Arteriální složení a kardiovaskulární výsledek u diabetu (ACCODIS)

Popis projektu PhD

Arteriální stěna u pacientů s diabetem: Předpovídají změny v arteriálních bazálních membránových proteinech budoucí arteriální onemocnění? Změnily se procesy přestavby?

Žadatel: Anne-Sofie Faarvang Thorsen1, MD

Hlavní školitel: Profesor Lars Melholt Rasmussen1

Spoluškolitelé: doc. Profesor Michael Hecht Olsen2

Doc. Profesor Martin Overgaard1

Spolupracovníci: Režisér Morten Karsdal, Nordic Bioscience3

Konzultant Lars Peter Riber4

Profesor Peter Nilsson5

1: Oddělení klinické biochemie a farmakologie Fakultní nemocnice Odense. 2: Interní klinika, Holbaek Hospital, University of Southern Denmark. 3: Nordic Biosciences 4: Oddělení srdeční, cévní a hrudní chirurgie, Odense University Hospital 5: Malmö Diet and Cancer Study, Malmö, Švédsko

Popis projektu Kardiovaskulární onemocnění (KVO) se často vyskytují u jedinců s diabetes mellitus 2. typu (T2DM), u T2DM je významně zvýšená mortalita po srdečních zákrocích a kardiovaskulárních příhodách. Nedávno jsme identifikovali řadu odlišných molekulárních změn v neaterosklerotických částech arteriálního stromu u diabetu, které představují prvky generalizované diabetické vaskulární patologie. Není známo, zda tyto generalizované diabetické změny souvisejí s rozvojem klinických kardiovaskulárních onemocnění.

Celková hypotéza Naší celkovou hypotézou je, že specifické změny arteriálních proteinů, zejména související s molekulami bazální membrány, jak je vidět u T2DM, jsou následovány dysfunkční remodelací cév (dovnitř namísto ven). Takové změny mohou poskytnout pozadí pro redukci lumen ve vztahu k ateroskleróze u diabetu a vysvětlit vysoký výskyt KVO u těchto pacientů.

Cíle a návrhy studia

V tomto doktorandském projektu budeme testovat dva aspekty této hypotézy s následujícími cíli:

1. Zjistíme, zda přítomnost diabetického arteriálního proteinového vzoru predikuje budoucí výskyt kardiovaskulárních příhod a výskyt redukce lumenu a nakonec okluze v reparační cévě (levá vnitřní mamární arterie (LIMA)) po by-passových operacích.

   Budeme kvantifikovat specifické proteiny bazální membrány tepen cílenou proteomovou analýzou v neaterosklerotické lidské arteriální tkáni (reparační tepna z operací koronárního bypassu) a v plazmě pomocí imunotestů u velké skupiny pacientů s koronárním bypassem s nebo bez T2DM. Zjistíme, zda koncentrace těchto složek v následné studii predikuje okluzi (klinická proxy pro redukci lumen) samotné reparační cévy, výskyt kardiovaskulárních příhod a/nebo rozvoj diabetického onemocnění malých a velkých cév.

2. Zjistíme, zda se dysfunkční arteriální remodelace vyskytuje u T2DM nebo u jedinců s poruchou glykémie nalačno ve vztahu k hromadění plaku v karotické tepně. Identifikujeme tedy vliv T2DM na vztah mezi množstvím aterosklerózy, remodelací (velikost lumina a stěna tloušťka) a krevní tlak u dříve skenovaných jedinců z Malmö Diet and Cancer Study.

Perspektiva Výsledky poskytnou důležité informace o tom, zda se změny arteriální matrix u diabetu podílejí na rozvoji kardiovaskulárních příznaků a navíc určí, zda u diabetu dochází k dysfunkční remodelaci.

