Arteriel sammensætning og kardiovaskulært udfald ved DIabetes (ACCODIS)

Ph.d.-projektbeskrivelse

Arterievæggen hos patienter med diabetes: Forudsiger ændringer i arterielle basalmembranproteiner fremtidig arteriel sygdom? Ændres ombygningsprocesser?

Ansøger: Anne-Sofie Faarvang Thorsen1, dr.med

Hovedvejleder: Professor Lars Melholt Rasmussen1

Medvejledere: Assoc. Professor Michael Hecht Olsen2

Assoc. Professor Martin Overgaard1

Samarbejdspartnere: Direktør Morten Karsdal, Nordic Bioscience3

Konsulent Lars Peter Riber4

Professor Peter Nilsson5

1: Afdeling for Klinisk Biokemi og Farmakologi, Odense Universitetshospital. 2: Intern Medicinsk Afdeling, Holbæk Hospital, Syddansk Universitet. 3: Nordic Biosciences 4: Afdeling for hjerte-, kar- og thoraxkirurgi, Odense Universitetshospital 5: Malmö Diet and Cancer Study, Malmø, Sverige

Projektbeskrivelse Hjerte-kar-sygdomme (CVD'er) forekommer hyppigt blandt personer med type 2-diabetes mellitus (T2DM), og dødeligheden efter hjerteindgreb og kardiovaskulære hændelser er signifikant øget ved T2DM. Vi har for nylig identificeret en række distinkte molekylære ændringer i ikke-aterosklerotiske dele af det arterielle træ ved diabetes, som repræsenterer elementer af den generaliserede diabetiske vaskulære patologi. Hvorvidt disse generaliserede diabetiske ændringer er relateret til udviklingen af ​​kliniske kardiovaskulære sygdomme vides ikke.

Overordnet hypotese Vores overordnede hypotese er, at specifikke arterielle proteinændringer, især relateret til basalmembranmolekyler som set i T2DM, efterfølges af dysfunktionel karremodellering (indad i stedet for udad). Sådanne ændringer kan give baggrunden for lumenreduktion i forhold til åreforkalkningsopbygning ved diabetes og forklare den høje forekomst af hjerte-kar-sygdomme blandt disse patienter.

Mål og studiedesign

I dette ph.d.-projekt vil vi teste to aspekter af denne hypotese med følgende formål:

1. Vi vil afgøre, om tilstedeværelsen af ​​et diabetisk arterielt proteinmønster forudsiger fremtidig forekomst af kardiovaskulære hændelser og forekomst af lumenreduktion og i sidste ende okklusion i reparationskarret (venstre indre brystarterie (LIMA)) efter bypass-operationer.

   Vi vil kvantificere specifikke arterielle basalmembranproteiner ved målrettet proteomanalyse i ikke-aterosklerotisk humant arterielt væv (reparationsarterien fra koronar by-pass operationer) og i plasma ved immunoassays fra en stor gruppe koronar bypass patienter med eller uden T2DM. Vi vil afgøre, om koncentrationen af ​​disse komponenter i en opfølgende undersøgelse forudsiger okklusion (klinisk proxy for lumenreduktion) af selve reparationskarret, forekomsten af ​​kardiovaskulære hændelser og/eller udviklingen af ​​diabetisk små- og store karsygdomme.

2. Vi vil afgøre, om der forekommer dysfunktionel arteriel remodeling hos T2DM eller personer med nedsat fastende glukose i forhold til plakopbygning i halspulsåren. Vi vil derfor identificere T2DMs indflydelse på sammenhængen mellem mængderne af åreforkalkning, remodellering (luminal størrelse og væg). tykkelse) og blodtryk hos tidligere scannede personer fra Malmö Diet and Cancer Study.

Perspektiv Resultaterne vil give vigtig information om, hvorvidt arterielle matrixforandringer ved diabetes er involveret i udviklingen af ​​kardiovaskulære symptomer og desuden afgøre, om der sker dysfunktionel remodeling ved diabetes.

