlivnit jeho prognostickou hodnotu u rakoviny prsu.

Nejvýraznějšími znaky u FF jsou fibroblasty spojené s rakovinou (CAF) a kolagenové složky. FF s proliferativním CAF byla spojena s vyšším rizikem metastáz. Navíc CAF identifikované fibroblastickými markery korelovaly s recidivou rakoviny prsu. U karcinomu prsu byly nedávno charakterizovány různé podskupiny CAF pomocí diferenciálních fibroblastických markerů. Byly přítomny v různých poměrech v podtypech rakoviny prsu a měly odlišný dopad na imunitní mikroprostředí nádoru (TME). Nicméně vztah mezi podtypy CAF a FF a to, zda ovlivní prognostický dopad FF, zůstávají nejasné. Kromě CAF je stále více oceňován silný vliv obsahu kolagenu u rakoviny. Kolagenové stroma může modulovat imunitní TME inhibicí infiltrace CD8 T lymfocytů. Exprese kolagenu a dalších složek extracelulární matrix je prognostická u různých typů pacientů s rakovinou, včetně rakoviny prsu. U FF stále chybí podrobná analýza obsahu kolagenu. Odlišné složení a organizace kolagenu by také mohly ovlivnit prognostické schopnosti FF. Základní mechanismy účinků FF jsou z velké části neznámé. K dnešnímu dni existuje velmi málo zpráv o molekulární analýze rakoviny prsu s FF. FF je spojován se zvýšenou angiogenezí, expresí markerů hypoxie a aktivací hypoxií indukovatelné dráhy faktoru-1α a současně zvýšenou infiltrací makrofágů asociovaných s nádorem (TAM). Zkoumání dalších klíčových biomarkerů, které se účastní, poskytne další informace o prognóze FF.

V tomto návrhu bude provedeno systémové hodnocení vlastností FF u karcinomů prsu. Naším cílem je dále podrobně charakterizovat FF na různých úrovních. Nakonec plánujeme vyvinout prognostický model integrující různé vlastnosti FF pro přesnější stratifikaci rizika.

Návrh studie Charakterizovat FF na základě morfologických, strukturálních a molekulárních znaků Budou zkoumány různé morfologické znaky FF a korelovány s klinicko-patologickými parametry a podtypy karcinomu prsu. Pro charakterizaci kolagenového stromatu bude exprese těchto různých kolagenů stanovena IHC analýzou. Strukturální charakteristiky kolagenových vláken budou stanoveny na základě signálu SHG a/nebo barvení piko-Siriusovou červení. Bude porovnáno složení kolagenu a strukturní znaky u případů s různými morfologickými znaky FF.

Pro charakterizaci fibroblastických složek budou populace CAF určeny IHC analýzou. Na základě hlášených fenotypů CAF budou markery CAF vyšetřeny na po sobě jdoucích IHC preparátech. Koexprese CAF markerů bude hodnocena pomocí vícenásobného IHC zarovnání. Bude zkoumán vztah subpopulací CAF k FF a kolagenovým rysům a také klinicko-patologickým charakteristikám.

Budou zkoumáni kandidáti z nejvyšších diferenciálních genů a drah zapojených do FF. Kandidáti budou upřednostněni také na základě přehledu publikované literatury a její biologické relevance.

Pro klasifikaci FF na základě různých znaků bude provedena hierarchická shluková analýza. Bude zkoumána korelace definovaných podskupin FF a klinicko-patologických rysů.

Stanovení vlivu FF na imunitní TME Abychom prozkoumali účinky FF na imunitní TME, budeme zkoumat několik populací imunitních buněk in situ současně pomocí mIHC. Pacienti budou seskupeni na základě jejich profilů imunitních buněk. Hustota imunitních buněk, jejich relativní poměr, imunitní profil a prostorový vztah s nádorovými buňkami budou hodnoceny ve vztahu k různým FF rysům a porovnány mezi FF a non-FF případy. Bude hodnocena souhra imunitních vlastností a FF v prognóze.

Zkoumat prognostickou hodnotu FF u karcinomu prsu. Po prozkoumání klinicko-patologické korelace různých znaků FF a jejich vztahu k imunitnímu prostředí nádoru bude jejich prognostická hodnota na celkové přežití, recidivu a metastázy analyzována pomocí Kaplan-Meierovy metody. Jejich prognostické dopady budou vzájemně porovnány pomocí jednorozměrného Coxova modelu proporcionálních rizik. Jejich nezávislá prognostická hodnota bude stanovena multivariační analýzou spolu s dalšími konvenčními prognostickými markery. Na základě nezávislých rizikových faktorů odvozených z vícerozměrné analýzy bude vytvořen nový prediktivní model. K identifikaci mezní hodnoty bude použita křivka provozní charakteristiky přijímače (ROC).