Takový patofyziologický náhled je nezbytným předpokladem pro:

• lepší biomarkery pro diagnostiku a stratifikaci pacientů s T2DM s rizikem arteriálního onemocnění
• vývoj nových cílů pro léčbu komplikací velkých cév u diabetu

Pozadí T2DM je závažné onemocnění, které má za následek postižení různých orgánových systémů, včetně kardiovaskulárního systému (1). Diabetes je globální hrozba, která postihuje všechny části světa. Počet lidí trpících T2DM se zvyšuje a očekává se, že v roce 2030 vzroste na více než 350 milionů lidí na celém světě (2). Pacienti s T2DM mají zvýšené riziko morbidity a mortality KVO, jako je cévní mozková příhoda a akutní infarkt myokardu (AMI), a mají kratší očekávanou délku života (3, 4). Diabetes také zvyšuje riziko mikrovaskulárních komplikací, jako je diabetická retinopatie (5).

Arteriální tkáň je postižena cukrovkou. Arteriální patologie zahrnuje změny v extracelulární matrici, zvýšenou arteriální tuhost, dysfunkční remodelaci (6), endoteliální dysfunkci a akcelerovanou aterosklerózu. Předpokládá se, že arteriální tuhost u diabetických pacientů s hypertenzí koreluje s endoteliální dysfunkcí (7). Pacienti s T2DM, kteří podstoupili bypass koronární arterie (CABG), mají zvýšené riziko úmrtí ve srovnání s pacienty bez diabetu, jak ukazuje švédská studie SWEDEHEART (8). Diabetes ovlivňuje dlouhodobé přežití po CABG, a pokud má pacient diabetické onemocnění ledvin nebo jiné diabetické cévní komplikace, rozdíl je ještě hlubší (9). Přesné mechanismy, které spojují T2DM s CVD, nejsou plně pochopeny. Během posledních let jsme identifikovali molekulární změny v arteriální stěně u lidí s T2DM. Pomocí technik microarray pro analýzu RNA jsme zjistili, že specifické molekulární dráhy byly změněny v arteriální tkáni u diabetu. Tyto dysregulované dráhy zahrnovaly inzulínovou signalizaci a biosyntézu matrice (10). Také jsme pozorovali, že bazální membrána a molekula související s elastinem nazývaná fibulin-1 je přítomna ve zvýšeném množství u diabetu (11-13). Poté jsme byli schopni prokázat, že zvýšené množství fibulinu-1 v plazmě koreluje s kardiovaskulárními morbiditami a predikuje mortalitu (11, 13, 14). Nedávno jsme použili proteomovou analýzu lidských tepen k nalezení arteriálních proteinů s různými koncentracemi v diabetických tepnách (15).

Pozorovali jsme, že většina proteinů bazální membrány a určité proteiny související s fenotypovými stavy hladkého svalstva v kombinaci s jinými peptidy jsou u diabetu přítomny ve změněných koncentracích.

Jak již bylo zmíněno, rozumíme pouze některým procesům, které spojují diabetes s rozvojem KVO. Musíme ještě určit, zda se výše uvedená zjištění skutečně podílejí na rozvoji klinických CVD.

Celková hypotéza tohoto PhD-projektu je znázorněna na obrázku 1 výše: Metabolické a hormonální faktory vedou ke změnám bazální membrány tepen difúzně v arteriálním stromě. To vede ke změněné schopnosti arteriální stěny adaptovat se vnější remodelací jako normální důsledek aterosklerózy. Naopak dochází ke smršťování dovnitř, což vede k obstrukcím lumen. Generalizované diabetické změny matrice tepen tedy mohou nakonec vést k obstrukcím arteriálního lumenu a klinickým symptomům spojujícím molekulární změny s rozvojem CVD.