En sådan patofysiologisk indsigt er en forudsætning for:

• bedre biomarkører til at diagnosticere og stratificere T2DM-patienter med risiko for arteriel sygdom
• udvikling af nye mål for behandling af storkar-komplikationer ved diabetes

Baggrund T2DM er en alvorlig sygdom, der resulterer i påvirkning af forskellige organsystemer, herunder det kardiovaskulære system (1). Diabetes er en global trussel, der påvirker alle dele af verden. Antallet af mennesker, der lider af T2DM er stigende og forventes at stige til mere end 350 millioner mennesker på verdensplan i år 2030 (2). Patienter med T2DM har øget risiko for morbiditet og mortalitet af hjerte-kar-sygdomme såsom slagtilfælde og akut myokardieinfarkt (AMI) og har en kortere forventet levetid (3, 4). Diabetes øger også risikoen for mikrovaskulære komplikationer såsom diabetisk retinopati (5).

Arterielt væv påvirkes af diabetes. Den arterielle patologi omfatter ændringer i den ekstracellulære matrix, øget arteriel stivhed, dysfunktionel remodellering (6), endotel dysfunktion og accelereret aterosklerose. Det antages, at arteriel stivhed hos diabetespatienter med hypertension korrelerer med endoteldysfunktion (7). Patienter med T2DM, der gennemgår en koronararterie-bypassoperation (CABG), har en øget risiko for død sammenlignet med ikke-diabetespatienter, som vist i det svenske SWEDEHEART-studie (8). Diabetes påvirker langtidsoverlevelsen efter CABG, og hvis patienten har diabetisk nyresygdom eller andre diabetiske vaskulære komplikationer er forskellen endnu større (9). De nøjagtige mekanismer, der forbinder T2DM til CVD'er, er ikke fuldt ud forstået. I de senere år har vi identificeret molekylære ændringer i arterievæggen hos mennesker med T2DM. Ved hjælp af mikroarray-teknikker til RNA-analyse fandt vi ud af, at specifikke molekylære veje blev ændret i arterielt væv ved diabetes. Disse dysregulerede veje omfattede insulinsignalering og matrixbiosyntese (10). Vi observerede også, at en basalmembran og elastin-relateret molekyle kaldet fibulin-1 er til stede i øgede mængder ved diabetes (11-13). Bagefter har vi været i stand til at vise, at øgede mængder af fibulin-1 i plasma korrelerer med kardiovaskulære sygdomme og forudsiger dødelighed (11, 13, 14). For nylig har vi brugt proteomanalyse af humane arterier til at finde arterielle proteiner med forskellige koncentrationer i diabetiske arterier (15).

Vi observerede, at de fleste basalmembranproteiner og visse proteiner relateret til fænotypiske tilstande i glat muskulatur i kombination med andre peptider er til stede i ændrede koncentrationer ved diabetes.

Som tidligere nævnt forstår vi kun nogle af de processer, der forbinder diabetes med udviklingen af ​​hjerte-kar-sygdomme. Vi mangler endnu at fastslå, om de ovennævnte resultater faktisk er involveret i udviklingen af ​​kliniske hjerte-kar-sygdomme.

Den overordnede hypotese for dette ph.d.-projekt er afbildet i ovenstående figur 1: Metaboliske og hormonelle faktorer fører til arterielle basalmembranændringer diffust i arterietræet. Dette fører til ændret evne af arterievæggen til at tilpasse sig ved udadgående ombygning som den normale konsekvens for åreforkalkning. Tværtimod forekommer indadgående krympning, hvilket fører til lumenobstruktioner. Generaliserede diabetiske arterielle matrixændringer kan således i sidste ende føre til arterielle lumenobstruktioner og kliniske symptomer, der kobler molekylære ændringer til udvikling af CVD'er.