Pacienti s T2DM mají zvýšené sérové ​​hladiny fibulinu-1, zvýšenou expresi elementů z lamina basalis v levé vnitřní mamární tepně a zvýšenou glykaci kolagenu v arteriální stěně v důsledku hyperglykémie (13). To vše může přispívat ke zvýšené centrální arteriální tuhosti pozorované u T2DM, která může být hodnocena rychlostí tepové vlny karotidové femuru (cfPWV). Normální stárnutí stejně jako hypertenze je v karotických tepnách spojeno s hypertrofickou remodelací se zvětšením jak průměru lumen, tak tloušťky stěny, hodnocené pomocí tloušťky intima-media (IMT). Nedávno jsme prokázali, že progrese IMT je spojena se součtem kardiovaskulárních rizikových faktorů, ale s rozdílným podílem jednotlivých rizikových faktorů v a. carotis communis (CCA) a bifurkaci. Samotná IMT však nemusí plně odrážet remodelaci karotické tepny, protože lumen se může ve srovnání s IMT měnit odlišně v reakci na určité kardiovaskulární rizikové faktory. Progrese IMT je pozitivně spojena s většinou kardiovaskulárních rizikových faktorů, zatímco zvýšený lumen je primárně spojen se stárnutím a hypertenzí (16). Dále bylo prokázáno, že koronární ateroskleróza vede u T2DM k vnitřní remodelaci namísto vnější, která může být sekundární k tužším tepnám a vysvětluje opačný výsledek po perkutánní koronární intervenci (PCI) u T2DM.

Doktorské studium se bude skládat ze dvou nezávislých dílčích studií, jak je popsáno níže.

Studium 1

Hypotéza Předpokládáme, že množství proteinů bazální membrány v arteriální tkáni a plazmě pacientů s T2DM může predikovat dlouhodobý klinický výsledek.

Pacienti a metody Z většiny koronárních bypassů provedených na OUH za posledních 8 let jsme zajistili okamžitou manipulaci a uložení reparační tepny (mamární arterie vnitřní). Střední část každé tepny se zbaví okolní tkáně, rozřízne se, krátkodobě se zafixuje formalínem a zalije se do parafínu. Zbytek tkáně je zmrazený. Tkáň je uložena v „Odense Artery Biobank“, kde se od roku 2008 nepřetržitě odebírají vzorky tkáně a krve od pacientů podstupujících CABG. Do naší biobanky zařadíme všechny pacienty s dostupnou tkání, což bude přibližně 180 pacientů s T2DM a 420 pacientů bez diabetu.

Etická hlediska Všichni účastníci poskytli písemný informovaný souhlas a studie byla schválena místními etickými komisemi (S-20100044). Klinické studie budou schváleny Regionálním vědeckým etickým výborem pro jižní Dánsko a všechny projekty budou hlášeny Dánské agentuře pro ochranu údajů.

Cílená analýza proteomu na arteriální tkáni Kvantitativní cílená analýza proteomu založená na hmotnostní spektrometrii bude provedena na malých množstvích arteriální tkáně pomocí modifikací našich nedávno vyvinutých protokolů. Budou použity čtyři řezy tkáně zalité v parafínu od každého pacienta a bude provedena cílená analýza proteomu na základě metod založených jak na proteomové analýze arteriální stěny (15, 17, 18), tak na multiplexní, cílené LC-MS analýze různých proteiny v jiných studiích (19, 20). Naše analýza proteomu je založena na materiálu z řezů stejné tkáně zalité v parafínu (FFPE) fixované formalínem, jaké se používají pro histologii. Budeme kvantifikovat peptidy odvozené z hojných proteinů, kde jsme dříve nacházeli změny u diabetu, tj. kolagen typu IV alfa 1 a alfa 2 řetězec, nidogen, biglykan, laminin a desmin a dále využijeme množství alfa-aktinu hladkého svalstva a vimentinu jako kontroly, protože u pacientů s T2DM nebyly dříve pozorovány žádné změny.

Z těchto výsledků vypočítáme složené "skóre rizika bazální membrány". Toto skóre je založeno na tom, že každý protein bazální membrány má hodnotu 0, pokud je koncentrace pod mediánem, a 1, pokud je koncentrace vyšší. Kombinované skóre bazální membrány se vypočítá jako součet každého z pěti proteinů, tj. může mít hodnoty mezi 0 a 5.

Kvantitativní histomorfometrické výpočty Budeme kvantifikovat objem tkáně fibrózy, obsah elastinu, obsah hladkých buněk a počet, jak bylo popsáno dříve Preil et al (15).

Plazmatická měření proteinů bazální membrány Plánujeme měřit množství cirkulujících fragmentů několika stejných proteinů, jak je uvedeno výše, tj. kolagenu typu IV (C4M3a, C4M), biglykanu (BGN) a lamininu a také fibulinu-1. Tyto testy byly vyvinuty společností Nordic Biosciences. Pilotní data na malé skupině našich kombinovaných diabetických a nediabetických pacientů (n=36) ukazují, že plazmatická hladina těchto složek dobře koreluje s HbA1c (C4M3a: r=0,39, p<0,05, C4M2: r=0,36, p<0,05, BGN: r=0,45, p<0,01, Signe Holm Nielsen a kol., Nordic Bioscience, nepublikováno).

Měření výsledků

Budeme zkoumat možné souvislosti mezi plazmatickými a tkáňovými koncentracemi specifických proteinů a několika klinickými parametry registrovanými v období 2-8 let po odběru arteriální tkáně. Následné parametry budou zahrnovat následující tři typy:

1. Parametry související s opravnou nádobou, tzn. Velikost lumenu LIMA v nejnovější koronární arteriografii provedené po operaci ve srovnání s velikostí lumenu LIMA při operaci
2. Parametry související se srdcem, tzn. IM, angina pectoris, re-CAD, srdeční selhání
3. Parametry související s výskytem generalizovaných kardiovaskulárních příhod a diabetických komplikací ve skupině diabetiků.

Máme k dispozici subfrakci operovaných pacientů s obnovenou koronární arteriografií (cca 35 %). Jsme si vědomi toho, že tato podskupina je zkreslená kvůli klinickým indikacím pro obnovenou arteriografii, což dává konkurenční důvody pro menší lumen LIMA při obnovené arteriografii. Z koronární arteriografie změříme velikost lumen této vnitřní prsní tepny a porovnáme ji s velikostí cévy v době odběru při operaci, kde ji lze histologicky změřit. Přestože tyto dvě metody nemusí být stejně kalibrované, předpokládáme, že zkreslení je u všech pacientů přibližně stejné. V této podskupině budeme měřit korelace mezi změnou průměru lumen (nebo okluzí) a plazmatickými a arteriálními měřeními vybraných proteinů.

Registrovány jsou tyto parametry klinického sledování: mortalita ze všech příčin, nefatální infarkt myokardu, koronární revaskularizace, srdeční zástava s resuscitací, hospitalizace pro srdeční selhání nebo nestabilní anginu pectoris, nefatální cévní mozková příhoda, progrese nefropatie nebo retinopatie. Progrese nefropatie je definována jako selhání ledvin (definované nutností chronické dialýzy), rozvoj makroalbuminurie nebo zdvojnásobení s-kreatininu (pouze nad 200 uM). Rozvoj retinopatie je definován jako proliferativní retinopatie nebo makulární edém, který vyžaduje laserovou terapii, vitrektomii nebo slepotu související s diabetem (Snellenova zraková ostrost pod 0,1). Úmrtí se získá z civilního registračního systému. Jednotlivé diagnózy, operace a kódy procedur jsou získány z The Danish National Patient Register. Poměr P-kreatininu a U-albuminu-kreatininu se získá z databáze laboratorních výsledků. Náš primární cílový bod je definován jako složenina srdečních příhod (IM, koronární revaskularizace, náhlá smrt, hospitalizace pro srdeční selhání nebo anginu pectoris). Očekává se, že četnost příhod bude 2 % ročně (ref), tj. přibližně 60 příhod ze všech našich 600 pacientů po průměrné době sledování 5 let.