Patienter med T2DM har forhøjede serumniveauer af fibulin-1, forhøjet ekspression af elementer fra lamina basalis i venstre indre brystarterie og øget glycation af kollagen i arterievæggen på grund af hyperglykæmi (13). Dette kan alt sammen bidrage til den øgede centrale arterielle stivhed observeret i T2DM, som kan vurderes ved carotis femoral pulse wave velocity (cfPWV). Normal aldring såvel som hypertension er, i halspulsårerne, forbundet med hypertrofisk ombygning med forøgelse af både lumendiameter og vægtykkelse, vurderet ved intima-medietykkelse (IMT). Vi har for nylig påvist, at progression af IMT er forbundet med summen af ​​kardiovaskulære risikofaktorer, men med forskellige bidrag fra de individuelle risikofaktorer i henholdsvis den fælles carotisarterie (CCA) og bifurkationen. Men IMT alene afspejler muligvis ikke fuldt ud omdannelsen af ​​halspulsåren, fordi lumen kan ændre sig anderledes sammenlignet med IMT som reaktion på visse kardiovaskulære risikofaktorer. IMT-progression er positivt forbundet med de fleste af de kardiovaskulære risikofaktorer, hvorimod øget lumen primært er forbundet med aldring og hypertension (16). Endvidere har koronar aterosklerose vist sig at føre til indadgående i stedet for udadgående remodellering i T2DM, hvilket kan være sekundært til de stivere arterier og forklare det omvendte resultat efter perkutan koronar intervention (PCI) i T2DM.

Ph.d.-studiet vil bestå af to selvstændige delstudier, som beskrevet nedenfor.

Studie 1

Hypotese Vi antager, at mængden af ​​basalmembranproteiner i arterielt væv og plasma fra patienter med T2DM kan forudsige langsigtede kliniske resultater.

Patienter og metoder Fra de fleste koronare bypass-operationer udført på OUH de sidste 8 år har vi sikret øjeblikkelig håndtering og opbevaring af reparationspulsåren (indre brystpulsåre). Den midterste del af hver arterie frigøres fra omgivende væv, skæres, korttidsformalin fikseres og indlejres i paraffin. Resten af ​​vævet fryses. Vævet opbevares i "Odense Artery Biobank", hvor vævs- og blodprøver fra patienter, der gennemgår CABG, er blevet indsamlet løbende siden 2008. Vi vil inkludere alle patienter med tilgængeligt væv i vores biobank, som vil være cirka 180 patienter med T2DM og 420 patienter uden diabetes.

Etiske overvejelser Alle deltagere gav skriftligt informeret samtykke, og undersøgelsen blev godkendt af de lokale etiske komiteer (S-20100044). De kliniske studier godkendes af Den Regionale Videnskabsetiske Komité for Syddanmark og alle projekter vil blive indberettet til Datatilsynet.

Målrettet proteomanalyse på arterielt væv Kvantitativ målrettet proteomanalyse baseret på massespektrometri vil blive udført på små mængder arterielt væv ved hjælp af modifikationer af vores nyligt udviklede protokoller. Fire sektioner af paraffin-indlejret væv fra hver patient vil blive brugt, og målrettet proteomanalyse vil blive udført baseret på metoderne baseret på både proteomanalyse af arterievæggen (15, 17, 18) og multipleks, målrettet LC-MS-analyse af forskellige proteiner i andre undersøgelser (19, 20). Vores proteomanalyse er baseret på materiale fra skiver af det samme formalinfikserede paraffinindlejrede (FFPE) væv som brugt til histologi. Vi vil kvantificere peptider afledt af rigelige proteiner, hvor vi tidligere har fundet ændringer i diabetes, dvs. type IV kollagen alfa 1 og alfa 2 kæde, nidogen, biglykan, laminin og desmin og vil desuden bruge mængden af ​​alfa-glat muskel actin og vimentin som kontroller, da der ikke tidligere er observeret ændringer hos patienter med T2DM.