Kromě toho budeme zkoumat souvislosti mezi hladinami měřených složek v plazmě a arteriální tkáni. Budeme také posuzovat, zda specifické proteiny souvisejí s prevalencí a výskytem diabetického mikrovaskulárního onemocnění, jak je definováno výše (tj. albuminurie, renální insuficience, retinopatie).

Klinická data týkající se debutu diabetu, medikace, biochemická data z doby operace a přidružená onemocnění jsou uložena v naší databázi v době operace.

Plán pro analýzy

1. Otestujte, zda je negativně spojeno „Skóre rizika proteinu suterénní membrány“.

   1. Velikost lumenu z koronární arteriografie provedené ve vztahu k operaci
   2. Poměr mezi velikostí lumenu z obnovené koronární arteriografie a té, která byla provedena ve vztahu k operaci pomocí jednorozměrných a vícerozměrných regresních analýz
2. Pomocí jednorozměrných a vícerozměrných Cox-regresních analýz otestujte, zda „Skóre rizika bazálních membránových proteinů“ předpovídá složený srdeční cíl (IM, koronární revaskularizace, náhlá smrt, hospitalizace pro srdeční selhání nebo anginu pectoris).
3. Pomocí jednorozměrných a vícerozměrných Coxových regresních analýz otestujte, zda „Skóre rizika bazálních membránových proteinů“ předpovídá široký složený cílový bod mortality ze všech příčin, závažných kardiovaskulárních příhod, progrese nefropatie nebo retinopatie

Statistická analýza, bioinformatika, odhad výkonu a úvahy o velikosti vzorku Data budou analyzována pomocí jednoduché korelační analýzy, ale také proporcionálních modelů rizik s úpravami pro dobu sledování a relevantní klinické parametry. Fisherův exaktní test a Chí-kvadrát testy budou použity k vyhodnocení četnosti příhod ve skupinách pacientů s vysokým nebo nízkým množstvím specifických proteinů. Tam, kde je to vhodné, bude ke korekci vícenásobného testování použita metoda Benjamini-Hochberg. Analýzy budou primárně provedeny v celkové skupině jedinců (n=600), u kterých budou testovány interakce podle přítomnosti T2DM, ale bude provedena i analýza podskupin u diabetických a nediabetických pacientů.

Výpočet velikosti vzorku pro primární cílový bod (kompozit srdečních příhod) se vypočítá následovně: Předpokládáme, že počet a podíl příhod bude: BM-skóre 0: n=50, události: 2 %, BM-skóre 1: n=100, události: 6 %, BM-skóre 2: n=150, události: 8 %, BM-skóre 3: n=150, události: 10 %, BM-skóre: n=100, události: 15 %, BM-skóre 5: n=50, události: 22 %. Výpočet potřebného počtu jedinců potřebuje najít statistický rozdíl mezi skupinou se skóre 0 a skupinou se skóre 5 je 50 v každé skupině.

Proveditelnost a organizace projektu Projekt je realizován v Centru individualizované medicíny arteriálních nemocí (CIMA), Centru klinické proteomiky a Oddělení klinické biochemie a farmakologie Fakultní nemocnice v Odense. Všechny nástroje a odborné znalosti jsou k dispozici. Byly vyvinuty metody pro proteomovou analýzu arteriální tkáně.

Očekávaný dopad výsledků a perspektivy Méně než deset předchozích prací po celém světě informovalo o použití analýzy proteomu na lidské arteriální tkáni, většinou s použitím materiálu od méně než 10 jedinců. Předchozí studie ukázaly, že histologické známky dysfunkční remodelace (hypertrofie) u malých cév velmi dobře predikují kardiovaskulární příhody (21). O strukturálních a molekulárních aspektech ve větších tepnách však není nic známo.