Ud fra disse resultater vil vi beregne en sammensat "Basement membrane risk score". Denne score er baseret på, at hvert basalmembranprotein tæller for 0, hvis koncentrationen er under medianen og 1, hvis koncentrationen er over. Den kombinerede basalmembranscore beregnes som summen af ​​hver af de fem proteiner, dvs. den kan have værdier mellem 0 og 5.

Kvantitative histomorfometriske beregninger Vi vil kvantificere vævsvolumenet af fibrose, elastinindhold, glatte celleindhold og antal som tidligere beskrevet Preil et al (15).

Plasmamålinger af basalmembranproteiner Vi planlægger at måle mængden af ​​cirkulerende fragmenter af flere af de samme proteiner som nævnt ovenfor, det vil sige type IV kollagen (C4M3a, C4M), biglykan (BGN) og laminin samt fibulin-1. Disse analyser er udviklet af Nordic Biosciences. Pilotdata på en lille gruppe af vores kombinerede diabetiske og ikke-diabetiske patienter (n=36) viser, at plasmaniveauet af disse komponenter korrelerer godt med HbA1c (C4M3a: r=0,39, p<0,05, C4M2: r=0,36, p<0,05, BGN: r=0,45, p<0,01, Signe Holm Nielsen et al, Nordic Bioscience, upubliceret).

Resultatmålinger

Vi vil undersøge mulige sammenhænge mellem plasma- og vævskoncentrationer af de specifikke proteiner og flere kliniske parametre som registreret i en 2-8 års opfølgningsperiode efter høst af arterielt væv. Opfølgningsparametre vil omfatte følgende tre typer:

1. Parametre relateret til reparationsfartøjet, dvs. LIMA lumen størrelse i den seneste koronar arteriografi udført efter operationen sammenlignet med LIMA lumen størrelse ved operationen
2. Parametre relateret til hjertet, dvs. MI, angina, re-CAD, hjertesvigt
3. Parametre relateret til forekomsten af ​​generaliserede kardiovaskulære hændelser og diabetiske komplikationer i diabetikergruppen.

Vi har en underfraktion til rådighed af de opererede patienter med fornyet koronararteriografi (ca. 35 %). Vi er opmærksomme på, at denne undergruppe er partisk på grund af kliniske indikationer for fornyet arteriografi, der giver konkurrerende årsager til et mindre LIMA-lumen ved den fornyede arteriografi. Vi vil måle lumenstørrelsen af ​​denne indre brystarterie fra koronararteriografien og sammenligne den med størrelsen af ​​karret på høsttidspunktet ved operationen, hvor den kan måles ved histologi. Selvom de to metoder måske ikke er lige kalibrerede, antager vi, at bias er omtrent den samme hos alle patienter. I denne undergruppe vil vi måle korrelationer mellem lumendiameterændring (eller okklusion) og plasma- og arterielle mål af de udvalgte proteiner.

Følgende kliniske opfølgningsparametre er registreret: mortalitet af alle årsager, ikke-fatalt myokardieinfarkt, koronar revaskularisering, hjertestop med genoplivning, hospitalsindlæggelse for hjertesvigt eller ustabil angina pectoris, ikke-dødelig slagtilfælde, progression af nefropati eller retinopati. Progression af nefropati er defineret som nyresvigt (defineret ved behovet for kronisk dialyse), udvikling af makroalbuminuri eller fordobling af s-kreatinin (kun over 200 uM). Udvikling af retinopati er defineret som proliferativ retinopati eller makulaødem, der kræver laserterapi, vitrektomi eller diabetesrelateret blindhed (Snellen synsstyrke under 0,1). Død indhentes fra CPR-systemet. De enkelte diagnoser, operationer og procedurekoder hentes fra Landspatientregisteret. P-kreatinin og U-albumin-kreatinin-forhold opnås gennem laboratorieresultatdatabase. Vores primære endepunkt er defineret som en sammensætning af hjertehændelser (MI, koronar revaskularisering, pludselig død, hospitalsindlæggelse for hjertesvigt eller angina pectors). Hændelsesraten forventes at være 2 % årligt (ref), dvs. cirka 60 hændelser ud af alle vores 600 patienter efter den gennemsnitlige opfølgningstid på 5 år.