Výsledky navrhované studie mohou poukázat na to, zda množství arteriálních proteinů, o nichž je známo, že jsou u T2DM změněny, souvisí s rozvojem kardiovaskulárních příhod. Vytvoříme proto nové poznatky o důležitých molekulárních drahách, které se mohou kauzálně podílet na rozvoji arteriálních onemocnění. Identifikace takových proteinů je důležitá pro nalezení nových léčebných modalit a biomarkerů pro rozvoj kardiovaskulárních onemocnění.

Očekáváme, že budeme schopni prokázat, že kvantitativní změny specifických proteinů a skupin proteinů ve vaskulatuře a v plazmě predikují vývoj různých CVD výsledků. Taková zjištění budou silně podporovat celkovou hypotézu, že obecné arteriální změny u diabetu jsou důležité pro rozvoj kardiovaskulárních onemocnění.

Studium 2

Hypotéza Předpokládáme, že pacienti s T2DM mají dysfunkční karotidovou remodelaci s větší remodelací dovnitř a zmenšením průměru lumenu. Celkovým cílem je prozkoumat relativní význam různých kardiovaskulárních rizikových faktorů pro remodelaci karotické tepny hodnocených podle lumen karotidy, IMT a průřezové plochy (CA) u CCA, respektive bifurkace.

Konkrétní hypotézy jsou:

1. Bifurkace vs. CCA bude představovat více vnitřní remodelace, protože je náchylnější k ateroskleróze
2. Glukózová intolerance a ve vyšší míře T2DM jsou spojeny s vyšším stupněm vnitřní remodelace
3. Tento vyšší stupeň vnitřní remodelace je spojen se zvýšenou arteriální tuhostí hodnocenou pomocí cfPWV a změnami v lamina basalis hodnocenými vybranými markery

Pacienti a metody Tato studie je dílčí studií k velké studii Malmö Diet and Cancer Study, ve které byl ultrazvuk karotid proveden u 3426 švédských mužů a žen středního věku v letech 1991-94 (základní hodnota) a znovu v letech 2007-12 (přezkoumání) .

Statistická analýza, bioinformatika, odhad síly a úvahy o velikosti vzorku V několika regresních analýzách budeme testovat souvislost mezi

1. KV rizikové faktory a IMT, lumen, CA a distenzibilita u CCA a bifurkace na počátku
2. KV rizikové faktory a IMT, lumen, CA a roztažnost v CCA a bifurkace při opětovném vyšetření
3. Změny v KV rizikových faktorech a změny v IMT, lumen, CA a distenzibilitě v CCA a bifurkace mezi výchozí hodnotou a opakovaným vyšetřením
4. Sérové ​​hladiny vybraných markerů změn lamina basalis a KV rizikových faktorů, cfPWV i IMT, lumen, CA a roztažnosti v CCA a bifurkace při opětovném vyšetření
5. Test na pohlaví, glykémii nalačno, T2DM, distenzibilitu CCA, cfPWV a vybrané markery změn interakce lamina basalis na výše uvedených asociacích.

Proveditelnost a organizace projektu Tento projekt bude realizován v Centru pro individualizovanou medicínu arteriálních nemocí (CIMA), Centru klinické proteomiky a Oddělení klinické biochemie a farmakologie Fakultní nemocnice Odense, Odense, Dánsko. Všechny nástroje jsou dostupné a odborné znalosti jsou dostupné.

Očekávaný dopad výsledků a perspektivy Výsledky studie 2 mohou přinést nové poznatky a hlubší pochopení toho, jak T2DM ovlivňuje krční tepnu, stupeň vnitřní remodelace a redukci lumenu. To by mohlo změnit způsob, jakým léčíme diabetické pacienty s aterosklerózou karotidy, protože tito pacienti jsou vystaveni vysokému riziku rozvoje totální stenózy karotické tepny. Znalost patogeneze je klíčem k časnějšímu zásahu a snížení rizika pro pacienta.