Desuden vil vi undersøge sammenhænge mellem plasma- og arterielle vævsniveauer af de målte komponenter. Vi vil også vurdere, om specifikke proteiner er relateret til prævalensen og forekomsten af ​​diabetisk mikrovaskulær sygdom som defineret ovenfor (dvs. albuminuri, nyreinsufficiens, retinopati).

Kliniske data vedrørende diabetesdebut, medicin, biokemiske data fra operationstidspunkt og følgesygdomme gemmes i vores database på operationstidspunktet.

Planlæg for analyser

1. Test om "Basement Membrane Protein Risk Score" er negativt forbundet med

   1. Lumenstørrelse fra koronararteriografien udført i forhold til operationen
   2. Forholdet mellem lumenstørrelse fra den fornyede koronararteriografi og den udførte i forhold til operationen ved hjælp af univariate og multivariate regressionsanalyser
2. Test om "Basement Membrane Proteins Risk Score" forudsiger det sammensatte hjerteendepunkt (MI, koronar revaskularisering, pludselig død, hospitalsindlæggelse for hjertesvigt eller angina pectors) ved hjælp af univariate og multivariate Cox-regressionsanalyser (primært endepunkt).
3. Test om "Basement Membrane Proteins Risk Score" forudsiger det brede sammensatte endepunkt af dødelighed af alle årsager, større kardiovaskulære hændelser, progression af nefropati eller retinopati ved hjælp af univariate og multivariate Cox-regressionsanalyser

Statistisk analyse, bioinformatik, estimering af effekt og prøvestørrelsesovervejelser Data vil blive analyseret ved hjælp af både simpel korrelationsanalyse, men også proportionale faremodeller med justeringer for opfølgningstid og relevante kliniske parametre. Fishers Exact test og Chi-square tests vil blive brugt til at evaluere hændelsesrater i grupper af patienter med høje eller lave mængder af specifikke proteiner. Benjamini-Hochberg-metoden vil blive brugt til at korrigere for multiple tests, hvor det er passende. Analyser vil primært blive udført i den samlede gruppe af individer (n=600), der tester for interaktioner ved tilstedeværelse af T2DM, men der vil også blive udført undergruppeanalyser hos diabetiske og ikke-diabetiske patienter.

Prøvestørrelsesberegning for det primære slutpunkt (sammensætning af hjertehændelser) beregnes som følger: Vi antager, at antallet og andelen af ​​hændelser vil være: BM-score 0: n=50, hændelser: 2 %, BM-score 1: n=100, begivenheder: 6 %, BM-score 2: n=150, begivenheder: 8 %, BM-score 3: n=150, begivenheder: 10 %, BM-score: n=100, begivenheder: 15 %, BM-score 5: n=50, begivenheder: 22 %. Beregning af det nødvendige antal individer skal finde en statistisk forskel mellem score 0-gruppen og score 5-gruppen er 50 i hver gruppe.

Feasibility og projektorganisering Projektet udføres på Center for Individualiseret Medicin ved Arterielle Sygdomme (CIMA), Center for Klinisk Proteomics og Klinisk Biokemisk og Farmakologisk Afdeling på Odense Universitetshospital. Alle instrumenter og ekspertise er tilgængelige. Metoder til proteomanalyse af arterielt væv er blevet udviklet.

Forventet effekt af resultater og perspektiv Mindre end ti tidligere artikler, verden over, har rapporteret om brugen af ​​proteomanalyse på humant arterielt væv, de fleste af dem med brug af materiale fra mindre end 10 individer. Tidligere undersøgelser har vist, at histologiske tegn på dysfunktionel remodeling (hypertrofi) i små kar forudsiger kardiovaskulære hændelser meget godt (21). Man ved dog intet om strukturelle og molekylære aspekter i større arterier.

Resultater fra den foreslåede undersøgelse kan pege på, om mængderne af arterielle proteiner, der vides at være ændret i T2DM, er forbundet med udviklingen af ​​kardiovaskulære hændelser. Derfor vil vi generere ny viden om vigtige molekylære veje, som kan være kausalt involveret i udviklingen af ​​arterielle sygdomme. Identifikationen af ​​sådanne proteiner er vigtig for at finde nye behandlingsmodaliteter og biomarkører for udvikling af hjerte-kar-sygdomme.

Vi forventer at kunne vise, at kvantitative ændringer af specifikke proteiner og grupper af proteiner i vaskulaturen og i plasma forudsiger udviklingen af ​​forskellige CVD-udfald. Sådanne fund vil stærkt understøtte den overordnede hypotese om, at generelle arterielle ændringer i diabetes er vigtige for udviklingen af ​​hjerte-kar-sygdomme.

Studie 2

Hypotese Vi antager, at patienter med T2DM har dysfunktionel carotis remodeling med mere indadgående remodeling og reduktion af lumen diameter. Det overordnede formål er at undersøge den relative betydning af forskellige kardiovaskulære risikofaktorer for ombygning af halspulsåren vurderet ud fra carotis lumen, IMT og tværsnitsareal (CA) i henholdsvis CCA og bifurkationen.

De specifikke hypoteser er:

1. Bifurkationen vs. CCA vil præsentere mere indadrettet ombygning, da den er mere tilbøjelig til aterosklerose
2. Glucoseintolerance og i højere grad T2DM er forbundet med en højere grad af indadvendt remodeling
3. Denne højere grad af indadgående ombygning er forbundet med øget arteriel stivhed vurderet ved cfPWV og ændringer i lamina basalis vurderet af udvalgte markører

Patienter og metoder Dette studie er et delstudie til det store Malmö Diet and Cancer Study, hvor carotisarterie-ultralyd blev udført hos 3426 midaldrende svenske mænd og kvinder i 1991-94 (baseline) og igen i 2007-12 (genundersøgelse) .

Statistisk analyse, bioinformatik, estimering af magt og prøvestørrelse overvejelser I multiple regressionsanalyser vil vi teste sammenhængen mellem

1. CV-risikofaktorer og IMT, lumen, CA og udspilning i CCA og bifurkationen ved baseline
2. CV-risikofaktorer og IMT, lumen, CA og udspilning i CCA og bifurkationen ved re-eksamen
3. Ændringer i CV-risikofaktorer og ændringer i IMT, lumen, CA og udspilning i CCA og bifurkationen mellem baseline og genundersøgelse
4. Serumniveauer af udvalgte markører for ændringer i lamina basalis og CV risikofaktorer, cfPWV samt IMT, lumen, CA og udspilning i CCA og bifurkationen ved genundersøgelse
5. Test for køn, fastende glukose, T2DM, CCA-udvidenhed, cfPWV og udvalgte markører for ændringer i lamina basalis interaktion på ovenstående associationer.

Feasibility og projektorganisering Dette projekt vil blive udført på Center for Individualiseret Medicin ved Arterielle Sygdomme (CIMA), Center for Klinisk Proteomics og Klinisk Biokemisk og Farmakologisk Afdeling på Odense Universitetshospital, Odense. Alle instrumenter er tilgængelige, og ekspertise er tilgængelig.

Forventet effekt af resultater og perspektiv Resultaterne fra undersøgelse 2 kan generere ny viden og en dybere forståelse af, hvordan T2DM påvirker halspulsåren, graden af ​​indadgående ombygning og lumenreduktion. Dette kan ændre den måde, vi behandler diabetespatienter med åreforkalkning i halsen, da disse patienter har høj risiko for at udvikle total stenose af halspulsåren. Viden om patogenesen bag er nøglen til tidligere intervention og reduktion af risiko for patienten.