Pokud jde o studie 1 a 2

Praktické provedení studie 1 a 2 Uchazeč se zúčastní analýzy proteomu a histomorfometrické analýzy tkáně. Veškeré odborné znalosti a vybavení jsou k dispozici na Oddělení klinické biochemie a farmakologie Fakultní nemocnice v Odense. Analýzu dat provede žadatel a publikace bude primárně psát žadatel jako první autor. Žadatel změří lumen společných krčních tepen a karotického bulbu pomocí uložených nahrávek kinosmyčky.

Očekávané publikace ve studii 1 a 2

1. Změny v arteriálních a plasmatických matrixových proteinech ve vztahu k rozvoji LIMA-průměrů po CABG (Autoři: Thorsen, AF, Overgaard, M, Nordic Bioscience, Olsen, MH, Rasmussen, LM)
2. Změny v arteriálních a plasmatických matrixových proteinech ve vztahu ke kardiovaskulární mortalitě, Analýza proteomu ve vztahu k výsledku po CABG (Autoři: Thorsen, AF, Nordic Bioscience, Olsen, MH, Overgaard, M, Rasmussen, LM)
3. Vliv glukózové intolerance a zjevného diabetu na ztuhnutí tepen, aterosklerotické plaky a remodelaci karotických tepen (Autoři: Thorsen, AF, Malmø-výzkumníci, Rasmussen, LM, Olsen, MH) Tyto návrhy se mohou změnit v závislosti na vývoji vyšetřování.

Časový harmonogram

června 2018 Zahájit analýzu proteomu ve studii 1. listopadu 2018 Zahájit analýzu dat ve studii 2. června 2019 Dokončit studium 2. prosince 2019 Dokončit analýzu proteomu ve studii 1. prosince 2019 Zahájit analýzu dat ve studiu 1. prosince 2020 Dokončit studium 1. ledna až června 2021 Dokončit doktorandské studium