Angående både undersøgelse 1 og 2

Praktisk udførelse af undersøgelse 1 og 2 Ansøgeren vil deltage i proteomanalyse og histomorfometrisk analyse af vævet. Al ekspertise og udstyr er tilgængeligt på Klinisk Biokemi og Farmakologisk Afdeling, Odense Universitetshospital. Dataanalyse vil blive udført af ansøger og publikationer vil primært blive skrevet af ansøger som førsteforfatter. Ansøgeren vil måle lumen af ​​de fælles halspulsårer og af halspulsåren ved hjælp af lagrede cine-loop-optagelser.

Forventede publikationer i undersøgelse 1 og 2

1. Ændringer i arterielle og plasmamatrixproteiner i forhold til udvikling af LIMA-diametre efter CABG (Forfattere: Thorsen, AF, Overgaard, M, Nordic Bioscience, Olsen, MH, Rasmussen, LM)
2. Ændringer i arterielle og plasmamatrixproteiner i forhold til kardiovaskulær dødelighed, Proteomanalyse i forhold til resultat efter CABG (Forfattere: Thorsen, AF, Nordic Bioscience, Olsen, MH, Overgaard, M, Rasmussen, LM)
3. Indvirkningen af ​​glukoseintolerance og åbenlys diabetes på arteriel stivning, aterosklerotiske plaques og ombygning af halspulsåren (Forfattere: Thorsen, AF, Malmø-forskere, Rasmussen, LM, Olsen, MH) Disse forslag kan ændres afhængigt af udviklingen af undersøgelser.

Tidsplan

Juni 2018 Start proteomanalyse i undersøgelse 1. november 2018 Start dataanalyse i undersøgelse 2. juni 2019 Komplet undersøgelse 2. december 2019 Komplet proteomanalyse i undersøgelse 1. december 2019 Begynd dataanalyse i undersøgelse 1. december 2020 Færdig undersøgelse 1. januar-juni 2021 Komplet PhD-studie