Reference

1. Gu K, Cowie CC, Harris MI. Úmrtnost u dospělých s diabetem a bez diabetu v národní kohortě populace USA, 1971-1993. Péče o diabetes. 1998;21(7):1138-45.
2. Wild S, Roglic G, Green A, Sicree R, King H. Globální prevalence diabetu: odhady pro rok 2000 a projekce pro rok 2030. Péče o diabetes. 2004;27(5):1047-53.
3. Ergul A, Kelly-Cobbs A, Abdalla M, Fagan SC. Cerebrovaskulární komplikace diabetu: zaměření na mrtvici. Cíle léků na endokrinní, metabolické a imunitní poruchy. 2012;12(2):148-58.
4. Franco OH, Steyerberg EW, Hu FB, Mackenbach J, Nusselder W. Asociace diabetes mellitus s celkovou očekávanou délkou života a očekávanou délkou života s kardiovaskulárním onemocněním a bez něj. Arch Intern Med. 2007;167(11):1145-51.
5. Ellis TP, Choudhury RH, Kaul K, Chopra M, Kohner EM, Tarr JM, et al. Diabetická retinopatie a ateroskleróza: existuje souvislost? Aktuální recenze diabetu. 2013;9(2):146-60.
6. Jensen LO, Thayssen P, Mintz GS, Maeng M, Junker A, Galloe A a kol. Intravaskulární ultrazvukové hodnocení remodelace a zátěže plátem referenčního segmentu u pacientů s diabetem 2. typu. Evropský srdeční deník. 2007;28(14):1759-64.
7. Bruno RM, Penno G, Daniele G, Pucci L, Lucchesi D, Stea F a kol. Diabetes mellitus 2. typu zhoršuje arteriální tuhost u hypertoniků prostřednictvím endoteliální dysfunkce. Diabetologie. 2012;55(6):1847-55.
8. Holzmann MJ, Rathsman B, Eliasson B, Kuhl J, Svensson AM, Nystrom T a kol. Dlouhodobá prognóza u pacientů s diabetes mellitus 1. a 2. typu po aortokoronárním bypassu. Journal of the American College of Cardiology. 2015;65(16):1644-52.
9. Leavitt BJ, Sheppard L, Maloney C, Clough RA, Braxton JH, Charlesworth DC a kol. Vliv diabetu a souvisejících stavů na dlouhodobé přežití po operaci bypassu koronární artérie. Oběh. 2004;110(11 Suppl 1):II41-4.
10. Skov V, Knudsen S, Olesen M, Hansen ML, Rasmussen LM. Globální profilování genové exprese zobrazuje síť dysregulovaných genů v neaterosklerotické arteriální tkáni pacientů s diabetem 2. typu. Kardiovaskulární diabetologie. 2012;11:15.
11. Cangemi C, Skov V, Poulsen MK, Funder J, Twal WO, Gall MA a kol. Fibulin-1 je marker pro změny arteriální extracelulární matrix u diabetu 2. typu. Klinická chemie. 2011;57(11):1556-65.
12. Cangemi C, Hansen ML, Argraves WS, Rasmussen LM. Fibuliny a jejich role v kardiovaskulární biologii a onemocnění. Pokroky v klinické chemii. 2014;67:245-65.
13. Hansen ML, Rasmussen LM. Asociace mezi plazmatickým fibulinem-1, rychlostí pulzní vlny a diabetem u pacientů s ischemickou chorobou srdeční. Journal of diabetes a jeho komplikace. 2015;29(3):362-6.
14. Skov V, Cangemi C, Gram J, Christensen MM, Grodum E, Sorensen D a kol. Metformin, nikoli však rosiglitazon, tlumí zvyšující se plazmatické hladiny nového kardiovaskulárního markeru, fibulinu-1, u pacientů s diabetem 2. typu. Péče o diabetes. 2014;37(3):760-6.
15. Preil SA, Kristensen LP, Beck HC, Jensen PS, Nielsen PS, Steiniche T a kol. Kvantitativní analýza proteomu odhaluje zvýšený obsah proteinů bazální membrány v tepnách u pacientů s diabetem 2. typu a nižšími hladinami mezi uživateli metforminu. Cirkulace Kardiovaskulární genetika. 2015.
16. Rosvall M, Persson M, Ostling G, Nilsson PM, Melander O, Hedblad B a kol. Rizikové faktory pro progresi tloušťky karotické intimy-medie během 16letého období sledování: Malmö Diet and Cancer Study. Ateroskleróza. 2015;239(2):615-21.
17. Lyck Hansen M, Beck HC, Irmukhamedov A, Jensen PS, Olsen MH, Rasmussen LM. Analýza proteomu lidské arteriální tkáně odhaluje souvislosti mezi vaskulárním obsahem malých opakujících se proteoglykanů bohatých na leucin a rychlostí pulzních vln. Arterioskleróza, trombóza a vaskulární biologie. 2015;35(8):1896-903.
18. Faarvang AS, Rordam Preil SA, Nielsen PS, Beck HC, Kristensen LP, Rasmussen LM. Kouření je spojeno s nižším množstvím arteriálního kolagenu typu I a dekorinu. Ateroskleróza. 2016;247:201-6.
19. Kristensen LP, Larsen MR, Mickley H, Saaby L, Diederichsen AC, Lambrechtsen J a kol. Profilování plazmatických proteomů projevů aterosklerotického onemocnění odhaluje zvýšené hladiny cytoskeletálního proteinu vinkulinu. Journal of proteomics. 2014;101:141-53.
20. Ravnsborg T, Andersen LL, Trabjerg ND, Rasmussen LM, Jensen DM, Overgaard M. Multimarkerová predikce gestačního diabetes mellitus v prvním trimestru pomocí cílené hmotnostní spektrometrie. Diabetologie. 2016.
21. Mathiassen ON, Buus NH, Sihm I, Thybo NK, Morn B, Schroeder AP a kol. Struktura malých tepen je nezávislým prediktorem kardiovaskulárních příhod u esenciální hypertenze. Journal of hypertension. 2007;25(5):1021-6.