Referencer

1. Gu K, Cowie CC, Harris MI. Dødelighed hos voksne med og uden diabetes i en national kohorte af den amerikanske befolkning, 1971-1993. Diabetes pleje. 1998;21(7):1138-45.
2. Wild S, Roglic G, Green A, Sicree R, King H. Global forekomst af diabetes: estimater for år 2000 og fremskrivninger for 2030. Diabetes pleje. 2004;27(5):1047-53.
3. Ergul A, Kelly-Cobbs A, Abdalla M, Fagan SC. Cerebrovaskulære komplikationer af diabetes: fokus på slagtilfælde. Endokrine, metaboliske og immunforstyrrelser lægemiddelmål. 2012;12(2):148-58.
4. Franco OH, Steyerberg EW, Hu FB, Mackenbach J, Nusselder W. Sammenslutninger af diabetes mellitus med total forventet levetid og forventet levetid med og uden hjerte-kar-sygdom. Arch Intern Med. 2007;167(11):1145-51.
5. Ellis TP, Choudhury RH, Kaul K, Chopra M, Kohner EM, Tarr JM, et al. Diabetisk retinopati og åreforkalkning: er der en sammenhæng? Aktuelle diabetes anmeldelser. 2013;9(2):146-60.
6. Jensen LO, Thayssen P, Mintz GS, Maeng M, Junker A, Galloe A, et al. Intravaskulær ultralydsvurdering af remodeling og referencesegmentplakbyrde hos type-2 diabetespatienter. Europæisk hjertejournal. 2007;28(14):1759-64.
7. Bruno RM, Penno G, Daniele G, Pucci L, Lucchesi D, Stea F, et al. Type 2-diabetes mellitus forværrer arteriel stivhed hos hypertensive patienter på grund af endothelial dysfunktion. Diabetologia. 2012;55(6):1847-55.
8. Holzmann MJ, Rathsman B, Eliasson B, Kuhl J, Svensson AM, Nystrom T, et al. Langtidsprognose hos patienter med type 1 og 2 diabetes mellitus efter koronar bypasstransplantation. Journal of American College of Cardiology. 2015;65(16):1644-52.
9. Leavitt BJ, Sheppard L, Maloney C, Clough RA, Braxton JH, Charlesworth DC, et al. Effekt af diabetes og associerede tilstande på langsigtet overlevelse efter koronar bypassoperation. Cirkulation. 2004;110(11 Suppl 1):II41-4.
10. Skov V, Knudsen S, Olesen M, Hansen ML, Rasmussen LM. Global genekspressionsprofilering viser et netværk af dysregulerede gener i ikke-aterosklerotisk arterielt væv fra patienter med type 2-diabetes. Kardiovaskulær diabetologi. 2012;11:15.
11. Cangemi C, Skov V, Poulsen MK, Funder J, Twal WO, Gall MA, et al. Fibulin-1 er en markør for arterielle ekstracellulære matrixændringer ved type 2-diabetes. Klinisk kemi. 2011;57(11):1556-65.
12. Cangemi C, Hansen ML, Argraves WS, Rasmussen LM. Fibuliner og deres rolle i kardiovaskulær biologi og sygdom. Fremskridt inden for klinisk kemi. 2014;67:245-65.
13. Hansen ML, Rasmussen LM. Forbindelser mellem plasma fibulin-1, pulsbølgehastighed og diabetes hos patienter med koronar hjertesygdom. Journal of diabetes og dens komplikationer. 2015;29(3):362-6.
14. Skov V, Cangemi C, Gram J, Christensen MM, Grodum E, Sorensen D, et al. Metformin, men ikke rosiglitazon, dæmper de stigende plasmaniveauer af en ny kardiovaskulær markør, fibulin-1, hos patienter med type 2-diabetes. Diabetes pleje. 2014;37(3):760-6.
15. Preil SA, Kristensen LP, Beck HC, Jensen PS, Nielsen PS, Steiniche T, et al. Kvantitativ proteomanalyse afslører øget indhold af kældermembranproteiner i arterier fra patienter med type 2-diabetes og lavere niveauer blandt metforminbrugere. Cirkulation Kardiovaskulær genetik. 2015.
16. Rosvall M, Persson M, Ostling G, Nilsson PM, Melander O, Hedblad B, et al. Risikofaktorer for progression af carotis intima-media tykkelse over en 16-årig opfølgningsperiode: Malmø Diet and Cancer Study. Åreforkalkning. 2015;239(2):615-21.
17. Lyck Hansen M, Beck HC, Irmukhamedov A, Jensen PS, Olsen MH, Rasmussen LM. Proteomanalyse af menneskeligt arterielt væv afslører associationer mellem det vaskulære indhold af små leucinrige gentagne proteoglycaner og pulsbølgehastighed. Arteriosklerose, trombose og vaskulær biologi. 2015;35(8):1896-903.
18. Faarvang AS, Rordam Preil SA, Nielsen PS, Beck HC, Kristensen LP, Rasmussen LM. Rygning er forbundet med lavere mængder af arteriel type I kollagen og decorin. Åreforkalkning. 2016;247:201-6.
19. Kristensen LP, Larsen MR, Mickley H, Saaby L, Diederichsen AC, Lambrechtsen J, et al. Plasmaproteomprofilering af aterosklerotiske sygdomsmanifestationer afslører forhøjede niveauer af cytoskeletproteinet vinculin. Journal of proteomics. 2014;101:141-53.
20. Ravnsborg T, Andersen LL, Trabjerg ND, Rasmussen LM, Jensen DM, Overgaard M. First-trimester multimarker prediction of gestational diabetes mellitus using targeted mass spectrometri. Diabetologia. 2016.
21. Mathiassen ON, Buus NH, Sihm I, Thybo NK, Morn B, Schroeder AP, et al. Lille arteriestruktur er en uafhængig prædiktor for kardiovaskulære hændelser ved essentiel hypertension. Journal of hypertension. 2007;25(5):1021-6.